• 한국동물위생학회지
• /
• 제22권4호
• /
• pp.363-370
• /
• 1999

돼지 호흡기 생식기증 바이러스(porcine reproductive and respiratory syndrome virus: PRRSV) 감염이 의심되는 농장으로부터 수집된 혈청가검물 646개로부터 MARC-145 cell을 이용하여 PRRSV 분리를 시도한 바 MARC-145 세포단층상에 세포변성효과(cytopathic effects : CPE)를 나타내는 바이러스 36주를 분리하였다. 분리된 36주가 PRRSV인지 여부를 확인하기 위하여 PRRSV를 실험적으로 접종한 혈청을 이용하여 간접형광항체시험과 혈청중화시험을 실시한 결과 36주 모두가 PRRSV로 동정되었다. 혈청학적인 동정법과 더불어 reverse-transcription polymerase chain reaction을 이용하여 PRRSV open reading frame 5(ORF5)의 유전자를 증폭한 결과 선발된 6주 모두에서 80bp의 flanking sequencing를 포함하여 약 680bp의 ORF5의 유전자를 증폭할 수 있었다.

• Toxicological Research
• /
• 제13권1_2호
• /
• pp.39-48
• /
• 1997

Cyclophosphamide(25, 50 or 100 mg/kg), orally administered to male Sprague-Dawley rats, caused a time- and dose-dependent thymic atrophy. In the light microscopic examination of the atrophic thymus, thymocytes with condensed or fragmented nucleus were multifocally observed in the cortical region, started to increase 8 hr after CPA treatment and reached to the maximal level at 16 hr, although such cells were not seen after 48 hr when the severe depletion of thymocytes were marked. In agarose gel electrophoresis to analyze the DNA changes, DNA extracted from atrophic thymus showed a oligonucleosomal laddering at the corresponding time to morphological changes. In an additional supportive experiment, thymocytes showing morphological changes, nuclear condensation or apoptotic body, exhibited a positive reaction to immunoperoxidase staining using in situ apoptosis detection kit. Separately, agarose gel electrophoresis of DNA from bone .marrow cells was performed to investigate the involvement of bone marrow cells in the process of thymocyte apoptosis. Although DNA laddering was slightly increased 2 and 4 hr after treatment, no clear correlation was inferred. Taken togather, it is concluded that thymocytes showing morphological changes in thymic atrophy induced by cyclophosphamide administration represent an apoptosis having biochemical nature of programmed cell death.

• 한국안광학회지
• /
• 제7권2호
• /
• pp.189-195
• /
• 2002

점안액 보존제 성분으로 이용되는 Benzalkonium Chloride(BAC)가 배양 각막 상피세포에 미치는 영향을 조사하기 위해 본 연구를 시행하였다. BAC를 세포에 0.0001%~0.01%로 15분 동안 처리하여 24시간 후 회복 효과를 조사하였다. MTT assay를 이용하여 세포 생존율을 산정하고 Hoechst 33342로 염색질 응축을 조사하였다. Fas 발현 여부를 조사하기 위해 western blot과 immunocytochemistry를 이용하였으며 DNA fragmentation은 agarose gel을 이용한 전기영동을 시행하였다. BAC를 0.005% 이상 처리하면 세포괴사가 일어나는 반면에 저농도의 BAC는 세포고사를 유도하는 것으로 나타났으며 BAC로 Fas 발현이 유도될 수 있다는 것을 보여주고 있다. 본 연구를 통해 점안액의 대표적인 보존제인 BAC의 부작용에 대한 각막세포 차원의 연구가 필요하며 세포독성이 없는 새로운 보존제의 개발이 필요한 것으로 나타났다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
• /
• 제16권16호
• /
• pp.7053-7060
• /
• 2015

In the present work, novel orange peel was extracted with 100%EtOH (ethanol) and fractionated into four fractions namely F1, F2, F3, F4 which were eluted from paper chromatographs using 100%EtOH, 80%EtOH, 50%EtOH and pure water respectively. The crude extract and its four fractions were evaluated for their total polyphenol content (TPC), total flavonoid content (TFC) and radical scavenging activity using DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) assay. Their cytotoxic activity using WST assay and DNA damage by agarose gel electrophoresis were also evaluated in a human leukemia HL-60 cell line. The findings revealed that F4 had the highest TPC followed by crude extract, F2, F3 and F1. However, the crude extract had the highest TFC followed by F4, F3, F2, and F1. Depending on the values of $EC_{50}$ and trolox equivalent antioxidant capacity, F4 possessed the strongest antioxidant activity while F1 and F2 displayed weak antioxidant activity. Further, incubation HL-60 cells with extract/fractions for 24h caused an inhibition of cell viability in a concentration-dependent manner. F3 and F4 exhibited a high antiproliferative activity with a narrow range of $IC_{50}$ values ($45.9-48.9{\mu}g/ml$). Crude extract exhibited the weakest antiproliferative activity with an $IC_{50}$ value of $314.89{\mu}g/ml$. Analysis of DNA fragmentation displayed DNA degradation in the form of a smear-type pattern upon agarose gel after incubation of HL-60 cells with F3 and F4 for 6 h. Overall, F3 and F4 appear to be good sources of phytochemicals with antioxidant and potential anticancer activities.

• 미생물학회지
• /
• 제34권1_2호
• /
• pp.43-50
• /
• 1998

여러가지 환경 stress에서 유도되는 폐렴구균 열충격단백질 GroEL의 특성에 대하여 검토하였다. 비병원성인 폐렴구균(Streptococcusa pneumoniae)을 사용하여 stress 조건을 설정하고 이 설정된 조건에서 stress에 의해 유도되는 단백질을 $^{35}S$]-methionine으로 표지하여 autoradiography를 실시하였다. 열충격을 가했을 때 유도되는 단백질(65, 73, 84-kDa 등) 중 65 kDa의 단백질(hsp65)을 DEAE-Sepharose ion exchange 및 ATP-agarose affinity chromatography를 이용하여 분리 정제하였으며 hsp65에 대해 생성된 항체를 이용하여 immunoblot을 실시하였을 때 약 60 kDa의 대장균 단백질과 반응하였으며 정제된 폐렴구균 hsp65가 대장균의 anti-GroEL monoclonal 항체와 반응함으로써 폐렴구균 hsp65가 대장균GroEL과 유사한 단백질임을 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제37권2호
• /
• pp.105-109
• /
• 2009

단백질 인산화를 통한 세포내 신호전달기구 중 serine/threonine kinase에 속하는 Akt/PKB는 세포 생존과 사멸, 당대사 등을 조절하는 것으로 알려져 있다. 이러한 이유로, Akt/PKB 단백질은 천연물질들로부터 항암제를 탐색하기 위한 한 가지 target으로 사용되어 왔다. 본 연구에서는 Akt/PKB 단백질을 대량으로 생산하기 위하여 대장균의 단백질 발현 시스템을 이용하여 human Akt/PKB 단백질을 발현시켰다. 대장균에서 대량 발현된 Akt는 일반적인 조건에서는 inclusion body를 형성하였다. 배양온도 $27^{\circ}C$에서 0.01-0.09 mM IPTG로 발현 유도 시 발현된 human Akt/PKB 단백질 상당 부분이 가용화 되었다. 발현된 Akt kinase를 $Ni^{2+}$-NTA agarose column으로 정제하고, anti-Akt antibody를 이용하여 정제된 단백질이 Akt kinase 임을 확인하였다. 정제된 human Akt/PKB 단백질은 세포추출물에 존재하는 인산화 단백질을 이용하여 in vitro에서 인산화 되었으며, 인산화된 활성형 human Akt/PKB protein kinase는 human Akt/PKB protein kinase 특이 형광 peptide를 특이적으로 인산화하였다.

• 생명과학회지
• /
• 제18권8호
• /
• pp.1036-1041
• /
• 2008

$30{\sim}70%$ 황산암모늄 분획, Fast Q 음이온 교환수지 및 Phenyl Agarose 수지를 통해 돼지간유래의 methenyltetrahydrofolate synthetase를 정제하였으며 정제도는 119이었다. SDS-PAGE 및 HPLC를 이용한 gel permeation column chromatography에 의해 이 효소는 분자량이 23 kDa인 단량체로 확인되었다. 최적 온도와 최적 pH는 각각 $35^{\circ}C$ 와 6.5이었다. 이 효소는 tetranitromethane 및 1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl)-carbodiimide (EDC)에 의해서만 활성이 감소되었는데, 이는 티로신과 카르복실산이 효소의 활성부위에 존재한다는 것을 나타낸다. 활성부위의 pH 실험으로부터 2개의 티로신이 기질의 결합에 관여하며 하나의 카르복실기가 촉매반응에 관여한다는 사실이 관찰되었다. 따라서 이 효소는 2개의 티로신이 ATP와 5-formylTHF과 결합하며 하나의 카르복실기가 일반염기로서 촉매한다는 것을 알 수 있다.

• BMB Reports
• /
• 제31권3호
• /
• pp.274-280
• /
• 1998

An inositol monophosphatase (IMPase) was purified to homogeneity from rat duodenal mucosa for the first time and its enzymatic properties were investigated. Rat duodenal mucosa peculiarly exhibited the highest IMPase activity among various rat tissues examined. By means of ammonium sulfate precipitation, followed by Q-Sepharose, polylysine agarose, reactive-red agarose column chromatography, Uno-Q FPLC, and Bio-Silect FPLC, duodenal IMPase was purified 223-fold to a specific activity of 13.6 U/mg protein. The molecular mass of the native enzyme was estimated to be 48,000 Da on gel filtration. The subunit molecular mass was determined by SDS-PAGE to be 24,000 Da. These results indicate that duodenal IMPase is a dime ric protein made up of identical subunits. Rat duodenal IMPase has distinct properties from brain IMPase. It has a broad spectrum of substrate specificity and is insensitive to $Li^+$. Duodenal IMPase does not absolutely require $Mg^{2+}$ for its catalytic activity. Furthermore, duodenal IMPase is less stable to heat than brain enzyme. It is suggested that the rat duodenal mucosa needs a large amount of IMPase whose properties are quite different from that of the brain enzyme.

• 한국잠사곤충학회지
• /
• 제13권2호
• /
• pp.141-143
• /
• 1971

누에의 성장에 따른 단백질분획의 변화 및 핵다각체 이병잠의 체액의 단백질분획의 변화를 agarose gel을 지지체로 한 전기영동에 의하여 조사하였던 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 4령기에는 4개의 단백질 분획이 나타났으며 령기가 진전됨에 따라서 염색의 농도가 짙어졌다. 2. 5령 1일에는 5개의 분획이, 5영 4일에는 5개의 분획이 나타났다. 3. 5영 5일 이후의 건강잠의 체액중에는 양극쪽으로 이동하는 7개의 단백질 분획과 음극쪽으로 이동하는 1개의 분획이 분리되었다. 4. 핵다각체 Virus를 첨식시킨 이병잠의 체액단백질 중에서 5령 6일 7일에는 D,E,F 분획이 증가되는 경향이 있고 5령 8일에는 A,B,D,E 분획은 소실되고 F분획은 감소되는 경향이 있다.

• Journal of Dairy Science and Biotechnology
• /
• 제29권1호
• /
• pp.49-54
• /
• 2011

담즙산 분해효소(Bile salt hydrolase, EC 3.5.1.24) 활성은 담즙산의 카르복실기와 결합되어 있는 아미노기(glycine or taurine)와의 amide 결합을 끊는 작용을 하며, 이 효소 활성은 사람이나 동물의 장내 미생물들에서 널리 분포하고 있다. 노인 분변으로부터 분리한 여러 균주의 Enterococcus faecalis중에서 BSH activity가 가장 높은 CU30-2를 선발하였다. BSH 유전자를 pET22b expression vector에 클로닝하여 Escherichia coli BL21(DE3) Gold를 이용하여 단백질을 발현하였다. 6x His-tag이 있는 BSH 효소를 $Ni^+$-NTA agarose column을 이용하여 분리 정제하였고, 6가지의 다른 담즙산염을 이용하여 기질 특이성을 비교하였다. E. faecalis CU30-2의 BSH 효소는 glycine이 결합된 담즙산염에 대한 효소활성이 taurine이 결합된 것에 대한 활성보다 약 50배 정도 높게 나타났다. 이 효소의 최적 pH와 온도는 각각 7.0과 40$^{\circ}C$로 확인되었다.