Phytoestrogens, especially Yak-kong or soybean-derived isoflavones have been traditionally used as a supplement of estrogen for preventing postmemopausal osteoporosis in oriental folk medicine. In our previous study, the treatment of Yak-kong and soybean increased estrogen receptor-a (ERa) expression and proliferation of MG-63 osteoblastic cells. In contrast, the increase of estrogen receptor-$\beta$ (ER$\beta$) expression in proliferating MG-63 cells with Yak-kong and soybean treatment was less pronounced, which suggested that ER$\beta$ may play a role rather in the regulation of bone cell differentiation To determine the role of ER$\beta$ in Yak-kong or soybean mediated regulation of bone cell differentiation, we established MG-63 cell lines stably expressing either ER$\beta$ or antisense ER$\beta$ RNAs. Increased expression of ER$\beta$ did not affect ERa expression and proliferation of MG-63 cells. However, increased expression of ER$\beta$ in MG-63 cells (ER$\beta$-MG63 cells) selectively enhanced Yak-kong or soybean induced expression of osteoprotegerin (OPG), a novel soluble glycoprotein which is secreted from osteoblasts and mediates the signal for osteoclast differentiation. Inhibition of ER$\beta$ expression by antisense ER$\beta$ RNAs (As-ER$\beta$-MG63) caused these cells to insensitize Yak-kong or soybean induced expression of OPG but increased MG-63 cell proliferation. Furthermore, the comparable effects between Yak-kong and the combined treatment of genistein and daidzein at $0.5{\times}l0^{-8}$ M, which is a concentration of these two isoflavones similar to Yak-kong at 0.001 mg/mL, on OPG expression in ER$\beta$-MG63 cell demonstrate that the enhanced expression of OPG with Yak-kong treatment is mediated by the synergistic effect of low leveled isoflavones in the extracts. Together, coupled with low level of ER expression in osteoclasts, our data demonstrate that ER$\beta$ in osteoblasts plays an important role in Yak-kong and soybean mediated inhibition of osteoclast differentiation indirectly by enhancing the expression of OPG.
Phytoestrogens, especially Yak-kong or soybean-derived isoflavones have been traditionally used as a supplement of estrogen for preventing postmenopausal osteoporosis in oriental folk medicine. In a previous study, we demonstrated that as Yak-kong and soybean increased MG-63 human osteoblastic cell proliferation, the expression of estrogen receptor $\alpha\;and\;beta\;(ER\;\alpha:\;ER\;\beta$) both were increased. However, the increased level of ER $\alpha$ is much higher than that of ER$\beta$. To determine whether the altered level of ER $\alpha$ expression affects Yak-kong or soybean induced MG-63 cell proliferation, we established cell lines stably expressing either ER $\alpha$ or antisense ER $\alpha$ RNAs. Increased expression of ER a in MG- 63 cells (ER $\alpha$-MG63) enhanced Yak-kong or soybean induced proliferation which paralleled with the enhanced expression of IGF-I. Inhibition of ER $\alpha$ expression by antisense $ER\;\alpha\;RNAs\;(As-ER\;\alpha-MG63$) caused these cells to insensitize Yak- kong or soybean induced proliferation and IGF-I expression. Furthermore, the comparable effects between Yak-kong and the combined treatment of genistein and daidzein at $0.5\;{\times}\;10^{-8}M$, which is a concentration of these two isoflavones similar to Yak-kong at 0.001 mg/ml, on cell proliferation and IGF-I expression in $ER\;\alpha-MG63\;or\;As-ER\;\alpha-MG63$ cells demonstrate that ER $\alpha$ plays an important, active role in MG-63 cell proliferation induced by phytoestrogens, especially Yak-kong or soybean derived isoflavones.
Phytoestrogens, especially soy-derived isoflavones, are receiving great scrutiny as a food supplement for preventing hormone dependent diseases such as cardiovascular diseases, cancer, and osteoporosis. These beneficial effects of phytoestrogens are caused by functioning as partial agonists or antagonists of estrogens. In contrast to the common usage of soy bean, Yak-kong(Rhynchosia Molubilis ; ) has been used as supplements of estrogen fir preventing postmenopausal osteoporosis in Oriental medicine. To investigate estrogenic effects of Yak-kong and soy bean on the proliferation of MG-63 osteoblastic cells, each bean was extracted with 70% methanol and dried by freeze-drying. Yak-kong treatment of MG-63 cells resulted in an increase of cell proliferation to a maximum of 76% compared to 68% of soy bean treatment. Treatment of MG-63 cells with Yak-kong extract also resulted in an increase of transactivation of an ERE(estrogen response element)-luciferase reporter plasmid and IGF-I expression selectively. Despite increased effects of both bean treatments on the expression of estrogen receptor $\alpha$(ER$\alpha$) and $\beta$(ER$\beta$), soy bean treatment decreased transactivation of an ERE-luciferase reporter plasmid and did not further enhance IGF-I expression. Together, our data demonstrates that the greater estrogenic response of Yak-kong extract for MG-63 cell proliferation is mediated by ER derived transactivation of ERE and selective induction of IGF-I expression.
본 연구에서는 이미 항산화 효과로 알려져 있는 대두와 약성이 탁월한 약콩에서 AChE 활성 억제효과와 Free radical scavenger 효과를 노화로 인한 질병 예방효과에 대한 기초자료를 제공하고자 수행하였다. 1. 대두 열탕 추출물의 경우 저농도인 1, 0.1 mg/$m\ell$에서는AChE의 활성 억제 효과가 메탄을 추출물보다 높았다. (P<0.001) 2. 대두, 약콩 메탄올 추출물에서는 고농도인 5 mg/$m\ell$에서 각 시료의 효과가 62.0$\pm$2.43%, 65.0$\pm$3.29%로 비슷했으나 저농도인 0.1 mg/$m\ell$에서는 약콩의 경우 25.5$\pm$0.94%로 약콩이 대두에 비해 유의적인 AChE 억제효과를 나타냈다. (p<0.001) 3. 시간에 따른 Free radical scavenger효과는 비타민 C의 경우 시간에 따라 비슷한 효과를 보였으나 대두와 약콩은 incubating 시간에 따라 free radical 억제효과가 증가해 높은 항산화 효과를 볼 수 있었다. 4. 대두, 약콩 메탄올 추출물에서는 약콩이 고농도인 5mg/$m\ell$에서 약4배 정도의 효과를 보였으며 Free radical scavenger의 50%효과를 나타내는 $IC_{50}$/에서는 약 10배 정도로 높은 Free radical scavenger 효과를 나타내 약콩이 대두에 비해 유의적으로 높은 효과를 나타내었다. 결론적으로, 대두와 약콩의 추출물은 AChE 활성억제효과에 있어서 좋은 효과를 나타내며 또한 노화의 원인과 질병의 원인이 되는 free radical을 억제하는 효과를 가지고 있어 노인성 치매를 비롯하여 파킨슨씨병, 뇌허혈 및 뇌졸중과 같은 각종 노인성 질환예방에 도움이 될 것으로 보인다.
본 연구는 대두청국장분말, 약콩청국장분말, 그리고 흑미, 흑임자, 다시마와 같은 블랙푸드를 첨가한 약콩청국장분말의 일반성분과 영양소 및 항산화 물질을 분석 비교하여 향후 알츠하이머성 치매관리나 인지능력 향상을 위한 블랙푸드가 첨가된 청국장분말의 in vivo 실험을 위한 기초자료로 활용하고자 실시하였다. 그 결과 대두와 약콩청국장에 비해서 블랙푸드를 첨가한 약콩청국장에서 수분함량이 높았으며, 유리당 중 sucrose, fructose, glucose, maltose 함량이 높았다. 또한 수용성과 조단백질 함량은 P<0.05 수준에서 약콩청국장과 블랙푸드를 첨가한 약콩청국장에서 높았다. 불포화지방산과 포화지방산의 비율은 대두청국장에 비해서 약콩청국장과 블랙푸드를 첨가한 약콩청국장에서 높았다. 무기질 함량은 대두청국장이 가장 높았으나 약콩청국장에서는 Zn, Cr, Mn이, 블랙푸드를 첨가한 약콩청국장에서는 Fe의 함량이 높았다. Isoflavone 중 diadzein 함량은 약콩청국장에서 가장 높았으나, genistein과 anthocyanin 함량은 블랙푸드를 첨가한 약콩청국장에서 가장 높았다. 따라서 본 연구에서는 일반 및 영양적 특성에서 대두청국장에 비해서 블랙푸드로 만든 청국장분말이 유리당과 뇌조직의 구성과 기능에 필요한 수용성 및 단백질 함량과 불포화지방산과 포화지방산의 비율이 높을 뿐만 아니라 우수한 항산화력으로 보고되고 있는 diadzein, genistein 그리고 anthocyanin 함량이 높은 것으로 나타났다. 그러므로 향후 알츠하이머성 치매의 원인 및 치료기전으로 보고되고 있는 산화적 스트레스조절에 대한 in vivo 실험에 블랙푸드청국장분말을 활용할 수 있을 것으로 판단된다.
Phytoestrogens, especially soy-derived isoflavones, are receiving great scrutiny as a food supplement for preventing hormone dependent disease such as postmenopausal osteoporosis. Their beneficial effects are derived from aglycone form of isoflavones, such as daidzein, genistein or glycitein. In contrast to the common usage of soybean, black bean (Rhynchosia Molubilis : Yak-kong) has been used as a supplement for preventing postmenopausal osteoporosis in oriental medicine. To investigate the effects of the saliva, artificial stomach fluid, and digestive enzymes on the conversion of glycosidic isoflavone to aglycone form, soybean and black bean were extracted with 70% methanol and freeze-dried. The recovery yield of methanol extracts of black bean was 14.1% which was higher than that of soybean, 13.5%. In terms of total isoflavones, we routinely obtained larger amount of isoflavones from black bean than those from soybean. By incubating methanol extracts of soybean and black bean with IN HCI for 180 min, the proportions of aglycones relative to the total isoflavone were significantly increased (32.4% and 52.4%, respectively). In vitro conversion, digestive enzymes ($\beta$-glucosidase and $\alpha$-glucosidase) may hydrolyze glycosidic bond of isoflavone more effectively than saliva or artificial stomach fluid did. It seems to say that the activity of $\beta$-glucosidase was higher than those of $\alpha$-glucosidase. The rate of conversion of glucoside form to aglycone form in black bean and soybean was low in physiological condition (pH) tested, although the enzymatic hydrolysis of glucoside was active. These results demonstrated that the composition of aglycone in food may be the important factors in terms of the bioavailability of isoflavones. (Korean J Nutrition 36(1): 32-39, 2003)
황색콩과 검은콩의 원산지를 판별하기 위하여 일반성분 및 20 MHz pulsed NMR을 이용하여 자기완화시간을 측정하였다. 일반성분으로는 황색콩은 조지방 함량 만이 원산지별 차이를 나타내었고, 검은콩의 경우에는 수분과 단백질 함량이 원산지별 차이를 보였다. 20 MHz pulsed NMR을 이용하여 자기완화시간 및 고형지방함량을 측정한 결과 황색콩은 고형지방함량과 $T_2-CPMG$ 측정시 원산지에 따라 유의적인 차이를 나타내었으며, 검은콩은 $T_1-SR$을 제외한 모든 측정항목에서 원산지별 차이를 나타내었다. 황색콩과 검은콩의 원산지 판별 분석시 일반성분만으로 정준판별분석을 시행한 결과 $70{\sim}91.7%$의 정확도를 나타내었으나, NMR 자기완화시간 및 고형지방함량을 이용한 경우 100%의 정확성으로 원산지를 판별해낼 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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