• KSBB Journal
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• 제8권3호
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• pp.287-294
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• 1993

사람의 뇨로부터 유용한 단백질을 동시에 분리하 기 위한 목적으로 효과적인 통합 분리정제 공정이 고안되었다. Ultrafiltration 방법을 이용한 농축과정 과 pH침전법을 전처리 단계로 사용하였고, 이어서 g gel filtration과 흡착, 이온교환, 친화, 그리고 역상 C column을 선택적으로 혼합한 chromatography를 수행하였다. 이 공정으로 정제한 urokinase, epider­m mal growth factor, albumin은 각각 SDS-poly­a acrylamide gel 전기이동상에서 단일의 단백질 띠로 이동하였고, 자신의 단백질 활성을 유지하고 있었다. 이들 세 가지 목적 단백질의 전체 수율은 각각 48 % %, 17%, 46%로 나타났다.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제22권3호
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• pp.274-278
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• 1999

Expression of the active urease of the enterobacterium, Klebsiella aerogens, requires the presence of the accessory genes (ureD, ureE, ureF, and ureG) in addition to the three structural genes (ureA, ureB, and ureC). These accessory genes are involved in functional assembly of the nickel-metallocenter for the enzyme. Characterization of ureF gene has been hindered, however, since the UreF protein is produced in only minute amount compared to other urease gene products. In order to overexpress the ureF gene, a recombinant pMAL-UreF plasmid was constructed from which the UreF was produced as a fusion with maltose-binding protein. The MBP-UreF fusion protein was purified by using an amylose-affinity column chromatography followed by an anion exchange column chromatography. Polyclonal antibodies raised against the fusion protein were purified and shown to specifically recognize both MBP and UreF peptides. The UreF protein was shown to be unstable when separated from MBP by digestion with factor Xa.

• 한국수산과학회지
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• 제33권1호
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• pp.55-59
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• 2000

무지개 송어의 뇌하수체 및 배양액에 존재하는 GTH II 농도를 측정하기 위해 Avidin- Biotin complex를 이용한 sandwich EIA 계을 개발했다. Protein A sepharose affinity chromatography을 통해서 얻어진 연어 GTH II의 rabbit IgG에 biotinylation시킨 것 (Biotin-salmon GTH II rabbit IgG)을 제2 항체로 사용하였고, Non-Biotin salmon GTH II rabbit IgG는 단지 protein A sepharose affinity chromatography에서 얻어진 IgG를 제 1 항체로 사용하였다. EIA는 sandwich법에 의해서 이루어졌으며, 효소반응 기질로는 TMB(3,3'5,5-tetramethylbenzidine)를 이용했으며, 반응후 450 nm의 흡광도에서 automatic microplate reader로 측정하였다. 그 결과, $0.12\;{\~}\;125\;ng/ml$의 범위에서 용량반응곡선을 얻었으며, 측정감도 (최소 검출량)는 거의 0.58 ng/ml 정도 였다. 그리고 뇌하수체 추출물 및 배양액 각각의 희석곡선은 GTH II 표존곡선과 일치 하였다. 또한 이러한 GTH II의 표준곡선는 뇌하수체내 다른 peptide hormone와는 교차반응을 거의 나타내지 않았다. Testosterone을 처리한 미성숙 무지개 송어의 뇌하수체 세포배양계를 이용하여 sGnRH에 의한 GTH II 분비량을 본 sandwich EIA계와 RIA계를 비교 조사한 결과, 거의 같은 분비량을 나타냈을 뿐만아니라 같은 분비 pattern을 나타냈다. 이러한 결과로부터 본 sandwich법 EIA계에 의해서 연어과 어류의 뇌하수체 추출물 및 뇌하수체 배양액 중의 GTH II 함량 및 분비량을 측정하는데 있어서 안정된 assay계라고 생각되어진다.

• 대한의생명과학회지
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• 제4권1호
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• pp.35-42
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• 1998

치료목적으로 채취한 사람 복수에서 C반응성 단백질 (CRP)을 분리 정제하여 사람 대식세포 탐식활성에 미치는 영향에 대하여 연구하였다. CRP는 p-diazonium phenyl-phosphoryl choline 혹은 C-polysaccharide coupled sepharose 4B와 hydroxylapatite affinity chromatography법으로 분리 정제 시켰다. 대식 세포는 ficoll hypaque 밀도 원심 구배법으로 분리시킨 다음 부착법으로 정제시키고 탐식 시험을 이용하여 확인하였다. CRP가 대식 세포의 시험 관내 미생물 탐식 활성에 미치는 영향은 촉진 혹은 억제시키는 경향을 보였다. 즉, CRP와 대식세포 미생물 탐식능과의 관계는 반응시킨 시간, 반응계에 가해준 CRP량, 미생물ㆍ탐식세포 및 CRP상호간 반응시킨 순서에 따라서 다르게 나타났다. 대식세포의 시험관내 탐식활성에 미치는 CRP 자극의 특성은 한계자극 특성을 보였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제36권4호
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• pp.255-259
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• 1993

키틴 분해 효소활성이 높은 균주로 분리동정한 Aeromonas salmonicida YA7-625의 chitobiase를 ammonium sulfate침전, affinity adsorption, DEAE-cellulose chromatography, hydroxylapatite chromatography, gel filtration 과정을 통해 수율 47.2% 및 정제도 31.5로 분리, 정제 하였다. 정제된 chitobiase는 pH6.0, $40^{\circ}C$에서 최대의 활성을 나타내었고 분자량은 15,000 daltons로 추정되었다. 금속이온과 저해제들의 효과를 검토결과 효소의 활성에는 cystein, glutamic acid, aspartic acid, serine, tryptophan 및 tyrposine 잔기 등이 관여하는 것으로 유추되었다.

• 생명과학회지
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• 제12권5호
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• pp.528-534
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• 2002

우리나라에서 식용으로 뿐만아니라 한방재료로 널리 사용되고 있는 녹두(vigna radiata L. wilczek) 로부터 trypsin inhibitor (Mung bean trypsin inhibitor, MBTI)를 분리정제하여 그 특성을 조사하였다 또한 병태동물모델 즉, septic shock induced guinea pig model을 이용하여 MBTI의 약물학적 효과를 평가하였다. MBTI의 분리 및 정제과정은 Sephadex C-50 chromatography, DEAE-celluloseion exchange chromatography 및 trypsin affinity column 을 차례로 이용하였다. 정제한 MBTI는 전기영동 및 아미노산 서열분석결과 분자량 약 8,000 Da 의 BBI-type (Bowman-birk inhibitor type)임을 알 수 있었으며 이들의 생화학적 특성을 구명하였다. 또한 pseudomonal elastase로 유도된 septic shock guinea pig model에서 MBTI 10 mg/kg를 전처치한 결과 hypotention shock 유발이 억제됨을 알 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권6호
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• pp.655-662
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• 1992

알칼리내성 Bacillus sp. Ya-14 유래의 pectate lyase 유전자를 함유한 재조합균주로부터 affinity method, CM-cellose column chromatography와 gel filtration을 통해 효소를 정제하였으며 정제효소의 수율은 10.2, 정제도는 258배였다. 효소의 최적활성 pH는 10.0이었고 pH4.0-10.0까지의 범위에서 안정성이 있었으며, 최적활성온도는 $60^{\circ}C$이고 $50^{\circ}C$까지 열안정성이 있으며, SDS-PASGE에 의해 추정된 분자량은 43KDa 이었다. 아미노산 조정 분석 결과 polar, basic 아미노산의 함량이 높고 특히 Ser, Gly, Tyr의 함량이 높았으며, 정제효소의 N-terminal은 Ala-Asp-Leu-Gly-His-Gln-Thr의 아미노산 서열이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권2호
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• pp.142-150
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• 2002

Cholesterol oxidase(EC 1.1.3.6)는 cholesterol을 산화 또는 이성화시키는 효소로, 혈중 cholesterol 측정 등의 임상진단용 시약에 이용되고 있으며, 여러 종류의 미생물에서 분리, 연구되어 왔다. 현재에는 농업 및 식품 등에도 응용이 기대되고 있는 매우 유용한 효소이다. 본 실험은 공시균인 Streptomyces polychromogenes IFO 13072의 효소 생산 조건과 cholesterol oxidase의 정제 및 효소학적 특성을 조사하였다. 효소 생산 조건을 검토한 결과, 탄소원으로 1% dextrin, 유기 질소원으로는 0.5% casamino acid, 무기 질소원으로는 0.5% sodium nitrate가 효소생산에 우수하였으며, 이들 탄소원, 질소원 이외 0.1% $KH_2$$PO_4$, 0.05% $MgSO_4$ㆍ$7H_2$O가 함유된 배지를 생산 최적 배지로 사용하였다. 본 효소의 정제는 30-80% 포화의 ($NH_4$)$_2$$SO_4$ 침전 및 cholesterol affinity column chromatography를 통하여 23.2%의 수율로 정제되었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE에서 단일한 밴드를 보였으며, 분자량은 약 52,000 Da으로 추정되었다. 본 효소의 특성을 검토한 결과, 최적 온도와 최적 pH는 각각 $37^{\circ}C$, pH 7.0이었으며, 효소의 안정성은 온도 $25^{\circ}C$, pH 6.0~7.0의 범위까지 안정한 것으로 나타났다. 또한 본 효소는 금속이온으로 Hg와 Fe 이온의 존재시 크게 저해를 받았고, dithiothreitol과 mercaptoethanol, Isonicotinic acid와 같은 저해제에 의해서 상당히 실활 되었다. 본 cholesterol oxidase의 Michaelis 상수는 cholesterol을 기질로 하여 Lineweaver-Burk plot 분석에서 25 mM로 추산되었다

• 한국식품과학회지
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• 제29권5호
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• pp.1052-1056
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• 1997

우유 casein단백질을 trypsin, alcalase, neutrase, protamax, S. aureus type V8 등의 단백질분해효소를 이용하여 가수분해시키고 생성된 peptide의 철분가용화능을 측정하였을 때, trypsin과 alcalase에 의해 생성된 peptide들이 pH 6의 조건에서 각각 6.42와 $2.37\;{\mu}g/mL$를 가용화시키는 능력을 보였으며 그외의 protease들은 $1\;{\mu}g/mL$내외의 철분가용화능을 보였다. Trypsin과 alcalase에 의해 생성된 peptide를 역상 column으로 10개의 분획으로 나누어서 각각의 분획의 pH6에서의 철분가용화능을 측정한 결과, trypsin의 경우 분획 5에서 가장 높은 철분가용화능$(2.33\;{\mu}g/mL)$이 발견되었으며 alcalase의 경우에는 분획 7이 가장 높은 철분가용화능$(1.56\;{\mu}g/mL)$을 보였다. 이들 철분과 결합력이 있는 peptide를 분리하기 위하여 IMAC의 방법을 이용하여 철분을 chelating sepharose fast flow column에 고정화 시키고 이들 철분에 흡착하는 peptide의 분리를 시도한 결과, trypsin이나 alcalase에 의해 생성된 peptide중 철분을 가용화시키는 능력이 높은 peptide들이 IMAC에 의해 효과적으로 분리되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권6호
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• pp.1087-1092
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• 2001

The effect of Sodium Butyrate (NaBu) on the N-linked oligosaccharide structure of Erythropoietin (EPO) was investigated. Recombinant human EPO was produced by CHO cells grown in an $MEM{\alpha}$ medium with or without 5 mM NaBu, and purified from the culture supernatants using a heparin-sepharose affinity column and immunoaffinity column. The N-linked oligosaccharides were released enzymatically and isolated by paper chromatography. The isolated oligosaccharides were then labeled with a fluorescent dye, 2-aminobenzamide, and analyzed with MonoQ anion exchange chromatography and GlycosepN amide chromatography for the assignment of a GU (glucose unit) vague. A glycan analysis by HPLC showed that the most significant characteristic effect of NaBu was a reduction in the proportion of glycans with Sri-and tetrasialylated oligodaccharides from $21.30\%$ (tri-) and $14.86\%$ (tetra-) in the control cultures (without NaBu) to $8.72\%$ (tri-) and $1.25\%$ (tetra-) in the NaBu-treated cultures, respectively. It was also found that the proportion of asialo-glycan increased from $12.54\%\;to\;23.6\%$ when treated with NaBu.