• 제목/요약/키워드: Yeast invertase

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Secretion of Bovine $\beta$-Casein by Saccharomyces cerevisiae

  • Chung, Kun-Sub;Rafael, F.R.;Oh, Sang-Suk;Richardson, T.
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제1권1호
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    • pp.31-36
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    • 1991
  • Yeast expression plasmids containing an appropriate leader sequence and bovine $\beta$-casein cDNA were constructed to produce $\beta$-casein for the study of its functional characteristics. Two kinds of expression systems for $\beta$-casein were constructed using pCGYl444 as a precursor plasmid. This plasmid is a yeast-E. coli shuttle vector which contains the chelatin promoter. The plasmid pISB202 contains the invertase leader sequence and $\beta$-casein gene. The plasmid pDEB303 contains the original bovine $\beta$-casein leader sequence gene. These two plasmids were introduced into S. cerevisiae AB116 which is a strain deficient in the major yeast proteinases. Each clone was grown in minimal media for 24 h before induction by $CuSO_4$. The cells were thus grown under expression conditions. Both strains harbouring pISB202 and pDEB303 expressed bovine $\beta$-casein. The $\beta$-casein was detected using immunochemical staining after western blot. Secretion of $\beta$-casein was detected in the culture broth. The estimated amount of secreted $\beta$-casein was approximately 50 ${\MU}g$/l.

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식혜주에 관한 연구 -3보. 시판식혜 올리고당주- (Studies on Sikhye Wine -3. Commercial Sikhye Wine-)

  • 안용근;김승겸;신철승
    • 한국식품영양학회지
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    • 제10권3호
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    • pp.370-374
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    • 1997
  • 시판 식혜에 Saccharomyces cerevisiae를 가해 29$^{\circ}C$에서 10일간 발효시켜서 식혜주를 제조하였다. TLC 및 HPLC 분석 결과 발효에 따라 수크로오스는 2일째부터 글루코오스와 프룩토오스로 가수분해되어 발효되었다. 수크로오스는 6일째에 완전히 없어지고, 8일째에는 글루코오스, 프룩토오스 모두 없어졌다. 에탄올은 6.6%를 나타냈다. 시판 식혜주의 아미노산 함량은 0.32$\mu$mol/ml, 단백질 함량은 226$\mu\textrm{g}$/ml을 나타냈다. pH는 3.21, 산도는 2.5ml를 나타냈다. 한계덱스트린은 1H-NMR로 분석 결과 시판 식혜와 구조상 차이가 없었다. $\alpha$-1,4- 결합에 대한 $\alpha$-1,6- 결합의 비율은 25:1을 나타냈다. 관능검사 결과, 맛은 와인과 비슷하였다.

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재조합 효모를 이용한 endoinulinase의 생산 특성

  • 한지혜;이은미;윤영미;이현철;정봉우;채건상
    • 한국생물공학회:학술대회논문집
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    • 한국생물공학회 2000년도 춘계학술발표대회
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    • pp.478-481
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    • 2000
  • The INU2 gene encoding an endoinulinase of Aspergillus ficuum was expressed by the Kluyveromyces marxianus INU1 promoter in a SUC2-deleted Saccharomyces cerevisiae to produce the endoinulinase free of an exoinulinase and an extracellular invertase in the culture medium. When inulin was included in the medium, a recombinant yeast strain produced the sufficient amount of the enzyme to make a halo around its colony. An expression of endoinulinase was dependent on the culture temperature and shaking. The highest expression of endoinulinase was observed at $30^{\circ}C$, and 150rpm.

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Analysis of Secretion Behavior of Human Lysozyme from Recombinant Saccharomyces cerevisiae

  • MARTEN, MARK R.;NAM SOO HAN;JIN BYUNG PARK;JIN-HO SEO
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제9권5호
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    • pp.576-581
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    • 1999
  • Effects of signal sequences, protein sizes and dissolved oxygen on the secretion of human lysozyme from a recombinant yeast were experimentally characterized. The systems consisted of Saccharomyces cerevisiae host SEY2102 that was transformed with two different plasmids. These plasmids were identical with an exception to the plasmid pMC614, which contained the native yeast MFα1 sequence and the plasmid pMC632 with the non-native rat α-amylase signal sequence. The expression of human lysozyme was controlled by the ADHI promoter. The native yeast MFαl signal sequence was more efficient than the non-native rat α-amylase signal sequence in directing the secretion of human lysozyme. Lysozyme secreted with the α-amylase signal was retained inside the cells and released to the medium very slowly, thereby causing a lower cell growth rate and a decreased product secretion rate. Lysozyme was secreted more efficiently than invertase, which is an order of magnitude bigger in molecular size compared to lysozyme, which was under the direction of the MFαl signal sequence, suggesting that protein sizes may affect the secretion efficiency. When expressed in anaerobic conditions in the medium where the ADHI promoter was derepressed, the amount of lysozyme secreted was about twice higher than that of the aerobic culture. However, the secretion rates were identical. This result showed that the dissolved oxygen level may affect the efficiency of protein secretion only, and not the secretion rate of the product protein.

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황색종 잎담배의 발효숙성 촉진에 관한 종합적 연구 (A Comprehensive Study on the Forced Aging of Flue-cured Tobacco-Leaves)

  • 배효원
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제13권1호
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    • pp.1-27
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    • 1970
  • 황색종 잎담배의 인공발효숙성은 효모처리에 의한 인공발효, 단순한 인공숙성, 2년 저장숙성 및 미처리구로 나누어 미생물학, 물리학, 화학, 생화학적으로 그 변화과정을 종합적으로 연구하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 한국산 잎담배 Y.S.A의 발호숙성을 촉진시키는 최적 조건으로서는 및 담배를 온도 $40^{\circ}C$평형함수율 18%, 관계습도 74%에 놓아두는 것이 잎담배의 모든 품질적 특성에 가장 양호한 결과를 주는 것임을 알게되었다. 2. 잎담배를 $40^{\circ}C$의 숙성온도 및 74%의 상대습도에서 효모를 첨가하여 약 20일 내외에서 숙성을 촉진시켜 숙성시키면 잎담배의 여러가지 물리적 및 화학적 특성이 1년 및 2년 저장숙성시킨 것과 비슷하게 됨을 알게 되었음으로 그 실용적 효과를 입증할 수 있었다. 3. 온도 $40^{\circ}C$와 평형함수율 18%의 숙성조건하에서 잎담배에 효모를 첨가하여 또는 단순히 조기숙성시켰을 때 잎담배는 그 숙성에 필요한 물리화학적 특성은 약 20일만에 얻을 수 있다는 것을 알게되었다. 4, 본 실험에서 잎담배의 발효숙성기간중 미생물의 동태는 효모와 세균은 15일까지 증가하였다가 감소하였고 곰팡이류는 끝까지 계속 증가하였다. 5, 효모구 및 속성구 잎담배의 이화학성은 발효숙성이 $15{\sim}20$일 진행함에 따라 pH는 저하하였고 팽승성과 연소성이 양호하여 졌고 자극순도, 명도주재파장등 색택에 관련되는 물리성이 2년저장 잎담배와 비등하여졌다. 또 총환원성물질, 전당, 전환원당, 알카로이드량은 감소하였고 유기산, ether 추출물은 증가, 전질소 및 단백질량, 조섬유, 회분등은 별 변화가 없었다. 6. 효모 및 속성구의 잎담배는 발효숙성이 15-30일 진행되는 동안 그 개개의 화학성분이 다음과 같이 변화하였다. 즉, 시일이 경과함에 따라 당 류-sucrose, rhamnose, glucose 색소류-chlorophyll, carotenes, xanthophyll, violaxanthine polyphenols-rutin, chlorogenic 및 caffeic acid 유기산-iso?tutylic, crotonic, capronic, galacturonic,tartaric, succinic, citric acid 알카로이드-nicotine,nornicotine등 화합물은 감소하였다. 한편 시일이 경과함에 따라 당 류-fructose, maltose, raffnose 아미노산-proline, cystine, 유 기 산-formic, acetic, propionic, malic, oxalic,malonic, α-ketoglutaric, fumaric, glutaric acid 등 화합물은 증가하였다. 7. 잎담배 발효숙성중 생화학적 특성의 변화는 다음과 같았다. 즉, 30일간의 발효숙성기간중 산소흡수량은 점차 감소하였으며, ${\alpha}-amylase$ ${\beta}-amylase$}활성도는 점차 약하여 졌으나 catalase, invertase는 그 활성도가 일단 숙성중기에 높아졌다가 낮아졌다.

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당밀로부터 Ca^{++} 및 Cu^{++} 이온 제거가 효모 생육 및 RNA축적에 미치는 영향 (Effect of Ca^{++} and Cu^{++} Removal from Molasses on Yest cell Growth and RNA Accumulation.)

  • 김재범;허선연;김중균;남희섭;남수완
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제31권3호
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    • pp.211-215
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    • 2003
  • 고함량 RMh 효모인 Saccharomyces cerevisiae MTY62를 당밀과 com steep liquor를 공급하는 유가배양에서, 세포농도는 45g-DCW/L 이하, RNA 함량은 140mg/g-cell 로 얻어졌다. 이는 균체증식과 RMh축적에 당밀 내에 존재하는 저해물질 때문으로 생각되어 이를 제거하기 위해 다양한 당밀 전처리제의 효과를 조사하였다. 당밀로부터 금속이온 제거 효과는 Na2HPO4와 EDTA를 혼합 처리했을 때 $Ca^{++}$ 는 90% 이상 $Cu^{++}$ 는 약 80% 제거하는 결과를 나타내었고, Na2HPO4와 EDTA, IonClear BigBead 등의 3가지를 혼합 처리했을 때는 $Ca^{++}$ , $Cu^{++}$ 둘 다 90% 이상 제거되는 결과를 나타내었다. Na2HPO4+EDTA처리 당밀의 경우세포내 invertase활성을 크게 증가시켰다. 전처리 당밀로 회분배양한 결과, 세포농도는 18.6g-DCW/L, RNA농도는 3127mg/l, 최대비증식속도($\mu_{max}$ )는 0.459 $h^{-1}$ , 환원당 비소모속도(g-sugar/g-cell$.$h)는 1.28로,대조구에 비해 각각 10%, 17%, 47%, 36%로 증가한 값을 보였다.

Action Mechanism of Transfructosylation Catalyzed by Microbacterium laevaniformans Levansucrase

  • KIM, MIN-JEONG;PARK, HAE-EUN;SUNG, HEE-KYUNG;PARK, TACK-HYUN;CHA, JAE-HO
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제15권1호
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    • pp.99-104
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    • 2005
  • Microbacterium laevaniformans levansucrase synthesized various hetero-oligosaccharides by transferring fructosyl residue from sucrose to various saccharides as acceptors. The acceptor specificity test showed that reducing saccharides were more favorable acceptors than nonreducing saccharides. The transfructosylated product, fructosyl galactose, was produced in the presence of D-galactose as an acceptor. The chemical structure of the resulting fructosyl galactose was analyzed by yeast invertase and NMR, and identified as O-$\alpha$-D-galactosyl-(1${\to}$2)-$\beta$-D-fructofuranoside. These results indicate that the main transfructosylation activity of the enzyme is to make nonreducing transferred products via a transfer of fructosyl residue to acceptor molecules having reducing group. When nonreducing sugars, such as methyl $\alpha$-D-glucoside and methyl $\alpha$-D-galactoside, were used as an acceptor, the transfer product was also formed in spite of the reducing group blocked with methyl group. The fact that no transfer product was formed with sugar alcohols as acceptors was suggested to be due to marked conformational difference of acceptors.

엽연초(葉煙草) 발효중(醱酵中) 효소활성도(酵素活性度)의 변화(變化)에 관(關)한 연구(硏究) (Studies on the Change of Enzyme Activities during the Fermentation of Tobacco Leaves)

  • 김호식;전재근;이서래;배효원;성현순
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제8권
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    • pp.75-80
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    • 1967
  • 엽연초발효과정중(葉煙草醱酵過程中) 효소활성도(酵素活性度)의 변화(變化)를 관찰(觀察)하기 위하여 엽연초(葉煙草)를 엽초(葉草)와 각초(刻草)의 상태(狀態)로 $30^{\circ}C$$39^{\circ}C$에서 효모접종(酵母接種)에 의(依)한 발효(醱酵)와 통상발효(通常醱酵)에 의하여 20 일간(日間) 숙성중(熟成中) 매(每) 5일(日)마다 여러 가지 효소(酵素)의 활성도(活性度)를 측정(測定)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1) Amylase의 활성(活性)은 발효(醱酵)가 진행(進行)됨에 따라 계속 감소(減少)하였다. 2) Invertase 와 catalase는 발효중기(醱酵中期)까지 계속 감소(減少)하고 그 후 다시 증가하였으며 catalase의 경우 그 변화(變化)가 더욱 현저하였다. Peroxidase는 발효전과정(醱酵全過程)을 통(通)하여 상당(相當)한 활성(活性)을 보여주었고, 뚜렷한 증감(增減)이 없었다. 3) 효모처리구(酵母處理區)와 비처리구간(非處理區間)에는 효소활성(酵素活性)의 차이(差異)가 거의 없었으나 엽초(葉草), 각초(刻草) 및 발효온도(醱酵溫度)의 구분(區分)에 따라 차이(差異)가 있었으며, 그 경향(傾向)은 일률적(一律的)이 아니었다. 4) Polyphenol oxidas는 미발효엽(未醱酵葉)에서 상당한 활성(活性)을 보였으나 발효가 진행(進行)됨에 따라 격감(激減)하였다.

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Bacillus subtilis B0021가 생산하는 Gelatin 분해성 Proteolytic Enzyme 생산의 최적의 연구 (A Study on the Optimum Conditions of Gelatin-Degrading Proteolytic Enzyme Production from Bacillus subtilis B0021)

  • 백대헌;이항우복성해
    • KSBB Journal
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    • 제10권4호
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    • pp.374-385
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    • 1995
  • Gelatin 분해성 proteolytic enzyme 생성균인 B. subtilis 80021가 생산하는 세포외 단백칠 분해효소 생산을 위한 영양 요구성과 배양조건을 검토한 결과 는 다음과 같다. 영양요구성은 1.5%(w/v) glucose와 2.5% (w/v) yeast extract에서 효소활성도가 최고치를 나타내였고 metalion은 $Co^{2+}, Zn^{2+}$효소생성의 저해제로 작용한 반면 $Fe^{2+}와 Mn^{2+}$에서는 촉진제로 작용 하여 최고 3.5배 효소생산생이 증가하였다. 아미노산 첨가 영향에서는 대부분의 아미노산이 효소활생 을 촉진시키는 것으로 확인되였다. 배지의 최적초기 pH는 7.0 부근이며 배양온도는 $35^{\circ}C$에서 효소에 따 라 다소 차이는 였었으나 배양시간 30시간 정도에서 최고의 효소생산성을 나다내었고 30°C에서는 42시간째에 효소활성도가 최고치를 나타내였다. Tannic acid 첨가에 대한 만백질 분해효소 생산에서는 발효 애지에 tannic acid 첨가시 완전한 효소생산 저해제로 작용하였으며 salicin을 탄소원으로 한 salicinase assay에서는 온도 빛 배양시간에 관계없이 효소활성 을 보이지 않았고 복합탄소원 이용에 대한 amylase assay에서는 $35^{\circ}C$, 36시간째에 최대의 효소활성을 나타내였고 Invertase assay에서는 $35^{\circ}C$, 30시간째 에 최대 효소활성도 2.5unit/ml을 나타내였다. 또한 gelatin 가수분해능에서는 45% (w/v)의 gelatin 용 액의 점도가 발효조효소액에 의해 96% (mPas)의 정도저하를 가져오는 것으로 확인되었다.

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