• Animal cells and systems
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• 제6권2호
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• pp.181-181
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• 2002

Nek2 is a mammalian protein kinase that is structurally homologous to NIMA, a mitotic regulator in Aspergillus nidulans. We recently observed that the Nek2 protein was localized in multiple sites within a cell in a cell cycle state-specific manner. This suggests that Ndk2 is involved in diverse cellular functions during the cell cycle progression. To have a better understanding on cellular functions in which Nek2 participates, we carried out yeast two-hybrid screening and isolated six candidate clones whose products interact with Nek2. Most of Nek2-interacting proteins (NIPs) appear cytoplasmic, suggesting that Nek2 is involved in cellular functions in cytoplasm. Further experiments are under progress to confirm their interactions with Nek2 and to understand their biological significance.

• 한국컴퓨터정보학회논문지
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• 제14권5호
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• pp.175-182
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• 2009

Yeast를 이용하여 Two-Hybrid System 실험을 통해 밝혀진 단백질 상호작용 데이터에 단백질 위치 정보를 이용하여 가중치를 부여하고 단백질 신호 전달 경로를 추출하였다. 그 결과 중 MAPK Hypotonic Shock 기능의 데이터를 가지고 KEGG에서 제공하는 신호전달 경로와 비교하여 어느 정도 일치하는지의 유사도를 측정하고 시뮬레이션 하였다. 이때 프로세스 실행 시간도 측정하여 제시하였다. 향후 연구를 발전시키면 다양한 유전적 질병의 원인과 치료제 개발의 단서를 제공할 수 도 있으며 더 나아가 신약 개발을 할 수 있다.

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 1998년도 한국생물과학협회 학술발표대회
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• pp.339.1-339
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• 1998

No Abstract, See Full Text

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 1996년도 한국생물과학협회 국제학술대회
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• pp.221.1-221
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• 1996

No Abstract, See Full Text

• BMB Reports
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• 제35권6호
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• pp.562-567
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• 2002

In order to find the cellular interaction factors of the Heliothis armigera nuclear polyhedrosis virus capsid protein VP39, a Heliothis armigera cell cDNA library was constructed. Then VP39 was used as bait. The host actin gene was isolated from the cDNA library with the yeast two-hybrid system. This demonstrated that VP39 could interact with its host actin in yeast. In order to corroborate this interaction in vivo, the vp39 gene was fused with the green fluorescent protein gene in plasmid pEGFP39. The fusion protein was expressed in the Hz-AM1 cells under the control of the Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus immediate early gene promoter. The host actin was labeled specifically by the red fluorescence substance, tetramethy rhodamine isothicyanete-phalloidin. Observation under a fluorescence microscopy showed that VP39, which was indicated by green fluorescence, began to appear in the cells 6 h after being transfected with pEGFP39. Red actin cables were also formed in the cytoplasm at the same time. Actin was aggregated in the nucleus 9 h after the transfection. The green and red fluorescence always appeared in the same location of the cells, which demonstrated that VP39 could combine with the host actin. Such a combination would result in the actin skeleton rearrangement.

• Plant Biotechnology Reports
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• 제3권2호
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• pp.127-134
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• 2009

Members of the NAM-ATAF-CUC (NAC) protein family are plant-specific transcription factors that contain a highly conserved N-terminal NAC-domain and diverse C-terminal regions. They have been implicated in plant development and abiotic stress responses. To identify interacters of rice NAC-domain proteins (OsNACs), we performed yeast two-hybrid screening of rice cDNA library using OsNAC5 as a bait, and the results showed that OsNAC5 interacts with other OsNACs including itself. To delineate an interacting domain, a series of deletion constructs of four OsNACs were made and transformed into yeast in various combinations. The results revealed that the conserved NAC domain of OsNACs plays a primary role in homodimer and heterodimer formation, and a part of C-terminal sequence is also necessary for the interaction. In vitro pull-down assays using recombinant OsNAC proteins verified the dimer formations, together suggesting that OsNACs may act by forming homodimers and/or heterodimers in plants.

• 생명과학회지
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• 제20권8호
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• pp.1166-1172
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• 2010

Kinesin-I은 4분자의 단백질로 구성되어 있으며, N-말단의 motor 영역과 C-말단영역을 가지는 장쇄(KHC, 또한 KIF5s로도 통용) 2분자와 KIF5s (KIF5A, KIF5B와 KIF5C)의 줄기영역과 결합하는 단쇄(KLC) 2분자로 구성되어 있다. KIF5A의 결합 단백질을 동정하기 위하여 효모 two-hybrid system을 사용하여 특이적으로 결합하는 heterotrimeric G 단백질의 ${\beta}$ 단위체 단백질($G{\beta}$)을 분리하였다. $G{\beta}$은 KIF5A의 808에서 935아미노산 부위와 결합하며, 다른 KIF5들과도 결합함을 효모 two-hybrid assay로 확인하였다. 또한 $G{\beta}$의 WD40 반복 서열은 KIF5A와의 결합에 필수영역임을 확인하였으며, 이러한 단백질간의 결합은 Glutathione S-transferase (GST) pull-down assay를 통하여 확인하였다. 생쥐의 뇌 파쇄액에 KIF5들의 항체로 면역침강을 행하여 heterotrimeric G 단백질을 확인한 결과, KIF5들은 heterotrimeric G 단백질과 특이적으로 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 kinesin-I는 heterotrimeric G 단백질이 포함된 소포를 미세소관을 따라 이동시킴을 시사한다.

• Journal of Microbiology
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• 제34권4호
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• pp.327-333
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• 1996

Yeast, like many other microbes, encounters large variations in ambient pH in their natural environments. Microorganisms capable of growing over a wide pH range require a versatile, efficient pH homeostatic mechanism protecting intracellular processes against extremes of pH. In several organisms, fusions to the bacterial lacZ gene have been extremely useful for the identification of genes expressed at different time during the life cycle or under different growth conditions. In this study, using the lacZ gene screening system, we surveyed a large number of yeast strains with lacZ insertion to identify genes regulated by pH. A yeast genomic library was constructed and inserted with lacZ by a shuttle mutagenesis procedure. The yeast transformants were individually picked up with a toothpick, replica-plated, and grown in alkaline pH medium. Among the 35,000 colonies screened, 10 candidate strains were identified initially by the $\beta$-gal assay. We finally confirmed two yeast strains carrying the genes whose expression are strictly dependent on pH of growth medium. One of the fusions showing a 10-fold induction in expression level in response to alkali pH was selected and further characterized. The pH-regulated gene was cloned by inverse PCR and a partial sequence of the gene was determined. Identification and characterization of the gene is currently under investigation.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제33권4호
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• pp.255-259
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• 2005

본 실험에서는 HRF의 조절단백질을 알아보기 위해 HRF를 bait로 한 yeast two hybrid assay를 실행한 결과 해당과정에 관여하는 TPI(triosephosphate isomerase)라는 효소를 발견하였으며, 가장 많이 중복되어 있었다. In vitro에서 HRF는 TPI의 C말단 잔기 부근(아미노산 156-249)이 상호작용에 주로 관여하는 부위임을 알 수 있었다. 또한, HeLa 세포에서 immunoprecipitation을 이용하여 HRF와 TPI의 상호작용이 실제 in vivo에서도 일어나는 현상이라는 것을 밝혔다. 결과적으로 HRF와 TPI 상호작용은 세포내 일정량이 존재하며 여러가지 신호전달에 의해 동시에 Na,K-ATPase와도 상호작용하는 것으로 생각된다.

• 자연과학논문집
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• 제14권2호
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• pp.83-91
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• 2004

박테리오 파이지 K11 lysozyme은 최근에 우리 실험실에서 클로닝 되었으며, 숙주균주의 세포벽을 분해하는 고유의 lysozyme활성과 박테리오 파아지 K11 RNA 중합효소의 전사반응을 억제하는 활성을 가지고 있는 것으로 확인되었다. 이미 잘 연구된 박테리오 파아지 T7 lysozyme의 경우 클로닝되고 분리 정제된 T7 lysozyme 단백질의 3차 구조 및 T7 RNA 중합효소와의 결합양상에 대하여 밝혀졌다. 따라서 우리 실험실에서는 K11 lysozyme과 K11 RNA 중합효소와의 결합 정도 및 그 특성을 파악할 목적으로 yeast two hybrid 시스템을 통하여 K11 RNA 중합효소와 K11 lysozyme의 단백질-단백질 상호작용을 알아보고자 하였다. LexA 시스템을 이용하여 LexA DNA 결합 부위를 갖고 있는 pLexA에 K11 lysozyme 유전자를 삽입하여 prey로 하였따. 활성 부위로는 B42 융합 단백질을 만드는 pJG4-5에 K11 RNA 중합효소의 결합은 생체 밖에서 reporter 유전자인 lacZ와 leu2의 발현으로 확인되었으며 이들의 결합정도와 결합부위에 대한 연구들은 진행중에 있다.