떡의 노화를 지연하여 상품성을 개량할 수 있는 방법을 개발하고자, $\alpha$-amylase를 첨가하여 백설기를 제조하였다. $\alpha$-amylase는 전분을 가수 분해하여 환원당의 함량을 증가시킴으로써 떡의 수분활성도를 낮추고, 백색도를 감소시키며 이러한 결과 전분의 노화가 지연되는 것을 X-ray 회절 양상의 변화를 통하여 확인하였다. 또한 떡의 관능검사 결과 $\alpha$-amylase를 첨가한 떡은 상온과 냉동 저장 모든 경우에서 더욱 촉촉하고 부드러운 조직감을 나타내어 전분의 노화가 억제됨을 관찰할 수 있었다. 그러나 떡의 수분 함량은 효소를 첨가한 것과 하지 않은 것간에 유의적인 차이를 나타내지 않았으므로 이러한 촉촉한 느낌은 자유수 형태의 수분 함량보다는 환원당의 함량이 증가되어 나타나는 현상임을 확인 할 수 있었다.
To investigate the effect of intravenous ethanol administration on pancreatic exocrine secretion, we measured volume and protein amount in pancreatic juice and assayed amylase activity and phospholipase $A_2$ activity in pancreatic fragments and serum. Acute pancreatitis induced by obstruction of common bile-pancreatic duct (CBPD) and caerulein infusion (5 $\mu\textrm{g}$/kg/hr) showed typical characteristics, such as hyperamylasemia and pancreatic edema and increase of phospholipase $A_2$ activity in pancreatic fragments and serum. Intravenous ethanol infusion (50 mg/kg/hr) significantly stimulated pancreatic exocrine secretion, but such a stimulatory effect of ethanol disappeared at dose of 100 mg/kg/hr without typical symptoms of acute pancreatitis. In microscopic examination, there were no typical changes of edematous pancreatitis in ethanol administrated rats. These results suggest that acute ethanol administration has dual effect on exocrine pancreatic secretion: low dose of ethanol (50 mg/kg/hr) stimulates pancreatic exocrine secretion, whereas high dose of ethanol (100 mg/kg/hr) does not without typical changes of edematous pancreatitis.
${\alpha}$-Amylase와 glucoamylase를 동시에 안정하게 분비하여 전분을 일단계로 직접 에탄올로 발효시킬수 있는 효모 균주를 개발하기 위하여 glucoamylase를 분비하는 Saccharomyces diastaticus hybrid 균주에 쥐의 침샘 유래의 ${\alpha}$-amylase cDNA 유전자를 plasmid vector를 이용하여 도입하였다. 이 균주로부터 효소생산에 필요한 유전자를 잃어버림이 없이 안정하게 분비할 수 있도록 하기 위하여 $\alpha$-amylase 유전자를 효모의 염색체에 삽입시키기 위한 integrating plasmid vector인 YIpMS$\Delta$R(LEU2)를 제작하였다. 이 vector의 효모형질전환에 있어 원형(circular)상태와 제한 효소 XbaI으로 처리된 직선화된(linearized) 상태의 두가지 형태를 비교한 결과 형질전환 효율에서나 형질전환체내의 $\alpha$-amylase 유전자 보유정도가 모두 직선화된 형태의 경우가 원형상태의 경우보다 높았다. Linearized vecotr를 가진 효모 형질전환체에서의 유전자 발현 안정도는 세포분열을 거듭할수록 episomal vecotr에 의한 효모 형질전환체에서의 발현 안정도보다 우수하게 나타났다. 또한 이 linearized vector를 가진 형질전환체는 $\alpha$-amylase와 glucoamylase를 동시에 분비하여 glucoamylase만 분비하는 원균주보다 2배 이상의 전분분해력을 보였다.
고려인삼(Panax ginseng C. A.. Meyer) 중의 $\beta$-amylase를 연구하기 위하여 조(粗)인삼 $\beta$-amylase 를 분리한 후 그의 성질을 조사하였다. 조인삼 $\beta$-amylase는 ammonium sulfate 0.2$\sim$0.6포화분획에 의하여 효과적으로 조제되었다. 조제된 본 효소는 전형적인 $\beta$-amylase의 작용을 하여 starch에서 maltose만을 생산하였으며 maltase의 활성은 나타내지 않았다. 본 효소는 pH5$\sim$9(특히 pH7$\sim$8), $40^{\circ}C$ 이하의 조건하에서 안정성을 나타내었고 최적pH 5.0, 최적온도 $35^{\circ}C$를 나타내었다. 본 호소는 기질(starch)농도 l2mg% 이하에서 기질농도에 비례하여 호소활성이 증가하였으며 Km치는 4.76mg%이었다. 또 본 효소는 $K^{+}$, $Na^{+}$, $An^{++}$,$Ca^{++}$, $Co^{++}$,$Mn^{++}$$Zn^{++}$에는 영향을 받지 않았으나$Ag^{+}$, $Hg^{++}$,$Cd^{++}$, $Cu^{++}$,$ Al^{3+}$, and $Fe^{3+}$ 등에는 현저한 저해를 받았다.
The potential biological activities of water and ethanol extracts from two varieties of Rubus coreanus Miquel fruits produced in the Gochang-gun (GR) and Hoengseong-gun (HR) regions of Korea were examined. The hydroxyl radical ($\cdot$OH) scavenging activity, reducing power, lipid peroxidation inhibitory activity, and antiproliferative activity on cancer cells by these extracts were examined, and $\alpha$-amylase and $\alpha$-glucosidase inhibition assays were also performed. The EtOH extract from GR showed high hydroxyl radical scavenging activity ($EC_{50}=119.47{\pm}5.13\;{\mu}g/mL$), lipid peroxidation inhibitory activity ($EC_{50}=213.45{\pm}3.14\;{\mu}g/mL$) and a concentration dependence, with OD values ranging from 0.15 to 0.56 (50 to 200 ${\mu}g/mL$), for reducing power. The EtOH extract from GR has the highest antiproliferative activities on MDA-MB-231 and HepG2 cancer cells among four extracts. Meanwhile, all extracts showed certain $\alpha$-amylase and $\alpha$-glucosidase inhibition activities. These results indicate that extracts from two varieties of R. coreanus fruits have significant antioxidant, anti-diabetic and anti-tumorigenic activities, which suggest these extracts could be a potential source for pharmaceutical.
핵전이 방법을 이용하여 효모에서 전분분해능이 향상된 새로운 우수 균주를 개발하고자 하였다. Saccharomycopsis fiburigera KCTC 7393과 Saccharomyces cerevisiae KCTC 7049에서 핵을 분리한 후 영양요구 돌연변이주인 S. cerevisiae의 안으로 전달시켜 잡종(MN-16)을 형성하여 전분 분해능이 증가된 잡종을 선별하였다. 세포 배양액으로 조효소 용액을 만든 후 ammonium sulfate 침전, DEE-Sephacel column chromatography, Sephacryl S-200 column chromatography 등의 정제과정을 통해 9.7%의 회수율로 약 10.6배 정제 된 효소를 얻을 수 있었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE 전기영동을 통해 단일 band를 보여 주었으며, SDS-PAGE 와 Sephacryl S-200 column chromatography를 통해서 53kDa으로 나타났다. 정제효소의 최적 활성 온도는 40${\circ}C$이고, 안정성은 40~45${\circ}C$로 나타났다. 최적 활성 pH는 5.5이었고, pH 5.0~7.0 정도에서 pH안정성이 80%정도 유지되었다. 가용성 전분에 대한 $K_{m}$ 값은 2.5㎎/㎖이었다. 또한, 정제 효소의 금속 이온의 효과로 $Ca^{2+}, Co^{2+}, EDTA, Mg^{2+}, Mn^{2+}, Zn^{2+}$ 첨가시 활성이 촉진되었고, $Ca^{2+}$의 경우 가장 높은 반면 $Cu^{2+}, Fe^{2+}, Ni^{2+}$의 경우는 오히려 활성이 감소되었다.
제호탕은 오매, 사인, 백단향, 초과 등의 한약재와 꿀을 넣어 만든 여름철 전통음료이다. 본 연구에서는 제호탕의 재료인 오매, 사인, 초과, 백단향의 항산화 활성, Total phenolic content, ${\alpha}$-glucosidase, ${\alpha}$-amylase inhibitory activity를 생리활성을 측정하였다. 또한, 전통적인 조리법(연밀)과 현대적인 조리법(중탕법, 모두 끓이는 방법)으로 제호탕을 만들었을 때 pH, 색도, 당도의 차이를 비교분석하였다. Total phenolic content는 사인이 120.45 mg GAE/g, 오매분말 연밀미비법이 152.66 mg GAE/g를 나타냈으며, DPPH free radical 소거활성은 사인이 93.13% 그리고 오매분말 연밀미비법이 56.44%를 나타내었다. ${\rho}$-nitrophenyl-${\alpha}$-Dglucopyranoside를 기질로 사용한 ${\alpha}$-glucosidase 저해효과는 $100{\mu}g/mL$ 농도에서 사인이 89.51% 저해율을 보였으며, 끓이는 방법이 ${\alpha}$-glucosidase 저해효과 52.38%, ${\alpha}$-amylase 저해활성 72.52%로 높은 저해능을 보였다. 이와 같은 결과, 제호탕 소재로는 사인이 항산화, 항당뇨 효과에 뛰어남을 확인할 수 있었다. 조리방법에 서는 오매분말 연밀미비법이 높은 항산화 활성을 나타내었으며, 항당뇨 효과는 끓이는 방법이 뛰어남을 확인할 수 있었다.
자연계에서 분리한 곰팡이 중 전분을 잘 당화하며 산생성력이 강한 한 균주를 선별하여 현재 막걸리 제국용 균종으로 많이 사용되고 있는 백국균(Aspergillus Kawachii)과 비교하여 각종 성분을 경시적으르 분석한 결과는 다음과 같다. 1) 분리균중 당화력 및 액화력이 비교적 강한 M-80을 공시균으로 선별하였다. 2) 백국균과 분리균의 $\alpha$-amylase 역가는 140W. V.로 비슷하였으나 $\beta$-amylase 역가는 54 A. U. 로 분리균이 높았다. 3) acid protease 역가는 분리균이, alkaline pro-tease 역가는 백국균이 높았다. 4) 총산, ethanol, fusel oil의 생성량은 분리균이 약간 높았으며 methanol 함량은 비슷하였다. 5) 술덧중의 유리 아미노산의 함량은 분리균이 백국균보다 약 10%정도 높았으며, 15종의 유리아미노산이 확인되었다.
본 연구에서 당뇨병의 예방, 치료제 및 건강기능 식품으로서 산업적 활용가능성을 평가하기 위한 기초연구로서 번행초 추출물을 사용하여 당뇨관련 효소인 $\alpha$-amylase, $\alpha$-glucosidase, $\beta$-glucosidase 그리고 aldose reductase에 대한 저해활성을 조사하였다. 번행초의 HX 분획물은 인간 타액, 돼지 췌장 $\alpha$-amylase에 대해 5 mg/mL 농도에서 각각 62.23%, 88.74%로 높은 저해효과를 나타냈으며, $\alpha$-glucosidase에 대해서도 HX 분획물이 1 mg/mL 농도에서 60.27%로 높은 저해효과를 나타냄으로써 현재 혈당강하제로 사용되고 있는 acarbose와 1-deoxynorjirimycin보다 높은 억제 효과를 보였다. 그리고 만성 합병증에 의한 시력장애, 신경성장애, 신장기능장애, 심장기능 장애 등의 심각한 당뇨병성 합병증 유발과 관련이 있는 aldose reductase에 대한 억제활성을 조사한 결과, 1 mg/mL 농도에서 번행초 DCM 분획과 HX 분획물이 각각 51.95%, 47.22%로 높은 저해활성을 나타냄으로써 당뇨병과 그로 인한 합병증의 예방에도 효과가 있는 것으로 판단된다. 전 세계적으로 당뇨병 환자가 증가추세에 있어 당뇨병 치료제의 시장 규모는 더욱 확대될 가능성이 높은 가운데 지금까지 보고되지 않은 번행초의 항당뇨 효능의 우수성을 검증함으로써 바이오산업육성뿐만 아니라 신소득 작물로 순화재배를 통한 농가소득 향상에도 기여할 것으로 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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