• 생명과학회지
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• 제8권2호
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• pp.181-188
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• 1998

두 종류의 ADP-riboyltransferase(Yac-1과Yac-2)가 최근 mouse의 임파구로부터 cloning되어 그 특성이 규명되어졌다. Yac-1효소는 ADP-ribosyltransferase활성을 보여주나, 대조적으로, Yac-2는 상당한 양의 NAD glycohydrolase 활성도 소유하고` 있으며 이는 NDA를 우선적으로 가수분해 할 수 있다는 사실을 반영한다. Yac-2는 보존된 두 glutamate에 인접한 위치인 219번에 또 다른 glutamate를 소유하고 있다. 효소 활성에 대한 Glu-219의 효과를 알아보기 위해 두 단계의 재조합 중합효소 연쇄 반응 방법에 의해 Glu-219가 glutamate (E219Q)혹은 alanine(E219A)으로 치환되었다. Gln혹은 Ala으로의 치환결과, ADP-ribosyltransferase활성은 56% (E219Q)혹은 66% *E219A)로 감소하였다. Yac-2단백질의 NAD glycohydrolase 활성은 돌연변이에 의해 영향을 받지 않았다. 이러한 결과는 Yac-2효소의 Glu-219가 ADP-ribosyltransferase 활성에 중요한 역할을 하나, NDA glycohydrolase활성에는 관여하지 않음을 시사한다.

• 생명과학회지
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• 제20권5호
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• pp.789-793
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• 2010

복잡한 진핵생물에서의 물리적 지도 작성이나 기능해석에 효모인공염색체(YAC)를 이용하기 위해서는 원하는 target region의 인공염색체화 및 single-copy인 YAC의 복제수를 늘이는 것이 요구된다. 본 연구에서는 YAC manipulation system에 복제수 증폭시스템(copy number amplification system)을 도입한 Simultaneous YAC Manipulation-Amplification (SYMA) system을 구축하였다. 식물염색체를 가진 YAC clone의 splitting과 증폭을 위해 conditional centromere와 thymidine kinase (TK) 유전자를 가진 pBGTK plasmid를 구축하였고, splitting fragment의 PCR을 위한 주형으로 사용하였다. 590 kb의 YAC clone은 splitting과 동시에 copy number amplification element를 가진 100 kb YAC와 490 kb YAC로 분리되었고, 100 kb YAC는 유도기질로 3 mg/ml sulfanilamide와 $50\;{\mu}g/ml$ methotrexate (S3/M50)의 첨가에 의해 14.4배로 그 복제수가 증가하였음을 확인할 수 있었다.

• 치과방사선
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• 제27권1호
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• pp.43-53
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• 1997

The purpose of this study was to aid in the prediction of tumor cell tolerance to radiotherapy and/or chemotherapy. For this study, cell surviving curves were obtained for mouse lymphoma YAC-1 cell line using semi automated MTT assay. 2, 4,6, 8, 10Gy were irradiated at a dose rate of 210cGy/rnin using /sup 60/Co Irradiator ALDORADO 8. After irradiation, YAC-1 cell lines(3×10⁴cells/ml) were exposed to bleomycin or cisplatin for 1 hour. The viable cells were determined for each radiation dose and/or each concentration of drug at the 4th day. And they were compared to control values. The obtained results were as follows : 1. The surviving curve with gentle slope was obtained after irradiation of 2, 4, 6, 8, 10 Gy on YAC-1 cell line. 2. The cytotoxicity of bleomycin or cisplatin was increased significantly at all concentration of 0.2㎍/ml, 2㎍/ml and 20㎍/ml on YAC-1 cell line (P<0.01). And the cytotoxicity of cisplatin was greater than that of bleomycin at all concentration on YAC-1 cell line (P<0.01). 3. There were no significant differences of surviving fractions among 4Gy, 6Gy and 8Gy after irradiation of each radiation dose with 2㎍/ml of bleomycin compared with irradiation only on YAC-1 cell line. 4. There was significant difference of surviving fraction between 2Gy and 10Gy after irradiation of each radiation dose with 2㎍/ml of cisplatin compared with irradiation only on YAC-1 cell line(P<0.05). 5. There were significant differences of surviving fractions between the groups of irradiation only and the groups of irradiation with 2㎍/ml of bleomycin or cisplatin at all doses of 2, 4, 6, 8 and 10Gy on YAC-1 cell line(P<0.05).

• 생명과학회지
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• 제8권5호
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• pp.486-491
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• 1998

mouse의 임파구로부터 두 종류의 ADP-ribosyltransferase (Yac-1과 Yac-2)가 클로닝되어 특성을 규명한 바 있다. Yac-2는 ADP-ribosyltransferase 활성 뿐 아니라 높은 NAD glycohydrolase 활성도 가지고 있다. Yac-2는 두 보존된 glutamic acids 사이인 221번 위치에 arginine를 소유하고 있다. 두 효소 활성에 대한 Arg-221의 중요성을 조사하기 위해 Arg-221이 Glutamic acid (R221E)와 Alanine (R221A)으로 돌연변이 되었다. 돌연변이체인 R221E와 R221A는 두 효소에 대해 야생형과 유사한 활성을 나타내었으며 이러한 결과는 Yac-2의 Arg-221이 ADP-ribosyltransferase와 NAD glycohydrolase의 활성에 필수적인 역할을 하지 않음을 시사해준다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제50권3호
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• pp.436-440
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• 2022

본 연구에서는 염색체가공기술을 이용하여 xylan으로부터 다양한 대사산물을 생산할 수 있는 유전자를 도입한 효모인 공염색체를 구축하였다. 효율적인 염색체가공기술인 PCS법을 이용하기 위해 염색체 splitting에 필요한 splitting fragment (DNA module)를 각각 제작하였고, xylan 대사에 관여하는 유전자군을 가진 YKY164 균주에 형질전환하였다. 두번의 염색체 splitting에 의해 1,124 kb의 효모 7번염색체는 887 kb-YAC, 45 kb-mini YAC와 198 kb-YAC로 가공되었으며, 총 18개의 염색체를 가진 YKY183 균주를 구축하였다. 염색체가공을 위한 splitting efficiency는 50-78%였으며, 45 kb-mini YAC 상에 있는 외래유전자의 발현 및 효소활성은 염색체가공 전과 비교하여 유의미한 변화 및 저하는 관찰되지 않았다. 또한 생산된 재조합효소에 의한 xylan의 분해산물을 확인하였으며, 160 generation 동안 미니 효모인 공염색체는 염색체의 결실없이 안정적인 mitotic stability를 유지하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제28권5호
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• pp.821-825
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• 2018

A copy number amplification system for yeast artificial chromosomes (YACs) was combined with simultaneous overexpression of genes integrated into a YAC. The chromosome VII (1,105 kb) was successfully split to 887 kb, 44 kb containing the element for copy number amplification, and a 184-kb split-YAC. The 44-kb split-mini YAC was amplified a maximum of 9-fold, and the activity of the reporter enzymes integrated into the split-mini YAC increased about 5-7-fold. These results demonstrate that the mini-YAC containing a targeted chromosome region can be readily amplified, and the specific genes in the mini-YAC could be overexpressed by increasing the copy number.

• Journal of Life Science
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• 제10권1호
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• pp.20-23
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• 2000

Mono-ADP-ribosylation, catalyzed by ADP-ribosyltransferases, is a post-translational modification of proteins in which the ADP-ribose moiety of NAD is transferred to an acceptor protein. Previously, we have identified and cloned a glycosylphosphatidylinositol-linked ADP-ribosyltransferase (Yac-1) from mouse lymphoma cells. Yac-1 enzyme contains three regions (region I,II,III) similar to those found in several bacterial toxins and vertebrate ADP-ribosyltransferases. Site-directed mutagenesis was performed to verify the role of Glu 233 in region III. Mutants E233Q, E233D and E233A were inactive for ADP-ribosyltransferase activity. Thus Glu 233 in Yac-1 is essential for enzyme activity, suggesting that Glu 233 in Glu-rich motif near the carboxy terminus plays a catalytic role in ADP-ribosyltransferase activity.

• 생명과학회지
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• 제8권1호
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• pp.102-108
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• 1998

Gltcosylphosphatidylinositol (GPI)에 의해 고정된 단백질의 초기 형태는 골지체에서의 직접적인 processing을 수행하기 위한 아미노와 카르 복시 말단의 hydrophobic signal sequence를 소유하고 있다. 앞서, mouse 임파구로부터 NAD;arginine ADP-ribosyltransferase (Yac-1)가 클로닝되었으며 Yac-1 transferase의 아미노산 배열을 추정해 본 결과, hydrophobic 아미노와 카르복시 말단을 포함하고 있었으며 이는 GPI-anchroed 단백질들의 알려진 signal sequence와 일치하였다. 미 transferase는 야생형의 cDNA로 transfection된 NMU (rat mammary adenocarcinoma) cell의 표면에 존재하였으며 phosphoatidylinosotol-specific phospholipase C에 의해 방출되어졌다. 카르복시 말단의 hydrophobic sequence가 없는 돌연변이체는 수용성이며 분비성인 transferase를 생산하였다. 이러한 사실은 카르복시 말단의 sequence가 없는 돌연변이체는 수용성이며 분비성인 transferase를 생산하였다. 이러한 사실은 카르복시 말단의 sequence가 GPI의 부착에 중요함을 나타내준다.

• BMB Reports
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• 제47권10호
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• pp.581-586
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• 2014

Epidermal growth factor (EGF) is known to play key roles in skin regeneration and wound-healing. Here, we demonstrate that Pep2-YAC, a tripeptide covering residues 29-31 in the B loop of EGF, promotes the proliferation of HaCaT keratinocytes with activity comparable to EGF. The treatment of HaCaT cells with Pep2-YAC induced phosphorylation, internalization, and degradation of EGFR and organization of signaling complexes, which consist of Grb2, Gab1, SHP2, and PI3K. In addition, it stimulated the phosphorylation of ERK1/2 at Thr 202/Tyr 204 and of Akt1 at Ser 473 and the nuclear translocation of EGFR, STAT3, c-Jun, and c-Fos. These results suggest that Pep2-YAC may be useful as a therapeutic agent for skin regeneration and wound-healing as an EGFR agonist.

• 미생물학회지
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• 제35권1호
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• pp.28-34
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• 1999

본 연구에서는 Yeast Artificial Chromosome을 효율적으로 조작하고 유유전자의 기능을 보다 더 용이하게 분석하기 위해 EMCV 바이러스의 IRES 염기서열과 $\beta$-galactosidase를 포함하는 새로운 bicistronic fragmentation vector를 제조하였다. 이 벡터의 폴리클로닝 site에 네 개의희귀한 제한효소 부위를 도입하여 DNA를 용이하게 클로닝할 수 있게 만들었다. 그러므로 원하는 어떤 YAC도 효모세포에서 쉽게 상동 재조함에 의해 절편할 수 있는 장점이 있다. 이 bicistronic fragmentation vector 시스템을 이용하면하나의 메시지로부터 연구하고자 하는 유전자와 $\beta$-galactosidase를 동시에 한 세포에서 발현할 수 있기 때문에 유전자의 발현양상을 쉽게 분석할 수 있는 새로운 도구로 이용할 수 있다.