Mutational experiments were performed to improved to improve the protease productivity of Aspergillus flavus KU 153, which is selected among the wild strains. A UV-induced mutant strain having high protease productivity was obtained by the use of the clear zone method as a simple criterion for a primary screening test. Neutral and alkaline protease activities of hte mutant strain were higher than 1.8 times, comopared with those of the parental strain, respectively, while in the case of acid protease, it was 2.7 times. The mutant strain selected was more powerful in the production of cellulase and amylase, as well s protease in wheat bran, compared with those of the parental strain. protease production of the parental strain has reached maximum level at 3 days culture, while alkaline nad neutral protease production of the mutantstrain has reached at 2 days culture. On the other hand, the mutant strain formed the spore slowly, compared with the parental strain. Column chromatography of the neutral protease on DEAE-Sephadex A-50 showed that the mutant strain was not induced the formation of another neutral protease isozyme, but induced the variation in the function of regulatory gene.
In order to search potent antifungal substances from domestic plants, 40 plants cultivated in Korea were collected. After extracting with methanol (MeOH) and concentrating to dryness, the MeOH extracts were screened for in vivo antifungal activity against six plant diseases at a concentration of $2000{\mu}g/mL$. Fourteen extracts showed disease-controlling activity more than 90% against at least one of the 6 plant diseases tested; eight, seven, and three extracts controlled more than 90% the development of rice blast, tomato late blight, and wheat leaf rust, respectively. However, none of the extracts exhibited in vivo antifungal activity more than 90% against rice sheath blight, tomato gray mold, and barley powdery mildew. From the MeOH extracts of Angelica gigas and A. dahurica showing potent controlling activity against rice blast, 1 and 2 antifungal substances, respectively, were isolated by solvent partitioning and column chromatography. The three compounds were identified to be coumarins, namely, decursin, imperatorin, and isoimperatorin, by mass spectrometry and NMR spectroscopy. They were examined for in vitro and in vivo antifungal activities together with umbelliferone (7-bydroxycournarin) and scopoletin (6-methoxy-7-hydroxycoumarin) containing a free hydroxyl group at position 7 to investigate the structure-activity relationship. In vitro, most of 50% growth inhibitory concentrations ($IC_{50}$) were over $200{\mu}g/mL$, indicating that they have relatively weak antifungal activity. The antifungal activity of decursin and scopoletin, containing cyclic alkoxy groups instead of free hydroxyl group at position 7, was stronger than umbelliferone and scopoletin. Especially, decursin and imperatorin showed potent antifungal activities against Pythium ultimum and Magnaporthe grisea, respectively, with $IC_{50}$ values less than $25{\mu}g/mL$. In vivo, decursin and imperatorin showed potent antifungal activity against rice blast, whereas other coumarins hardly controlled the development of 6 plant diseases tested. These results suggest that the antifungal activity of 7-hydroxycoumarin derivative is substantially increased when the hydroxyl group at position 7 is protected by a stable cyclic alkoxy grouping.
The most economically important species used in a wide range of fermentation industries throughout Asia belong to Aspergillus section Flavi, which are morphologically and phylogenetically indistinguishable, with a few being toxigenic and therefore a major concern. They are frequently isolated from Korean fermentation starters, such as nuruk and meju. The growing popularity of traditional Korean alcoholic beverages has led to a demand for their quality enhancement, therefore requiring selection of efficient non-toxigenic strains to assist effective fermentation. This study was performed to classify the most efficient strains of Aspergillus section Flavi isolated from various types of traditional wheat nuruk, based on a polyphasic approach involving molecular and biochemical evaluation. A total of 69 strains were isolated based on colony morphology and identified as Aspergillus oryzae/flavus based on internal transcribed spacer and calmodulin gene sequencing. Interestingly, none were toxigenic based on PCR amplification of intergenic regions of the aflatoxin cluster genes norB-cypA and the absence of aflatoxin in the culture supernatants by thin-layer chromatography analysis. Saccharification capability of the isolates, assessed through ${\alpha}-amylase$ and glucoamylase activities, revealed that two isolates, TNA24 and TNA15, showed the highest levels of activity. Although the degrees of variation in ${\alpha}-amylase$ and glucoamylase activities among the isolates were higher, there were only slight differences in acid protease activity among the isolates with two, TNA28 and TNA36, showing the highest activities. Furthermore, statistical analyses showed that ${\alpha}-amylase$ activity was positively correlated with glucoamylase activity (p < 0.001), and therefore screening for either was sufficient to predict the saccharifying capacity of the Aspergillus strain.
This study was conducted to develop labor and chemical cultural practice improvement for weed control in ginseng field. Five crop species were screened in vitro and three crop extracts were sprayed in the test allelopathic effect for weed species. Methyl alcohol extracts of rice, oat, rye and wheat straw showed inhibitory effect on the germination of six weed species, Amaranthus retroflexus, Chenopodium album, Arthraxon hispidus, Digitaria adscendens, Echinochloa crus-galli, and Setaria viridis. Especially, extract of oat straw was most effective to inhibit the germination of six weed species tested. Also, spraying the extract solution of rice, rye and wheat straw was effective to inhibit the growth of weeds in ginseng field. Ginseng root length, diameter, fresh and dry weight in extract spraying plot were higher than those of non-treatment plot.
A synthesis of new $\beta$-ketoacetoanilide chloride derivatives and anti fungal activity of these compounds library against 6 typical plant pathogens were described. Reaction of ketene dimer with chlorine followed by treatment of aniline derivatives gave 89 kinds of the corresponding $\beta$-ketoacetoanilide chlorides through combinatorial synthetic technology using Carousel Reaction Stations. Evaluation of antifungal activity (in vivo) of this chemical library against rice blast, rice sheath blight, tomato aray mold, tomato late blight, wheat leaf rust and barley powdery mildew was carried out. In general, $\beta$-ketoacetoanilide chlorides which present a substituent at 4 in phenyl group(para) of the compounds showed selective control activity against tomato late blight caused by Phytophthora infestans.
The studies on the screening and properties of Raw Starch Saccharifying Microorganism were as follows;Apotent mold strain was selected and screened to digest raw starch, which was classified as a strain of Aspergillus sp. SN-871. The crude enzyme production was maximized when grown on wheat bran media for 5 days at $30^{\circ}C$ and pH 4.0. The stable range of pH was 2 to 5.
A selected fungal strain, for production of the raw-starchdigesting enzyme by solid-state fermentation, was improved by two repeated sequential exposures to ${\gamma}$-irradiation of $Co^{60}$, ultraviolet, and four repeated treatments with Nmethyl-N'-nitrosoguanidine. The mutant strain Aspergillus sp. XN15 was chosen after a rigorous screening process, with its production of the raw-starch-digesting enzyme being twice that of usual wild varieties cultured under preoptimized conditions and in an unsupplemented medium. After 17 successive subculturings, the enzyme production of the mutant was stable. Optimal conditions for the production of the enzyme by solid-state fermentation, using wheat bran as the substrate, were accomplished for the mutant Aspergillus sp. XN15. With the optimal fermentation conditions, and a solid medium supplemented with nitrogen sources of 1% urea and 1% $NH_4NO_3$, 2.5 mM $CoSO_4$, 0.05% (v/w) Tween 80, and 1% glucose, the mutant Aspergillus sp. XN15 produced the raw-starch-digesting enzyme in quantities 19.4 times greater than a typical wild variety. Finally, XN15, through simultaneous saccharification and fermentation of a raw rice corn starch slurry, produced a high level of ethanol with $Y_{p/s}$ of 0.47 g/g.
A newly isolated active producer of raw-starch-digesting amyloytic enzymes, Rhizopus microsporus var. chinensis CICIM-CU F0088, was screened and identified by morphological characteristics and molecular phylogenetic analyses. This fungus was isolated from the soil of Chinese glue pudding mill, and produced high levels of amylolytic activity under solid-state fermentation with supplementation of starch and wheat bran. Results of thin-layer chromatography showed there are two kinds of amyloytic enzymes formed by this strain, including one $\alpha$-amylase and two glucoamylases. It was found in the electron microscope experiments that the two glucoamylases can digest raw corn starch and have an optimal temperature of $70^{\circ}C$. These results signified that amyloytic enzymes secreted by strain Rhizopus microsporus var. chinensis CICIM-CU F0088 were types of thermostable amyloytic enzymes and able to digest raw corn starch.
New ${\beta}$-methoxyacrylate derivatives 1-4 having thio-enol side chain were prepared and subjected to in vivo screening for fungicidal activity against phytopathogenic fungi and many of them showed good fungicidal activities against especially rice blast and wheat leaf rust at 100 ppm.
The two viruses of barley yellow mosaic(BaYMV) and barley mild mosaic virus (BaMMV) were detected by ELISA from barley plants with virus-like symptoms which were collected from 16 locations in southern Korea, during 1995 and 1996. Both viruses occurred in southern Korea. Barley plants at Chongdo and Koseong were infected with BaMMV, while those infected with BaYMV were at Kurye and Taegu. After sowing 50 barley cultivars at habitually infected fields in 10 locations, the susceptibility and resistance to BaYMV and BaMMV were screened with antiserum tests. The cultivars of Albori, Alchanbori, Daejinbori, Jokangbori, Milyangbori, Boeunkwamek, Naehanssalbori, Olssalbori, Weossalbori, Dusan 29 and Deogndohyangchonkwa showed positive reaction to BaYMV antiserum, while Saeolbori, Chalbori, Jinjukwa and Baegjinkwa showed positive reaction to BaMMV. Nonsankwa 1-6 and wheat cultivars of Chongkeymil, Dahongmil, Grumil, Urimil, Jochonhomil, Sinkeyhomil showed negative reactions to both viruses. The rest cultivars were infected both with BaYMV and BaMMV. Sap inoculations to barleyplants with the two viruses of BaYMV isolated in Haenam and BaMMV isolated at National Honam Agricultural Station, expressed lower infection rate than those grown in the virus-infected fields.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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