• Journal of Plant Biology
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• 제21권1_4호
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• pp.21-27
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• 1978

The effect of tannic acid on GAs and cyclic-AMP promoted amylase induction in barley aleurone layers was examined. Of a variety of adenine compounds, only cyclic-AMP and ADP showed significant activity, and these activities were promoted by addition of theophylline to the incubation medium. When aleurone layers of barley endosperm tissues were incubated with GAs in the presence of tannic acid, the amylase activity in the incubation medium was reduced. Cyclic-AMP induced amylase activity was also reduced by additiion of tannic acid. The cyclic-AMP response promoted was more sensitive to tannin inhibition than GAs response. The inhibitory effect of tannic acid shwoed reversibility by addition of higher concentration of GAs or cyclic-AMP. The tannic acid effect on GAs response was also recovered by addition of a higher concentration of cyclic-AMP. Experiment with polyacrylamide disc electrophoresis showed different isozyme patterns according to the additions in the incubation medium. Inhibitory effects of decursinol and coumarin was compared with that of tannic acid. They showed different zymogram patterns.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제21권2호
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• pp.286-293
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• 2014

본 연구에서는 식품산업에 적용 가능한 amylase의 발굴을 위하여 된장으로부터 amylase를 생산하는 균주를 분리하였고, 분리된 미생물들의 동정을 통하여 GRAS 미생물로 부터 생산되는 amylase에 대한 효소 특성을 규명하였다. 그 결과 균주 유래 16S ribosomal RNA 유전자 염기서열에서 B. subtilis로 동정되어 본 균주를B. subtilis CBD2로 명명하였다. B. subtilis CBD2 균주의 생육에 미치는 배지 성분에 대한 특성을 검토한 결과 본 균주는 pH 7.0, NaCl 3%, glucose 10%에서 가장 높은 균 생육 특성을 나타내었다. 그리고 본 균주의 amylase 생산에 미치는 탄소원의 영향을 검토한 결과, 본 균주는 soluble starch, corn starch, maize amylopectin 및 wheat starch 중에서 soluble starch를 탄소원으로 사용하였을 때 가장 높은 amylase 생산성을 나타내었다. B. subtilis CBD2유래 amylase의 활성에 미치는 반응조건을 검토한 결과 본 균주 유래 amylase는 pH 8.0 그리고 $50^{\circ}C$에서 가장 높은 효소 활성을 나타내었으며 기질특이성에 대한 검토에서는 corn starch>wheat starch>soluble starch>maize amylopectin 순으로 효소 활성을 나타내었다. B. subtilis CBD2가 생성하는 amylase 효소와 corn starch 기질 반응에 대한 전분 분해능 및 당 생성율 변화에서는 24시간에서 가장 높은 전분 분해능 및 당 생성율을 나타내어 corn starch를 이용한 효소 반응은 24시간이 가장 적절함을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구에서 분리된 균주는 GRAS 미생물인B. subtilis이었으며 본 균주 유래의 amylase 특성을 활용한다면 향 후 식품산업에 있어서 전분 분해 관련 분야에 유용하게 이용될 것으로 기대되어진다.

• 미생물학회지
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• 제32권4호
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• pp.271-279
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• 1994

${\alpha}$-Amylase와 glucoamylase를 동시에 안정하게 분비하여 전분을 일단계로 직접 에탄올로 발효시킬수 있는 효모 균주를 개발하기 위하여 glucoamylase를 분비하는 Saccharomyces diastaticus hybrid 균주에 쥐의 침샘 유래의 ${\alpha}$-amylase cDNA 유전자를 plasmid vector를 이용하여 도입하였다. 이 균주로부터 효소생산에 필요한 유전자를 잃어버림이 없이 안정하게 분비할 수 있도록 하기 위하여 $\alpha$-amylase 유전자를 효모의 염색체에 삽입시키기 위한 integrating plasmid vector인 YIpMS$\Delta$R(LEU2)를 제작하였다. 이 vector의 효모형질전환에 있어 원형(circular)상태와 제한 효소 XbaI으로 처리된 직선화된(linearized) 상태의 두가지 형태를 비교한 결과 형질전환 효율에서나 형질전환체내의 $\alpha$-amylase 유전자 보유정도가 모두 직선화된 형태의 경우가 원형상태의 경우보다 높았다. Linearized vecotr를 가진 효모 형질전환체에서의 유전자 발현 안정도는 세포분열을 거듭할수록 episomal vecotr에 의한 효모 형질전환체에서의 발현 안정도보다 우수하게 나타났다. 또한 이 linearized vector를 가진 형질전환체는 $\alpha$-amylase와 glucoamylase를 동시에 분비하여 glucoamylase만 분비하는 원균주보다 2배 이상의 전분분해력을 보였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권1호
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• pp.36-41
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• 2003

Saccharomyces cerevisiae로부터 외래 $\alpha$-amylase의 발현 및 분비를 증진시키기 위하여 여러 실험이 수행되었다. ADC1 promoter와 mouse salivary $\alpha$-amylase cDNA gene의 native signal sequence를 효모의 PRB1 promoter와 invertase leader sequence로 대치한 plasmid vector pCNN(AMY)를 제작하였다. 효모세포에서 생성된 $\alpha$-amylase의 세포외로의 분비율은 mouse o-amylase의 native signal sequence인 경우는 약 89.4%이었으며 invertase leader sequence로 치환된 경우는 96.3%로 분비효율이 증진되었다. 야생주인 K8l/pCNN(AMY)와 호흡결여변이주인 K81/pCNN(AMY)p-의 혐기적 조건하에서의 배양 결과 $\alpha$-amylase 생산량이 K8l/pCNN(AMY)보다 K81/pCNN(AMY)p-가 약 5~8배 정도 증가하였다. $\alpha$-Amylase의 생산에 있어서 배지조성에 따른 K81/pCNN(AMY)의 생산증진의 비교는 배지성분인 yeast extract와 peptone의 구성비율을 비교하였을 때 yeast extract 1%와 peptone 2%, NaCl의 경우 100 mM, 2-mercaptoethanol인 경우에는 0.015%(w/v)을 첨가하였을 때 최대 효소 활성을 나타내었고, 특히 2-mercaptoethanol인 경우에는 대조구에 비해 효소 생산량이 약 3배 정도 증진되었다.

• 한국식품영양학회지
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• 제11권4호
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• pp.381-387
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• 1998

The effects of culture conditions on the production of amylase expressed by Bacillus subtilis LKS88 with a cloned gene from Streptomyces albus KSM-35 were investigated. The production of amylase was increased significantly by using sodium citrate and rice hull as a carbon source. In addition, the use of a mixture of sodium citrate and rice hull (1:1) resulted in increase of enzyme production by 20-fold when compared to that of soluble starch. The soybean meal as the nitrogen source could be partially replaced with yeast extract without changing the enzyme production yield. The amylase production was also increased by adjusting initial pH to 6.0 or by adding 0.01% SDS. Maximum amylase production was observed in the medium containing 1.5% sodium cirtate, 1.5% rice hull, 0.7% soybean meal, 0.3% yeast extract, 0.66% K2HPO4, 0.05% MgSO4$.$7H2O, 0.008% CaCl2$.$2H2O, 0.01% SDS with initial pH of 6.0. The maximum yield of amylase reached 56.6 U/ml when B. subtilits LKS88 (pASA 240) was cultured at 37$^{\circ}C$ for 36 hr.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권3호
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• pp.529-533
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• 2001

The ${\beta}$-Amylase cDNA fragment from the oomcete Saprolegnia parasitica was cloned by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) using degenerate oligonucleotide primers derived from conserved ${\beta}$-amylase sequences. The 5'and 3'regions of the $\beta$-amylase gene were amplified using the rapid amplification of cDNA ends (rACE) system. It consisted of an open reading frame of 1,350 bp for a protein of 450 amino acids. Comparison between the genomic and cDNA sequences revealed that the intron was not present in the coding region. The deduced amino acid sequence of the ${\beta}$-amylase gene had a 97% similarity to the ${\beta}$-amylase of Saprolegnia ferax, followed by 41% similarity to those of Arabidopsis thaliana, Hordeum vulgare, and Zea mays. The ${\beta}$-amylase gene was also expressed in Saccharomyces cerevisiae by placing it under the control of the alcohol dehydrogenase gene (ADC1) promoter.

• 한국식품과학회지
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• 제1권1호
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• pp.85-89
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• 1969

1. Corn에서 분리(分離)한 강력(强力) amylase생산균주(生産菌株) A-162의 균학적(菌學的) 성질(性質)을 Bergey's manual에 따라 살펴 보면 Bacillus subtilis 에 유사(類似)하였다. 2. 효소생산(酵素生産) 배지(培地)로는 밀기울에 대(對)하여 corn powder 30%, milk casein 5%,$CaCO_3$ 5%를 첨가(添加)했을 때 가장 좋았다. 3. 배지(培地)의 증자조건(蒸煮條件)은 용기(容器)의 크기와 배지량(培地量)에 따라 달라야 했고 지나친 고압(高壓)과 장시간(長時間)의 증자(蒸煮)에 있어서는 균(菌)의 생육(生育)이 조해(阻害)되었다. 4. 생성(生成) amylase의 활성(活性) 최적온도(最適溫度)는 $50^{\circ}C$, 최적(最適) pH는 6.0 부근(附近)이었다.

• 한국식품과학회지
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• 제27권5호
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• pp.762-767
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• 1995

한국산 두류 중의 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질의 이화학적 특성에 관한 기초자료를 얻기 위하여 검정콩으로부터 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질을 분리, 정제하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 검정콩 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질도 SDS-PAGE상에서 단일밴드를 확인하였고, capillary electrophoresis에서 순도를 확인하였으며, 정제된 저해물질의 비활성도는 544.0 units/mg, 정제도는 약 18배였으며, SDS-PAGE 상에서 분자량은 25 KD이였다. 검정콩 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질의 주요 아미노산은 glutamic acid, aspartic acid 및 lysine 순이었다. 정색반응 결과 검정콩 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질은 당단백질로 추정되었으며, 탄수화물 함량은 3.2%로 나타났다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제15권1호
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• pp.1-7
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• 1973

누에의 소화액 Amylase 활성에 미치는 영양 및 환경의 영향을 알기 위하여 사료조성중에 당의 함량이 많은 A사료(따라서 단백질의 함량은 적음), 당과 단백질과의 량비가 약 1 : 2로 적당하다고 생각되는 B사료, 단백질의 함량이 많은 C사료(따라서 당의 함량이 적음)의 3종의 준합성사료를 사용하여 유충을 사육하고, 4 면기를 16$^{\circ}C$, $25^{\circ}C$, 32$^{\circ}C$로 각각 보호한 5령 5일째 유충의 소화액 Amylase 활성을 조사하였던바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 유충의 성육은 B사료보다 A사료나 C사료에 있어서 다같이 불량하였다. 2. 유충의 소화액 Amylase 활성은 4 면기 보호온도와 상관하지 않고 C사료＞ B사료＞ A사료의 순으로 강하였다. 3. 유충의 소화액 Amylase 활성은 A.B.C의 각 사료에 있어서 대개 같은 경향으로서 32$^{\circ}C$보다 16$^{\circ}C$에 있어서 강하였다. 4. 유충의 소화액 Amylase 활성에미치는 사료조성과 4 면기 보호온도와의 교호작용은 자에선 인정되지 않았으나 웅에 있어선 인정되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권1호
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• pp.65-71
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• 2001

A gene from Paenibacillus sp. KCTC 8848P encoding ${\beta}-amylase$ was cloned and expressed in Escherichia coli. The Paenibacillus ${\beta}-amylase$ gene cosisted of a 2,409-bp open reading frame without a translational stop codon, encoding a protein of 803 amino acids. The presumed ribosime-binding site, GGAGG, was located 10 bp upstream from the TTG initiation codon. The deduced amino acid sequence of the ${\beta}-amylase$ gene had a 95% similarity to the ${\beta}-amylase$ of Bacillus firmus. The ${\beta}-amylase$ gene was introduced into wild-type strains of Saccharomyces cerevisiae using a linearized yeast integrating vector containing a geneticin resistance gene and its product was secreted into the culture medium.