Effects of addition of Chinese chives into frozen noodle on retrogradation of the cooked frozen noodle were examined by enzymatic evaluation during the storage 3 days at $4^{\circ}C$. The retrogradation rate during storage was significantly reduced by addition Chinese chives. Thus we hypothesized that retarogardation and textural changes of frozen noodle might be linked to thermostable amylase in Chinese chives. The amylase isolated from Chinese chives was affected by temperature and pH of buffer used. The enzyme was mainly extracted 20 mM potassium phosphate buffer(pH 7.0). The enzyme was extremly stable at wide temerature and pH. Amylase activity was maximal at $50^{\circ}C$ and pH 7.5. The enzyme was not inactivated by heat treatment at $70^{\circ}C$, $80^{\circ}C$ for 30 min. We suggest the enzyme was stable at high temperature. To investigate the effect of different storage packge on texture properties, color, sensory evaluation, parent-packged and unparent packaged frozen noodle was compared with control. As the storage passed, the frozen noodle packaged with parent showed a rapid decrease in the color. The hardness was gradually decreased during storage. It was found that unparent packged must be nessasry in the Chinese chives frozen noodle. In changes of sensory properties by traind panel, Chinese chives frozen noodle with 2% blanched Chinese chives got the highest score in overall acceptability, therefore we tried acceptance test by consumers with 2% blanched frozen Chinese chives noodle.
In this study, four plants grown naturally in Egypt that are usually consumed by pastoral nomads were screened for their total phenolic contents, antioxidative, and anti-$\alpha$-amylase activities. Dried powder of plant's part was extracted in absolute or 70% ethanol. A polar extract of Panicum turgidum (PTPE) had the highest total polyphenol content {92.5 mg gallic acid equivalents (GAE)/g}, followed by an alkaloid extract of Withania somnifera (WSAlk; 77.5 mg GAE/g), and an ethanol extract of Leptadenia pyrotechnica (LPEE; 59.1 mg GAE/g). By employing different assays such as DPPH radical scavenging, reducing power, $Fe^+$ chelating, $H_2O_2$ scavenging and total antioxidant capacity, it was shown that PTPE, WSEE (ethanol extract of W. somnifera), WSAlk and LPEE had promising antioxidant activity, though, their potency varied according to the different tests. WSAlk had the highest level of $\alpha$-amylase inhibition (40.2%) in vitro, followed by WSEE (30.5%). Therefore, it can be concluded that these plants, especially extracts of PTPE, and WSAlk are beneficial to physiological health, and could be used in food and pharmaceutical industries to prepare dietary supplements, functional foods or food preservatives.
보리 맥아로부터 발견된 서로 다른 알파아밀라제 동질효소(AMY1, AMY2)는 80%에 달하는 높은 아미노산 서열의 상동성을 보이지만, 두 효소의 특성은 서로 달라 AMY1 효소는 낮은 농도의 칼슘 조건에서 최대 활성을 보이는 반면, AMY2 효소는 높은 칼슘이온 농도에서 높은 활성을 나타낸다. 또한 BASI (Barley ${\alpha}$-Amylase/Subtilisin Inhibitor) 단백질은 AMY2 효소만을 특이적으로 저해한다. 따라서 본 연구에서는 AMY1과 AMY2 효소의 유전자를 I, II, III의 세 부위로 나눈 후, 제한효소 처리에 의해 일부 부위를 상호 치환한 4종의 chimera 효소를 추가로 제조하고, Pichia pastoris 균주에서 대량 발현하였다. 이들 효소의 특성을 비교한 결과, 제 I 부위만이 상호치환된 AMY211 및 AMY122 효소의 경우, AMY1과 AMY2의 중간적 칼슘 의존성을 나타내었으며, BASI에 의한 저해효과는 AMY2의 제 I, II 부위를 포함하는 AMY221 효소에서만 관찰되었다. 따라서 보리 아밀라제의 제 I 부위 및 제 II 부위에 존재하는 아미노산 잔기들이 칼슘 의존성 및 BASI와의 결합에 중요한 역할을 담당하는 반면 제 III 부위는 이들 효소의 활성 차이에 영향을 미치지 않음을 확인하였다.
방사선 조사에 의한 발아 억제기작을 살펴보기 위하여 $4^{\circ}C$ 에서 저온 처리 한 감자에 0.12 kGy 감마선을 조사한 후 5주 동안 $20{\pm}2^{\circ}C$, 상대습도 $70{\sim}90%$에서 저장하였다. 이 기간 중 발아에 관여된다고 생각되는 ${\alpha}-amylase$, peroxidase, indole acetic acid (IAA) oxidase, IAA synthesizing enzyme의 활성 변화를 추적하였다. 시판 ${\alpha}-amylase$와 peroxidase의 방사선 감수성은 0.94와 0.36 kGy의 감마선 조사하여 $D_{37}$ 값을 얻었다. 감마선 조사를 행한 감자의 IAA oxidase 역가는 조사후 급격히 증가됐고 IAA 합성 효소의 역가는 조사직후 조금 증가하였으나 저장 기간에 따라 크게 감소하였다. 형태적인 변화에서 조사된 감자에서는 성장점의 고사와 변형된 눈이 관찰되었고 IAA 흑은 gibberellin 등의 처리에 의해 이들 자체로는 회복되지 않았고 그 주위로 새로운 눈의 성장이 관찰되었다. 결론으로 방사선 조사에 의해 야기된 감자의 호흡은 탄수화물이 ${\alpha}-amylase$등의 효소에 의한 분해로 이루어져 ATP를 공급하며 뒤이은 peroxidase 역가의 증가와 같은 효소의 합성은 방사선에 의한 손상을 치유하려는 과정에 속한다 할 수 있다. 또한 눈의 생장점에서의 고사 현상은 손상에 대한 방어 작용의 일종이라 해석되며 이로인한 발아 억제 현상을 페놀 대사와 관련지어 추측할 수 있었고 증가된 IAA oxidase와 IAA 합성계의 파괴에 의한 IAA의 고갈 역시 방사선 조사에 의한 발아 억제 현상의 원인이 됨을 알 수 있었다.
재조합 대장균의 성장과 그 부산물 생성 관계를 알기위하여 탄소원을 glucose로하여 d-cycloserine, acetic acid 첨가에 따른 각각의 영향들을 검토하였다. 세포벽에 자극을 주는 d-cycloserine을 초기 농도 $0.1g/\ell$ 로 첨가하면 첨가하지 않는 경우에 비해 세포 성장이 93% 증가 했고 ${\alpha}$-amylase 생성은 5 5%정도 분비가 촉진 되였다. 그러나 d -cycloserine 초기 농도 $0.2g/\ell$로 첨가하면 세포와 a-amylase 아주 적게 생성되었다. 또한 d-cycloserine을 첨가하면 부산물에 lactic acid 생성에는 영향이 없으나 acetic acid는 적게 생성되었다. 그러므로 dc cycloserine과 같은 자극제를 적당히 첨가하면 세포 성장 및 ${\alpha}$-amylase 분비가 촉진되지만 너무 많이 첨가 면 저해 작용이 얼어남을 알 수 있다. 저해제 acetic acid는 세포 성장에 작용을 주는 결과를 보였고 acetic acid의 농도가 높지 않는 상 태에서 lactic acid의 생성은 높은 양으로 생성 되엣 다. 이상의 결과에서 lactic acid를 적게 나오게 하 는것은 세포 수율에 큰영향을 주며 acetic acid가 척게 생성되면 성장에 좋은 영향을 주고 있다. 이상의 전체적인 결과는 세포 성장과 부산물 생성 상태를 고려할때 d -cycloserine은 초기 농도 $0.1g/\ell$ 정도 첨가하고 저해제 acetic acid의 생성을 적게 하는 배양방법을 검토 할 필요가 있다고 생각된다.
본 연구는 한국의 누룩에서 분리한 Rhizopus sp. ZB9로서 탁주 및 약주 양조에 필요한 쌀 입국을 제조할 때에 배양온도, 배양시간, 증미 수분 함량, 입국 두께, 교반 작업 등의 배양조건이 입국의 당화 아밀라아제 생성에 미치는 영향을 알기 위한 것이다. Rhizopus sp. ZB9를 접종하여 배양조건을 달리하여서 쌀 입국을 제조하고, 각 입국의 당화 아밀라아제 활성도를 측정하였다. 당화 아밀라아제 생성에 적절한 온도범위는 $28{\sim}36^{\circ}C$이었다. 당화 아밀라아제와 입국의 색을 고려한다면 $28^{\circ}C$에서 60시간 배양하는 것이 가장 좋을 것으로 생각되었다. 당화 아밀라아제 생성에 적절한 증미 수분 함량은 35~40%이었고, 입국의 두께가 두꺼워지더라도 당화 아밀라아제 생성에 나쁜 영향을 나타내지 않았으나 배양중의 교반작업은 당화 아밀라아제 생성에 나쁜 영향을 나타내었다.
Two conserved amino acid residues in the extra sugar-binding space near the catalytic site of Thermus maltogenic amylase (ThMA) were analyzed for their role in the hydrolysis and transglycosylation activity of the enzyme. Site-directed mutagenesis was carried out by replacing N33l with a lysine (N331K), E332 with a histidine (E332H), or by replacing both residues at the same time (N331K/E332H). The measured $K_m$ values indicated that affinities toward all substrates tested, including starch, pullulan, ${\beta}-cyclomaltodextrin$, and acarbose, were lower in all the mutants compared to that of wild-type ThMA, leading to reduced hydrolysis activity. In addition, the lower ratio of transglycosylation to hydrolysis in the mutants compared to that in the wild-type ThMA indicated that these mutants preferred hydrolysis to the transglycosylation reaction. These results demonstrated that the conserved dipeptide at 331 and 332 of ThMA is directly involved in the formation and accumulation of transfer products by accommodating acceptor sugar molecules.
The stability of Bacillus licheniformis alpha-amylase (BLA) under acid condition was enhanced through direct evolution using the error-prone polymerase chain reaction. One beneficial mutation site, H281I, was obtained in BLA. The specific activity of H281I was 161/352 U/mg, which was 62.6/27.5% higher than that of the wild-type (WT) (99/276 U/mg) at pH 4.5/6.5 and $95^{\circ}C$. The pH optimum for H281I was decreased about 1 unit, whereas no significant changes of optimum temperature and thermostability were observed compared with the wild type (WT). The $k_{cat}/K_m$ value of H281I was 1.7-/1.4-fold higher at pH 4.5/6.5, respectively, than that of WT. The structure model analysis indicated that the H281I mutation altered the predicted interaction between the amino acid residues at 281 and 273, thus creating a conducive local environment for substrate binding, as reflected by its decreased $K_m$, and consequently increased the specific activity.
본 논문은 대체식품 및 화장품 원료로 사용되는 미강을 발효를 통해 기능성과 경쟁력을 증가시키는 것을 목표로 하였다. 5종류의 누룩에서 분리한 Saccharomycopsis fibuligera 50종의 균주 중 효소 활성이 우수한 6균주와 표준균주를 이용한 발효미강물의 𝛼-amylase, CMCase, 𝛽-glucosidase, protease 등의 효소 활성을 통해 비교한 결과, A8균이 KCTC 7806 균주에 비하여 13.7%, 21.1%, 50.3%, 10.0%의 우수한 효소 활성을 보였다. 발효의 결과지표로서 ABTS, DPPH 검사를 시행한 결과, A8으로 발효한 미강이 KCTC 7806 균주로 발효한 미강에 비하여 1.12배, 1.28배의 항산화능이 있음을 확인하였다. 본 논문으로, S. fibuligera 표준균주인 KCTC 7806 보다 우수한 S. fibuligera A8 균주를 확인할 수 있었다. 또한, 선행연구과제의 항염활성 및 항독성 결과와 더불어 우수한 효소 활성과 항산화능 결과를 통해 S. fibuligera A8 균주를 통한 미강 발효물이 대체식품 및 화장품 원료로서의 기능성과 가격 경쟁력을 증가시킬 수 있음을 확인하였다.
치커리의 종근으로 치콘을 재배하여 엽색이 노란색과 붉은색인 다섯 가지 종류의 치콘 추출물에 대한 항산화효과 및 혈당강하효과와 단백분해능을 측정하였다. DPPH free radical 소거능으로 항산화활성을 측정한 결과, 실험에 사용한 모든 시료가 우수한 항산화 활성을 가지고 있었으며 특히, 엽색이 노란색인 네 종류 (Kibora, Metafora, Vintor, Halifax)의 치콘보다 엽색이 붉은색인 Redoria종이 1 mg/mL의 농도에서 94.2%의 높은 항산화 활성을 나타냈다. 치콘 추출물의 혈당 조절능을 평가하기 위해, Porcine pancreas, Human saliva 및 Bacillus licheniformis 기원의 $\alpha$-amylase와 효모기원의 $\alpha$-glucosidase에 대한 추출물의 저해 활성을 조사한 결과, $\alpha$-amylase에서는 저해활성을 보이지 않은 반면에 $\alpha$-glucosidase에는 17.5~38.6%의 저해활성을 보였다. 치콘의 단백분해능을 측정한 결과, 실험에 사용한 다섯 종류의 치콘추출물 모두 대조품으로 사용한 Pancreatin보다 우수한 활성을 나타냈으며 항산화 활성과 마찬가지로 Redoria 추출물의 활성이 가장 우수하였다. 이러한 결과로 보아 치콘을 항산화제나 소화제 등의 천연 소재로 이용할 수 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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