형질전환된 소리쟁이 모상근의 기내 배양시 그 생장 특성과 anthraquinone생산성을 조사하기 위하여 소리쟁이의 모상근을 Agrobacterium rhirogenes strain $A_4$ 접종에 의하여 잎 절편으로부터 유기하여 부정근과 비교하였다. 잎 절편에서의 부정근 형성은 5 $\mu$M NAA를 첨가한 MS배지에서 가장 양호하였다. Paper electrophoresis를 통한 opine분석 결과 모상근에서만 mannopine이 검출되고 부정근에서는 검출되지 않았다. 부정근과 모상근 모두에서 2차근인 측근 근단은 호르몬을 첨가하지 않은 배지에서 신장만 할 뿐 분지하지 않았으나, 1차근인 주근의 근단은 많은 측지를 내며 빠르게 생장하였다. Anthraquinone 함량 증대에 따른 부정근과 모상근의 생장에는 MS기본 배지가 가장 양호하였다. 부정근과 모상근 배양시 생장량과 anthraquinone함량은 5% sucrose를 포함한 0.05 $\mu$M NAA와 0.1 $\mu$M kinetin으로 조성된 MS 액체 배지에서 가장 높은 것으로 나타났으며, 모상근의 anthraquinone함량은 배양 일수에 따라 증가하다가 배양 25일 이후에는 감소하였다.
새 번식방법 개발을 위해 둥굴레 뿌리는 눈이 없어도 부정아가 발생된다는 점에 착안하여 뿌리길이와 굵기에 대한 부정아 발생에 관한 시험 연구를 한 결과는 다음과 같다. 1년차는 뿌리길이가 5cm 경우 66.5%지만 15cm에서는 113% 부정아 발생되었고, 뿌리의 굵기 5mm이하는 98.3%지만 10mm이상은 113.3%로 46.7% 차이를 보였다. 2년차는 부정아 생성률은 15cm에서는 1년차의 3배, 시험구 설치 당시 전혀 눈이 없는 상태에서 4배의 증식을 보였다. 용토는 일반토양 2.6배 보다 모래나 펄라이트가 3.1~3.3배 증식 되었다. 대량번식을 위한 가장 좋은 방법은 10mm 둥굴레 뿌리를 5cm로 절단하여 모래에 식재하는 방법으로 판단된다.
시호 캘러스로부터 유도된 부정근의 saikosaponin 함량을 분석하였다. 캘러스로부터 부정근 발생은 0.1 mg/L a4-D가 첨가된 MS배지에서 가장 양호하였으며, 배양기간에 따른 부정근 형성은 오래된 캘러스에 비해 4주 배양한 캘러스가 효과적이였다. 캘러스당 부정근 형성율은 캘러스의 크기가 900-1000 $\mu$M에서 가장 높았다. Saikosaponin의 총 함량은 배양기간이 길어짐에 따라 현저히 증가하였다. Saikosaponin a와 d의 함량은 배양 150일에서 g부정근 건물 중량당 각각 2089 $\pm$ 124 $\mu$g과 4778 $\pm$ 214 $\mu$g이였으며 saikosaponin c의 함량은 60일 배양에서 3492 $\pm$ 123 $\mu$g 으로 높았다.
본 연구에서 육계 추출물로부터 cinnamyl alcohol을 분리·정제하였다. 연구 결과, H3 분획100 ㎍/mL에서 부정근 형성율이 286.6%였으며, 표준품 cinnamyl alcohol 1 mM (134.2 ㎍/mL)의 형성율이 290%로 유사한 결과를 나타내었다. 따라서 육계 methanol 추출물에 함유되어있는 cinnamyl alcohol이 녹두의 부정근 형성을 유도하는 주된 화합물일 것으로 판단된다. 육계에서 동정한 cinnamyl alcohol은 현재 식품첨가제 및 향료로써 사용되고 있으므로 안전성이 이미 보장되어 있으며, 한약재로써 사용된 육계 잔류물을 활용하여 부정근 형성 유도물질을 추출한다면비용적인 측면에서 또한 긍정적인 요인으로 작용할 것으로 판단된다. 따라서 육계는 유기농 농자재로써 충분히 사용 가능할 뿐만 아니라 신규 천연 식물생장조절제의 개발용 소재로서도 활용 가능할 것으로 사료된다.
Soo-Jeong Kwon;Young-Ho Choi;Hee-Ock Boo;Sun-Hee Woo;Hag-Hyun Kim
한국작물학회:학술대회논문집
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한국작물학회 2022년도 추계학술대회
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pp.161-161
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2022
This study aimed to investigate the effect of growth regulators on the formation of the organ in the in vitro propagation of diploid and tetraploid Codonopsis lanceolata, and gain the basic data for in vitro propagation of superior C. lanceolata. In the case of diploid C. lanceolata, the highestshoot formation (3.0) was observed at 0.5 mg·L-1 addition medium with low IBA concentration. The shoot formation of tetraploid C. lanceolata was suppressed by addition of IBA. In the addition of lAA, the shoot formation of diploid C. lanceolata was slightly higher at 1.0 mg·-L-1 addition medium than that of control group, whereas tetraploid C. lanceolata showed the highest number (5.4) from control group. In the case of NAA, the shoot formation of diploid and tetra C. lanceolata tended to decrease at higher concentration. In terms of BA addition, the shoot formation of diploid C. lanceolata was increased by the addition of BA, whereaswhile the growth of shoot was decreased by the addition of BA. In the case of tetraploid C. lanceolata, shoot was found to be formed by the addition of low concentration of BA, and the growth of shoot was inhibited with the higher addition concentration of BA. With the addition of kinetin, the shoot formation of diploid C. lanceolata was slightly higher than that of control group, and the formation of adventitious root was highest (5.3) in the control group. In the case of tetraploid C. lanceolata, the shoot formation was similar in all treatment groups, but the formation and growth of adventitious root were significantly lower than that of diploid C. lanceolata. In the case of TDZ addition, the shoot formation of diploid C. lanceolata showed the pronounced results at 5.0 mg·L-1 addition medium, and the growth of shoot was inhibited by the addition of TDZ. The formation of adventitious root was 5.3 and 4.9 in the control group and 0.1 mg·L-1 addition medium respectively. The formation of the shoot of tetraploid C. lanceolata showed better results with the higher concentration of TDZ, and the growth was better with the lower concentration of TDZ. The formation and growth of adventitious root were significantly slower than that of diploid C. lanceolata.
Dendropanax morbifera (Araliaceae) is an endemic species in Korea and distributed in the southern part of Korea. The roots and stems of this plant have been used for folk medicine for the treatment of migraine headache, dysmenorrheal, and remove wind dampness and for Vanishes production. Production of adventitious roots in D. morbifera by in vitro cultures could be used as alternatives materials. Leaf, stem, and root segments from D. morbifera seedling were cultured on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 3.0 mg/L IBA and 30 g/L sucrose. After 4 weeks of culture, the highest induction of adventitious roots was obtained from the leaf segment. Frequency of adventitious root formation on medium with various kinds of auxins (IAA, NAA, 2,4-D, and IBA) and various concentrations of IBA (0, 0.1, 0.5, 1.0, 3.0, and 5.0 mg/L) was tested. The maximum induction of adventitious root was obtained on medium with 1.0 mg/L IBA. In liquid culture, growth of root was best 1/2MS medium supplemented with 1.0 mg/L IBA and 30 g/L sucrose. Adventitious roots were cultured in 5 L bioreactor containing 1/2 MS medium supplemented with 1.0 mg/L IBA and 30 g/L sucrose and mass-production of adventitious roots was successfully achieved. This study demonstrated for the first time to produce adventitious roots in D. morbifera.
작약 뿌리 절편으로부터 유도된 캘러스 클론으로부터 부정근 발생에 대한 최적의 배양조건을 조사하기 위하여 뿌리 절편으로부터 캘러스 유도를 위해서 먼저 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 mg/L 농도의 오옥신(IAA, NAA, IBA, 2,4-D)과 0, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L 농도의 싸이토카닌(kinetin, zeatin, BAP)를 조합한 MS 배지에서 배양하였다. 캘러스 클론으로부터 부정근 유도와 길이 생장은 0.1, 0.5, 1.0 mg/L 농도의 오옥신(IAA, NAA, IBA) 또는 싸이토카닌(kinetin, zeatin, BAP)을 단독으로 첨가한 배지에서 암 조건으로 그리고 0.1, 0.5, 1.0 mg/L 농도의 IBA와 zeatin을 각각 조합 첨가한 배지에서 명/암 조건으로 6주 동안 배양하였다. 캘러스 형성은 다른 조합 처리보다 1.0 mg/L 농도의 NAA와 zeatin을 조합 첨가한 배지에서 가장 효과적이었으며, 캘러스 클론으로부터 부정근 발생 수와 부정근의 길이 생장은 IBA 단독처리의 경우 각각 6.66개와 4.82 cm, zeatin 단독 처리의 경우 2.32개와 0.92 cm로 다른 호르몬에 비해 우수하였다. 특히 0.1 mg/L IBA와 0.5 mg/L zeatin을 조합 첨가한 배지에서 광 조건으로 배양할 경우 가장 많은 부정근이(14.06) 형성되었으며, 동일배지에서 암 조건으로 배양할 경우 부정근의 길이가 가장 긴 5.45 cm로 측정되어 가장 효과적인 농도와 조합임을 알 수 있었다. 이러한 작약의 기내 배양에 대한 최적의 배양 조건은 기내배양을 통해 작약 부정근의 대량 생산을 위한 배지로 사용할 수 있음을 보여 주었다.
Cryclohexylarnine(CHA)에 의한 부정근 억제가 spermidine 과 spermine에 의한 부정근 형성 회복에 미치는 영향을 알아 보고자 대두 자엽 절편을 이용하여 조직내의 polyamine함량을 조사하였다. 부정근 형성 배지에 CHA를 처리한 결과 $10^{-2}$ M CHA 처리시에는 spermidine이나 spermine을 혼합처리함에도 불구하고 부정근이 형성되지 않았다. 또한 2.5 $\times$$10^{-3}$ M CHA 단독처리시에는 부정근 형성이 억제되었으나, $10^{-4}$ M spermine 혼합처리시에는 부정근 형성능이 회복되었다. Putrescine 함량은 부정근이 형성돠지 않았던 $10^{-2}$ M CHA 단독 처리구 및 $10^{-2}$ M CHA와 $10^{-3}$ M Spermine 혼합처리구에서는 배양 3일 이후 대조구보다 감소하였지만 부정근이 다소 형성되었고, 부정근 회복능이 가장 높았던 2.5 $\times$$10^{-3}$ M CHA와 $10^{-4}$ M spermine 혼합처리구에서는 대조구보다 높은 함량을 나타내었다. Spermidine 함량은 모든 처리구에서 대조구보다 낮아서 함량이 낮을수록 부정근 형성이 억제되었으며, spermine의 함량은 대조구에 비하여 모든 처리구에서 급격히 증가되어 대조구에 비하여 함량이 높을 수록 부정근 형성이 억제되었다.
When the leaves, roots and stem segments of seedling of Polygonatum odoratum were cultured on Murashige and Skoog medium with 2.0mg/l BAP, stem segments were the most efficient explants for adventitious shoot inductino. To observe the efficient combination of growth regulators on the adventitious shoot formation , stem segments were cultured on MS medium with various kinds of cytokinins (BAP, kinetin, zeatin). From this experiment, cytokinin treatement was prerequisite for theadventitious shoot formatino,especially BAP was the most effective. Auxin (NAA or IBA) in combination with cyotokinin highly enhanced the adventitious shoot formation. Twenty five percents of explants produced the adventitious shoots on medium with 2.0mg/l BAP solely, while 83% of explants produced the adventitious shoots on medium with 2.0mg/l BAP and 0.1mg/l IBA. Root formationform adventitious shoot was promoted after transfer to 1/2 MS medium supplemented with 0.1mg/l IBA and 0.5mg/l zeatin, thereafter the plantlets with shoots and roots were cultured on 1/2MS medium lacking growth regulators. When the stem segments were cultured to MS medium with 1.0mg/l 2,4 NAA and IBA , yellow and nodulous cali were formed from the stem segments which were developed into adventitious roots. These roots were actively grew after transferred to MS liquid medium lacking growth regulators.
분리된 무 자엽 조직에 산화질소 (nitric oxide: NO) 공여체인 sodium nitroprusside (SNP) 처리 시 농도 의존방식으로 부정근의 발달을 증진시켰다. 그러나 이러한 NO 증진 효과는 세포외 칼슘 chelator인 0.5 mM EGTA 또는 세포막 칼슘채널 차단제인 0.1 mM $LaCl_3$를 각각 $50\;{\mu}M$ SNP와 함께 혼합처리 시 반전되었다. 또한, 뿌리 발생에서 중심적 역할을 수행하는 것으로 알려진 guaiacol peroxidase (GPX)와 syringaldazine peroxidase (SPX)의 활성도가 SNP 단독 처리된 자엽에서 부정근이 형성되는 동안 현저히 증가하였다. 그러나, SNP와 $LaCl_3$ 혼합처리 시 SNP에 의해 유도된 GPX와 SPX 활성도 증가가 거의 증류수 대조구 수준으로 억제되었다. calmodulin의 anatagonist인 trifuoperazine 역시 SNP로 처리된 자엽에서 부정근 형성을 억제하여 발생된 뿌리의 개수와 길이를 감소시켰으며 동시에 GPX와 SPX를 불활성화 하였다. 결론적으로, 이들 결과는 칼슘이 GPX와 SPX 활성도 조절을 통해 부정근 유도를 이끄는 NO 반응에 포함되어 있음을 나타내는 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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