Choudhary, Shanti;Li, Wenli;Bickhart, Derek;Verma, Ramneek;Sethi, R.S.;Mukhopadhyay, C.S.;Choudhary, Ratan K.
Journal of Animal Science and Technology
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제60권7호
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pp.18.1-18.12
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2018
Background: Xanthosine treatment has been previously reported to increase mammary stem cell population and milk production in cattle and goats. However, the underlying molecular mechanisms associated with the increase in stem cell population and milk production remain unclear. Methods: Primiparous Beetal goats were assigned to the study. Five days post-partum, one mammary gland of each goat was infused with xanthosine (TRT) twice daily ($2{\times}$) for 3 days consecutively, and the other gland served as a control (CON). Milk samples from the TRT and CON glands were collected on the 10th day after the last xanthosine infusion and the total RNA was isolated from milk fat globules (MEGs). Total RNA in MFGs was mainly derived from the milk epithelial cells (MECs) as evidenced by expression of milk synthesis genes. Significant differentially expressed genes (DEGs) were subjected to Gene Ontology (GO) terms using PANTHER and gene networks were generated using STRING db. Results: Preliminary analysis indicated that each individual goat responded to xanthosine treatment differently, with this trend being correlated with specific DEGs within the same animal's mammary gland. Several pathways are impacted by these DEGs, including cell communication, cell proliferation and anti-microbials. Conclusions: This study provides valuable insights into transcriptomic changes in milk producing epithelial cells in response to xanthosine treatment. Further characterization of DEGs identified in this study is likely to delineate the molecular mechanisms of increased milk production and stem or progenitor cell population by the xanthosine treatment.
Ganoderma lucidum (Fr.) Karsten을 실험재료로 하여 자실체형성 전후의 RNA를 추출 정량하였다. 버섯의 자실체 형성 전후에 걸쳐 총 RNA함량에 차이가 있었으며 자실체 형성 전에 총 RNA함량이 두드러지게 많았다. 버섯의 추출물인 RNA를 알카리가수분해한 것을 P.E.I. cellulose TLC로 전개한 결과 GMP와 XMP가 확인되었으며 미확인물질로서 한개의 spot가 나타났다. 이것은 위치로 보아 CMP가 아닌가 생각된다. 영지의 RNA추출물을 HPLC로 분석한 결과는 XMP와 GMP가 확인되었으며 그 함량은 각각, 자실체 형성 전의 GMP는 7.l9mg%, XMP는 8.43mg%, 형성후의 GMP는 4.02mg%, XMP는 3.67mg%의 함량분포를 나타내었다.
A hypothetical 21.0 kDa protein (ORF O197) from Escherichia coli K-12 was cloned, purified, and characterized. The protein sequence of ORF O197(termed EcO197) shares a 33.5% identity with that of a novel NTPase from Methanococcus jannaschii. The EcO197 protein was purified using Ni-NTA affinity chromatography, protease digestion, and gel filtration column. It hydrolyzed nucleoside triphosphates with an O6 atom-containing purine base to nucleoside monophosphate and pyrophosphate. The EcO197 protein had a strong preference for deoxyinosine triphosphate (dITP) and xanthosine triphosphate (XTP), while it had little activity in the standard nucleoside triphosphates (dATP, dCTP, dGTP, and dTTP). These aberrant nucleotides can be produced by oxidative deamination from purine nucleotides in cells; they are potentially mutagenic. The mutation protection mechanisms are caused by the incorporation into DNA of unwelcome nucleotides that are formed spontaneously. The EcO197 protein may function to eliminate specifically damaged purine nucleotide that contains the 6-keto group. This protein appears to be the first eubacterial dITP-and XTP-hydrolyzing enzyme that has been identified.
We have synthesized various 6-substituted 2-oxo-purine nucleosides from key intemediate, 6-[(4-methylphenylthio)-2-oxo-9(2, 3, 5tri-o-acetyl-$\beta$-D-ribofuanoslyl)]-2, 3- dihydropurine in relatively high yields by one step nucleophilic substitution. Various isoguanosine, xanthosine analogs and other 2-oxo-purine nucleosides containing nitrogen, sulfur and oxygen at C-6 of purine base were easily obtained by this method. The structures of the products were established on the basis of their spectral data studies. And cytotoxicity of resulting synthetic 6-substituted-2-oxo-purine nucleosides against some tumor cell-lines was examined. $Ed_{50}$ values of these synthetic compounds were above $100\;{\mu}g/ml$ except isoguanosine, $N^6$-methyl isoguanosine and thioxanthosine analogs.
Oxidizing metal complex mediates the electrochemical oxidation of guanine nucleotides. This catalysis results in an enhancement in cyclic voltammograms that yield the rate constant for the oxidation of guanine by the metal complex via digital simulation. The rate constant of oxidation of guanine by Ru(bpy)3(3+) is 6.4 x 10(5)M(-1)s(-l). The rate constant and the enhanced current depend on the number of phosphate groups on the sugar of nucleotidc. Also the modified guanine bases show different oxidation rate constants following the trend guanine-5'- monophosphatc (GMP) > 8-bromo-guanine-5'-monophosphate (8-Br-GMP) > xanthosine -5'-monophosphate (XMP) > inosinc-5'-monophosphate (IMP). The guanine bases derivatized differently are all distinguishable from one another, providing a basis for studying electrochemistry of DNA and RNA and developing electrochemical biosensors.
반합성 배지인 yeast extract sucrose (YES) 배지에서 인삼 saponm 및 그 관련 물질이 Aspergillus parasilicus의 AF 생성에 미치는 영향에 대해 검토하였다. 배양 시간에 따른 AF생성에 대해 검토한 결과 AF생성은 배양 9일째에 최고치을 나타내였으며 전 배양 기간을 통해 AF B1이 AFG1보다 많이 생성되었다. 배지내에 여러 농도의 인상 saponm을 첨가했을 때 모든 농도의 첨가군은 대조군보다 AF생성이 감소하는 경향을 나타내었으며 saponin 0.05% 첨가시 균체량과 AF 생성량이 매우 감소하였고 saponin 5.0% 첨가시 균체량은 대조군에 비해 증가하였으나 AF은 전혀 생성되지 않았다. 배지내에 saponindiol 맺 triol을 놓도별로 첨가한 경우 diol 0.05, 1.0 및 triol 0.1, 0.5, 1.0 %첨가군에서 AF생성이 감소되었다. 배치내에 saponin fraction를 첨가한 경우 fraction 1, 2, 4. 5. 6은 AF 생성을 상당히 저해하였으나 fraction 3과 7은 AF 생성을 자극하였다 0.05%의 adenosine, guanosine, caffeine 및 xanthosine을 배지에 첨가한 경우 AF생성이 저해되었으나 0.05%의 adenosine 및 cv-tosine을 첨가한 갱우에는 AF생성을 증가시켰다. 5.0%의 saponine을 배지에 첨가한 경우 AF생성은 전혀 일어 나지 않은 반면 total lipid의 합성과 균쳐1량은 대조군에 비해 매우 증가하였다.
Lactobacillus plantarum CK10을 활용하여 초콜릿 발효를 수행하고 발효산물의 항산화 활성 및 성분 변화를 측정하였다. 초콜릿 발효 산물의 pH는 발효 시간이 지남에 따라 감소하고 적정산도는 증가했으며, 그 증감의 폭은 발효 4시간과 24시간에서 가장 급격히 나타났다. 폴리페놀 함량은 발효 산물의 생성이 활발히 일어나고 있을 것으로 예상되는 발효 8시간에서 약간 증가하였으나 대체로 발효 전후 간 유사한 함량이 확인되었으며, 플라보노이드 함량 또한 발효 전후가 유사하게 유지되었다. 항산화 활성의 지표로 DPPH 라디칼, ABTS 라디칼, Alkyl 라디칼에 대한 소거능을 측정하였을 때, 발효가 진행되어도 초콜릿의 우수한 라디칼 소거능이 유지됨을 확인하였다. GC-MS에 의한 성분 분석을 수행하였을 때, 발효 시간이 지남에 따라 lactic acid의 성분비가 증가하는 것을 확인하였다. 더불어 HMF, xanthosine, caffeine, theobromine 등의 물질이 주요 성분으로 검출되었다. High-performance liquid-chromatography을 이용하여 정량 분석을 수행했을 때, 발효에 따른 theobromine과 caffeine의 함량 변화는 크게 관찰되지 않았다.
Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6872를 변이하여 얻은 adenine-guanine 및 $\beta$-alanine 영양요구성(營養要求性)이고 5'-XMP를 다량 생산하는 변이주 D-1550-40을 사용하여 발효배지성분(醱酵培地成分)의 최고농도(最高濃度)와 각 성분간의 상호작용효과(相互作用效果)를 검토하였다. 5'-XMP 축적(蓄積)에 필요한 adenine 및 guanine의 최적(最適) 농도(濃度)는 각각 75mg/l이었으나 생육(生育)에 대한 최적농도(最適濃度)는 이 보다 높은 100mg/ml이었고 그 이상의-농도에서는 5'-XMP 축적에 심한 저해를 초래하였다. 이러한 현상은 biotin을 $100{\mu}g/l$ 이상 첨가하거나 casamino acid를 0.3% 이상 첨가함으로서 배제할 수 있었다. 5'-lMP 발효의 경우와 마찬가지로 무기인산염(無機燐酸鹽)과 마그네슘은 5'-XMP 축적에도 $1.0{\sim}1.5%$1.5%가 적당(適當)하였다. $MnSO_4$의 농도가 $0{\sim}5mg/l$의 범위안에서 증가함에 따라 균증식과 5'-XMP의 축적은 촉진되었으나 그 이상의 농도에서는 변화가 없었고 정상상태를 나타내었다. Adenine과 guanine 각 100 mg/l, $MnSO_4\{cdot}7H_2O5mg/l 및 biotin $100{\mu}g/lg$가 함유된 발효배지에서 배양한 결과 4일후 60.5mg/ml의 5'-XMP가 측적되었으며, 5'-XMP의 생성활성(生成活性)은 균체량(菌體量)에 비례하여 배양 2일 내지 3일에서 가장 높았다.
한국미생물학회 2006년도 International Meeting of the Microbiological Society of Korea
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pp.105-107
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2006
Two kinds of nucleoside hydrolases (NHs) encoded by rih1 and rih2 were cloned from Corynebacterium ammoniagenes using deoD- and gsk-defective Escherichia coli. Sequence analysis revealed that NH 1 was a protein of 337 aa with a deduced molecular mass of 35,892 Da, whereas NH 2 consisted of 308 aa with a calculated molecular mass of 32,310 Da. Experiments with crude extracts of IPTG-induced E. coli CGSC 6885(pTNU23) and 6885(pTNI12) indicated that the Rihl enzyme could catalyse the hydrolysis of uridine and cytidine and showed pyrimidine-specific ribonucleoside hydrolase activity. Rih2 was able to hydrolyse both purine and pyrimidine ribonucleosides with the following order of activity-inosine>adenosine>uridine>guanosine>xanthosine>cytidine-and was classified in the non-specific NHs family. rih1 and rih2 deletion mutants displayed a decrease in cell growth on minimal medium supplemented with pyrimidine and purine/pyrimidine nucleosides, respectively, compared with the wild-type strain. Growth of each mutant was substantially complemented by introducing rih1 and rih2, respectively. Furthermore, disruption of both rih1 and rih2 led to the inability of the mutant to utilize purine and pyrimidine nucleosides as sole carbon source on minimal medium. These results indicated that rih1 and rih2 play major roles in the salvage pathways of nucleosides in this micro-organism.
본 연구에서는 탄소원 및 질소원의 이용 패턴과 mycophenolic acid의 생성 패턴을 확인하기 위하여 먼저 5 L 발효조에서 mycophenolic acid 발효의 경시적 변화를 조사하였다. 그 다음에는 여러 가지 탄소원들이 세포 생장과 mycophenolic acid 생산에 미치는 효과를 조사하였다. 과당이 mycophenolic acid 발효에 가장 좋은 탄소원이었지만, 값이 고가인 단점이 있어서, 과당을 지니고 있는 설탕이 주성분인 당밀을 탄소원으로 사용한 결과 mycophenolic acid의 산업적 생산에 가장 좋은 것으로 확인되었다. 당밀을 첨가한 실험구는 포도당을 탄소원으로 사용한 대조구에 비하여 발효 생산성이 2배 이상 증가하였다. 양호한 세포 생장과 높은 mycophenolic acid 생산을 얻기 위하여 다양한 무기질소원과 유기질소원에 대한 실험을 실시하였다. 무기질소원들 가운데 요소는 암모늄 형태의 질소원을 천천히 공급함으로써 생장과 mycophenolic acid 생산을 저해하는 배양액의 급격한 pH 하락을 일으키지 않았다. 요소를 첨가한 실험구는 질산암모늄을 첨가한 대조구보다 발효 생산성이 3.6배 증가하였다. 카제인, 펩톤, casamino acid 같은 우유 단백질 유래 유기질소원들은 대조구에 비하여 mycophenolic acid 발효 생산성을 최고 3.4배까지 증진시켰다. 카제인의 가수분해물인 펩톤과 casamino acid는 mycophenolic acid 발효 생산성뿐만 아니라 세포 생장도 촉진하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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