• KSBB Journal
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• 제6권2호
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• pp.143-146
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• 1991

세균액화형의 ${\alpha}-amylase$의 공업적 생산의 효율성을 높이기 위한 연구의 일환으로 제분공장과 도정공장의 분산물인 밀기울과 쌀겨를 이용하여 배양배지를 조성하고 B. subtilus와 A. oryzae 및 B. natto를 배양한 후 액화형 ${\alpha}-amylase$의 활성을 조사한 결과 B. subtilus와 A. oryzae의 경우 순수배지와 비교하였을 때 큰 차이가 없었으나 B. natto의 경우 외밀기울에서 액화활성이 다른 대구조에 비하여 크게 나타났는데 순수 배지를 이용한 액화활성은 crude enzyme에서 27.3 unit/ ml이고, 최종 액화 활성은 1,255.8u / ml인데 반해 외밀기울을 이용한 액화 활성은 crude enzyme에서 256.0 unit/ ml이고, 최종 액화 활성은 10,700 unit 이었으며 최적 배양온도는 $37^{\circ}C$이며 최적 배양액 pH는 6.8이었다. 그리고 정제된 효소의 분자량은 34,000dalton이었다. 이상의 결과로 보아 밀거울이 ${\alpha}-amylase$의 공업적 생산을 위한 저렴한 기질로 사용될만한 가치가 있다고 사료된다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제5권1호
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• pp.7-12
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• 2000

The expression of the mouse $\alpha-amylase$ gene in the methylotrophic yeast, P pastoris was investigated. The mouse $\alpha-amylase$ gene was inserted into the multi-cloning site of a Pichi a expression vector, pPIC9, yielding a new expression vector pME624. The plasmid pME624 was digested with SalI or BglII, and was introduced into P. pastoris strain GSl15 by the PEG1000 method. Fifty-three transformants were obtained by the transplacement of pME624 digested with SaiII or BglII into the HIS4locus $(38\;of\;Mut^+\;clone)$ or into the AOX1 locus $(15\;of\;Mut^s\;clone)$. Southern blot was carried out in 11 transformants, which showed that the mouse $\alpha-amylase$ gene was integrated into the Pichia chromosome. When the second screening was performed in shaker culture, transformant G2 showed the highest $\alpha-amylase$ activity, 290 units/ml after 3-day culture, among 53 transformants. When this expression level of the mouse $\alpha-amylase$ gene is compared with that in recombinant Saccharomyces cerevisiae harboring a plasmid encoding the same mouse $\alpha-amylase$ gene, the specific enzyme activity is eight fold higher than that of the recombinant S. cerevisiae.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권6호
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• pp.479-485
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• 1986

Bacillus amyloliquefaciens가 생성하는 액화형 $\alpha$-amylase의 구조유전자를 클로닝하기 위하여 이 균주 염색체의 2 - 5kb 획분을 분리하여 Mbo I으로 부분분해한 후 pUB110플라스미드의 BamHI 부위에 삽입하여 hybrid vector pSKS3 를 제작하였다. 이 재조합플라스미드를 세한수식결손 세포인 Bacillus subtilis ED 107에서 subcloning한 후 당화형 $\alpha$-amylase를 생성하는 Bacillus subtilis NA 64의 $\alpha$-amylase결실변이주 Bacills subtilis KM 107 주에서 형질 발현시켰다. 이때 형질전환빈도는 $10^{-5}$ - $10^{-7}$정도였으며 그중 약 50%가 $\alpha$-amylase 분비능이 있었으나 거의 대부분이 쉽게 실활되었다. 최종선별과정에서 $\alpha$-amylase를 가장 강하게 생성하는 형질전환주 Bacillus subtilis KM213으로부터 재 추출한 재조합플라스미드 pSKS3는 5.7kb 삽입된 단편이 BamH I/Mbo I 부위에 결합되어 있었다. pSKS3에 클로닝된 유전자에 의해 발현되는 $\alpha$-amylase 활성은 B. amyloliquefaciens 활성의 약 25%였으며, 이 pSKS3에 의해 발현되는 $\alpha$-amylase 단백은 B.amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase와 동일한 전기영동성을 나타내었음을 볼 때 pSKS3에 클로닝된 유전자는 B. amyloliquefaciens에서 유래함을 알 수 있었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제19권6호
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• pp.591-595
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• 1990

인삼saponin이 Saccharomyces rouxii의 생육속도나 고온충격으로부터의 정상회복속도를 크게 증가시킨다는 사실을 확인한 바 있다. 이러한 촉진효과의 원인을 추정하기위해 인삼saponin이 S. rouxii가 생산한 amylase의 활성에 미치는 영향이나 그 효소의 열변성에 미치는 보호효과를 조사해 본 결과는 다음과 같다. S. rouxii가 생산한 amylase의 환성은 pH 6.5에서 5$0^{\circ}C$로 반응시킴으로써 가장 크게 나타났다. 인삼saponin을 0.01% 첨가한 경우 amylase의 활성이 무첨가구에 비해 23% 정도 촉진되었으며, 인삼saponin 0.01%를 첨가한 경우 7$0^{\circ}C$로 가열처리시켜도 amylase의 활성이 무첨가 처리구에 비해 그 잔존활성 기준으로 28%나 열변성으로 부터 보호될 수 있었다. 이 결과로 미루어 보아 heat stress 받은 효모의 정상회복은 인삼saponin이 효소의 환성이나 효소의 열안정성에 기여하기 때문인 것으로 판단되었다.

• 한국환경농학회지
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• 제22권4호
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• pp.290-293
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• 2003

To measure an effects of strontium on secretion of ${\alpha}$-amylase and RNase, wheat aleurone layers were isolated after the pre-incubation in a solution with or without 10 mM $SrCl_2$ or $CaCl_2$ for 3 days at $25^{\circ}C$ in the dark under aseptic conditions. The secretion of ${\alpha}$-amylase reached a maximum at 72 h after incubation. $Sr^{2+}$ induced more effectively secretion of ${\alpha}$-amylase than $Ca^{2+}$. The ${\alpha}$-amylase secretions by $Sr^{2+}$ or $Ca^{2+}$ ware about $2 (Ca^{2+})$ to $2.5 (Sr^{2+})$ fold higher than it without divalent ions, When aleurone layers were incubated without divalent ions, however, the ${\alpha}$-amylase was remarkably retained in the tissues. Total ${\alpha}$-amylase synthesis (ie. tissues + media) was slightly lowered by 10mM $SrCl_2$ addition. It seemed that the RNase secretion begins at 18 h after incubation. This meaned that the RNase secretion may process slower than ${\alpha}$-amylasee secretion. $Ca^{2+}$ effect on RNase secretion is stronger than $Sr^{2+}$ unlikely to ${\alpha}$-amylase. The secretion process is likely to be suddenly induced between 72 hand 96 h. These results suggested that the secretion was enhanced after the accumulation in aleurone layers.

• Applied Biological Chemistry
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• 제13권2호
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• pp.153-170
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• 1970

1. Amylase 생산세균(生産細菌)의 분리(分離) 및 동정(同定) 다수(多數)의 amylase 생산세균(生産細菌)을 검색(檢索)하여 공기(空氣) 및 토양(士壞)에서 강력균주(强力菌株) A-12 및 S-8를 얻었다. 이들 균(菌)의 균학적(菌學的) 성질(性質)을 검토(檢討)한 결과(結果) 균주(菌株) A-12 및 S-8의 모든 특성(特性)은 Bergey's manual의 Bac. subtilis와 비슷하나 몇가지 탄수화물(炭水化物)로부터의 산생성(酸生成)과 구연산 이용성(利用性)이 달랐다. 즉(卽) A-12는 구연산을 이용(利用)하지 않고 arabinose와 xylose에서 산(酸)을 생성(生成)하지 않았으며 S-8는 xylose에서 산(酸)을 생성(生成)하지 않았다. 2. 액체배양(液體培養)에 의(依)한 Amylase 생산(生産) 정치배양(靜置培養)에 있어서 균주(菌株) A-12의 amylase 생산(生産)에 관(關)한 제반조건(諸般條件)을 검토(檢討)한 결과(結果)는 다음과 같다. (1) 최적조건(最適條件)은 배양온도(培養溫度) $35^{\circ}C$, 초발(初發) PH $6.5{\sim}7.0$, 배양기간(培養期間) $3{\sim}4$일(日)의 조건(條件)이었다. (2) 전배양(前培養)한 균(菌)의 보존기간(保存期間)는 amylase 생성(生成)에 영향(影響)을 주지 않았다. (3) amylase 생산(生産)에 있어서 각종(各種)의 고형원료중(固形原料中) 탈지대두박(脫脂大豆粕)이 가장 좋았다. 그러나 탈지대두박(脫脂大豆粕)을 alkali 처리(處理)한 것은 유채박(油菜粕)의 경우와는 반대(反對)로 그대로 사용(使用)하는 것보다 효과(效果)가 적었다. 대두박(大豆粕) alkali 침출액(浸出液)에 가용성(可溶性) 전분(澱粉)을 첨가(添加)한 배지(培地)는 amylase 생성(生成)을 뚜렷이 증가(增加)시켰다. (4) 탄소원(炭素源)이 부족(不足)한 배지(培地)에서는 1%의 ethanol의 첨가(添加)는 amylase 생성(生成)을 증가(增加)시켰으나 탄소원(炭素源)이 풍부(豊富)한 배지(培地)에서는 효과(效果)가 없었다. (5) 저렴(低廉)하게 구(求)할 수 있는 밀기울에 10%의 탈지대두박(脫脂大豆粕)을 혼합(混合)할 때에는 amylase 생성(生成)이 밀기울만의 경우의 2.5배(倍)로 증가(增加)되었다. (6) 탈지분유(脫脂粉乳)의 단용배지(單用培地)에서는 amylase 생성(生成)이 극(極)히 불량(不良)하였으나 탈지분유(脫脂粉乳)에 20%의 밀기울을 혼합(混合) 할때에는 amylase 생산(生産)이 월등(越等)히 증대(增大)되었다. 그 역가(力價)는 10% 농도배지(濃度培地)에서 $D^{40^{\circ}}_{30'}$ 7,000(L.S.V. 1,800)이었다. (7) 각종(各種) 무기염류(無機鹽類)의 첨가효과(添加效果)는 인정(認定)되지 않았다. 3. 밀기울 고체배양(固體培養)에 있어서 균주(菌株) A-12의 amylase 생산(生産)에 관(關)한 제반조건(諸般條件)을 검토(檢討)한 결과(結果)는 다음과 같다. (1) 최적배양조건(最適培養條件)은 배양온도(培養溫度) $33^{\circ}C$, 기간(其間) 2일간(日間) 첨수량(添水量) $150{\sim}175%$, 배지(培地)의 두께 1.5cm의 조건(條件)이었다. 최적조건(最適條件)에서의 amylase 역가(力價)는 $D^{40^{\circ}}_{30'}$ 36,000 (L.S.V. 15,000)이었다. (2) 각종(各種) 유기자원(有機資源) 및 무기물질(無機物質)의 첨가효과(添加?果)는 인정(認定)되지 않았다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권3호
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• pp.213-218
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• 1986

B. amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase 유전자가 S. cerevisiae 내에서 형질발현하는 가를 조사하기 위하여 본, 연구에서 YRp7 plasmid에 B. amyloliquefaciens amylase유전자를 cloning하여 만든 pEA24를 형질전환시켰다. 먼저 YRp7 plasmid를 이용하여 형질전환 최적 조건을 검토하여 본 바, PH 7과 8사이, 반응온도 3$0^{\circ}C$에서 40%의 polyethylene glycol(MW 4,000)을 처리한 후 2 %의 agar를 함유한 재생배지에 중층도말 하였을 때 형질전환율이 가장 높았다. 형질전환주로부터 생성된 amylase의 활성을 측정한 결과, S. cerevisiae에서 약간의 amylase활성을 나타내어 최고 B. amyloliquefaciens의 2% 정도였고, 세포외효소는 검출되지 않았다. 이들 형질전환 주가 가지고 있는 pEA24 plasmid의 안정성을 조사한 결과 YRp7보다 불안정하였으며, 추출한 DNA를 전기영동하여 그 band를 확인하였다.

• 미생물학회지
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• 제31권2호
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• pp.175-178
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• 1993

Alkaline .alpha.-amylase expressed in the transformant, Baciollus subtills MB809, containing alkaline amylase gene cloned from alkalophilic Bacillus sp. AL-8, was purified through for step separation processes. The purified alkaline .alpha.-amylase had molecular weight of app[roximately 59, 000 daltons on SDS-PAGE and Sephaex G-100 gel filtration. Amino acid sequence of terminal portion of the enzyme was analyzed with pure amylase eluted form the SDS-PAGE gel. N-terminal amino acid sequence of .alpha.-amylase was determined by the Edman degradation method and resulted in $NH_{2}$-ser-thr-ala-pro-ser-(ile)-lys-ala-gly-thr-(ile)-leu. For C-terminal amino acid sequencing, purified .alpha.-amylase was digested with carboxypuptidase A and B, and reverse-phase HPLC gradient elution system resulted in -thr-trp-pro-lys-COOH.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권3호
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• pp.166-173
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• 1992

The expression of Bacillus subtilis $\alpha$-amylase from the phoA-amyE fusion gene in recombinant E. coli was investigated under various environmental conditions. The overexpression of cloned $\alpha$-amylase caused retardations in cell growth and synthesis of alkaline phosphatase (AP) from the chromosomal phoA gene. The change of culture temperature from $37^\circ{C}$ to $30^\circ{C}$ increased the specific activities of both $\alpha$-amylase and $\beta$-lactamase by six and two times, respectively, whereas the AP activity remained unchanged. The experiments with chlorampenicol (a translation inhibitor) suggested the enhancement of $\alpha$-amylase activity at $30^\circ{C}$, and this was partly due to the stability of $\alpha$-amylase itself. The further decrease of the temperature to $25^\circ{C}$ slowed down both the cell growth and cloned-gene expression rate. The $\alpha$-amylase activity showed a maximum at pH of 7.4 while alkaline phosphatase was most effectively produced at pH of 8.3.

• Journal of Pharmaceutical Investigation
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• 제19권4호
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• pp.185-190
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• 1989

The release of angiotensin and ${\alpha}-amylase$ from monolithic devices of different molecular weight of polyethylene glycol (PEC) grafted polyurethane copolymer was investigated. Water-soluble PEG grafted polymer provided a controlled release of angiotensin and ${\alpha}-amylase$. The release rate of angiotensin and ${\alpha}-amylase$ could be controlled by varying the molecular weight of PEC grafted. The release mechanism may be associated with the creation of pore or domain through the devices following the gel swelling and self-aggregation by PEC grafted polymer. Hydrophobic polyurethane grafted with PEG can provide a biomaterial for prolonged release of angiotensin and ${\alpha}-amylase$ from angiotensin and ${\alpha}-amylase$ blended system.