In order to study the biological function of gapdh gene in yak, and prove whether the gapdh gene was a useful intra-reference gene that can be given an important role in molecular biology research of yak, the cDNA sequence encoding glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from yak was cloned by the RT-PCR method using gene specific PCR primers. The sequence results indicated that the cloned cDNA fragment (1,008 bp) contained a 1,002 bp open reading frame, encoding 333 amino acids (AAs) with a molecular mass of 35.753 kDa. The deduced amino acids sequence showed a high level of sequence identity to Bos Taurus (99.70%), Xenopus laevis (94.29%), Homo sapiens (97.01%), Mus musculus (97.90%) and Sus scrofa (98.20%). The expression of yak's gapdh gene in heart, spleen, kidney and brain tissues was also detected; the results showed that the gapdh gene was expressed in all these tissues. Further analysis of yak GAPDH amino acid sequence implied that it contained a complete glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase active site (ASCTTNCL) which ranged from 148 to 155 amino acid residues. It also contained two conserved domains, a NAD binding domain in its N-terminal and a complete catalytic domain of sugar transport in its C-terminal. The phylogenetic analysis showed that yak and Bos taurus were the closest species. The prediction of secondary structures indicated that GAPDH of yak had a similar secondary structure to other isolated GAPDH. The results of this study suggested that the gapdh gene of yak was similar to other species and could be used as the intra-reference to analyze the expression of other genes in yak.
Folate receptor alpha ($FR{\alpha}$) mediates folate uptake by endocytosis, and while folate is essential to DNA methylation and synthesis and may have an important role in proliferating cells. $FR{\alpha}$ is known to be expressed in rapidly proliferating cells, including many cancer cell lines, but there has been no systematic assessment of expression in cervical cancer cell lines. The aim of the present study was to evaluate the effects of $FR{\alpha}$ on proliferation and apoptosis of cervical cells and correlation mechanism. In this study, we investigated the biological function of $FR{\alpha}$ in Hela cells using RNA interference. Cell proliferation was evaluated by Cell Counting Kit-8 (CCK8) assay, while cell cycling and apoptosis were assessed by flow cytometry, mRNA levels by real time-PCR and protein levels of $FR{\alpha}$, c-Fos and c-Jun by Western blotting. The results revealed that $FR{\alpha}$ was highly expressed in Hela cells and its silencing with a small interfering RNA (siRNA) inhibited cell proliferation and induced cell apoptosis, arresting the cell cycle in G0/G1 stages while decreasing the proportion in S and G2/M stages, and suppressed the expression levels of c-Fos and c-Jun. In conclusion, the results of this study indicated that $FR{\alpha}$ down-regulation might be capable of suppressing cervical cancer cell proliferation and promoting apoptosis. It suggested that $FR{\alpha}$ might be a novel therapeutic target for cervical cancer.
IFN-${\gamma}$ plays an indirect anti-cancer role through the immune system but may have direct negative effects on cancer cells. It regulates the viability of gastric cancer cells, so we examined whether it affects their proliferation and how that might be brought about. We exposed AGS, HGC-27 and GES-1 gastric cancer cell lines to IFN-${\gamma}$ and found significantly reduced colony formation ability. Flow cytometry revealed no effect of IFN-${\gamma}$ on apoptosis of cell lines and no effect on cell aging as assessed by ${\beta}$-gal staining. Microarray assay revealed that IFN-${\gamma}$ changed the mRNA expression of genes related to the cell cycle and cell proliferation and migration, as well as chemokines and chemokine receptors, and immunity-related genes. Finally, flow cytometry revealed that IFN-${\gamma}$ arrested the cells in the G1/S phase. IFN-${\gamma}$ may slow proliferation of some gastric cancer cells by affecting the cell cycle to play a negative role in the development of gastric cancer.
Usually, the output characteristics of a photovoltaic (PV) array are significantly affected by non-uniform irradiance which is caused by ambient obstacles, clouds, orientations, tilts, etc. Some local maximum power points (LMPP) in the current-voltage (I-V) curves of a PV array can result in power losses of the array. However, the output power at the global maximum power point (GMPP) is different in different interconnection schemes in a PV array. Therefore, based on the theoretical analysis and mathematical derivation of different topological structures of a PV array, this paper investigated the output characteristics of dual series PV arrays with different interconnections. The proposed mathematical models were also validated by experimental results. Finally, this paper also concluded that in terms of performance, the total cross tied (TCT) interconnection was not always the optimal structure, especially in a dual series PV array. When one of the PV modules was severely mismatched, the TCT worked worse than the series parallel (SP) structure. This research can provide guidance for switching the interconnection to gain the greatest energy yield in a changeable- structure PV system.
The time-consuming and high-cost preparation of soluble peptide-major histocompatibility complexes (pMHC) currently limits their wide uses in monitoring antigen-specific T cells. The single-chain trimer (SCT) of peptide-${\beta}2m$-MHC class I heavy chain was developed as an alternative strategy, but its gene fusion is hindered in many cases owing to the incompatibility between the multiple restriction enzymes and the restriction endonuclease sites of plasmid vectors. In this study, overlap extension PCR and one-step cloning were adopted to overcome this restriction. The SCT gene of the $OVA_{257-264}$ peptide-$(GS_4)_3-{\beta}2m-(GS_4)_4-H-2K^b$ heavy chain was constructed and inserted into plasmid pET28a by overlap extension PCR and one-step cloning, without the requirement of restriction enzymes. The SCT protein was expressed in Escherichia coli, and then purified and refolded. The resulting $H-2K^b/OVA_{257-264}$ complex showed the correct structural conformation and capability to bind with $OVA_{257-264}$-specific T-cell receptor. The overlap extension PCR and one-step cloning ensure the construction of single-chain MHC class I molecules associated with random epitopes, and will facilitate the preparation of soluble pMHC multimers.
Jiang, Zhou;Wang, Yuhui;Zhang, Xiaoyun;Peng, Tao;Li, Yanqing;Zhang, Yi
Biomolecules & Therapeutics
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v.20
no.6
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pp.544-549
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2012
To examine the neuroprotective effects of ginsenoside R0, we investigated the effects of ginsenoside R0 in PC12 cells under an anoxic or oxidative environment with Edaravone as a control. PC12 neuroendocrine cells were used as a model target. Anoxic damage or oxidative damage in PC12 cells were induced by adding sodium dithionite or hydrogen peroxide respectively in cultured medium. Survival ratios of different groups were detected by an AlamarBlue assay. At the same time, the apoptosis of PC12 cells were determined with flow cytometry. The putative neuroprotective effects of ginsenoside R0 is thought to be exerted through enhancing the activity of antioxidant enzymes Superoxide dismutases (SOD). The activity of SOD and the level of malondialdehyde (MDA) and intracellular reactive oxygen species (ROS), were measured to evaluate the protective and therapeutic effects of ginsenoside R0. Ginsenoside R0 treated cells had a higher SOD activity, lower MDA level and lower ROS, and their survival ratio was higher with a lower apoptosis rate. It is suggested that ginsenoside R0 has a protective effect in the cultured PC12 cells, and the protection efficiency is higher than Edaravone. The protective mechanisms of these two are different. The prevent ability of ginsenoside R0 is higher than its repair ability in neuroprotection in vitro.
Ye, Nanhui;Wang, Hang;Hong, Jing;Zhang, Tao;Lin, Chaotong;Meng, Chun
Biomolecules & Therapeutics
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v.24
no.1
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pp.40-48
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2016
The pregnane X receptor (PXR), a liver and intestine specific receptor,, has been reported to be related with the repression of inflammation as well as activation of cytochromosome P450 3A (CYP3A) expression. We examined the effect of PXR on tetrachloromethane (CCl4)-induced mouse liver inflammation in this work. Ginkgolide A, one main component of Ginkgo biloba extracts (GBE), activated PXR and enhanced PXR expression level, displayed both significant therapeutic effect and preventive effect against $CCl_4$-induced mouse hepatitis. siRNA-mediated decrease of PXR expression significantly reduced the efficacy of Ginkgolide A in treating $CCl_4$-induced inflammation in mice. Flavonoids, another important components of GBE, were shown anti-inflammatory effect in a different way from Ginkgolide A which might be independent on PXR because flavonoids significantly inhibited CYP3A11 activities in mice. The results indicated that anti-inflammatory effect of PXR might be mediated by enhancing transcription level of $I{\kappa}B{\alpha}$ through binding of $I{\kappa}B{\alpha}$. Inhibition of NF-${\kappa}B$ activity by NF-${\kappa}B$-specific suppressor $I{\kappa}B{\alpha}$ is one of the potential mechanisms of Ginkgolide A against CCl4-induced liver inflammation.
Objective : The paper aims to provide predictive coefficients via BIA for the assessment of body composition in children and adolescents to serve clinical as well as research purposes. Methods : Body composition via dual-energy xray absorptiometry (DXA) and bioelectric impedance as well as other anthropometric index were derived from meaurements on 1026 children and adolescents aged from 6 to 18 years from Beijing City. The best subset regression and principle component analysis were adopted to build the predictive coefficients with the logarithm of body composition via DXA as response variable. Results : Condition index ${\varphi}$ of fat-free mass multiple linear regression achieves 113.49 and 91.18 for males and females respectively, demonstrating severe multicollinearity among anthropometric indexes in children and adolescents. BIA predictive coefficients base on the best subset regression and principle component analysis boast a content predictive value for lean mass ($r^2$ = 0.9697 and 0.9664 for boys and girls respectively, p < 0.0001) and for Fat$\%$ ($r^2$ = 0.7705 and 0.6959 for boys and girls respectively, p < 0.0001). Conclusions : BIA method is applicable for the prediction of body composition for children and adolescents.
Three traditional Chinese medicines, Agrimonia pilosa Ledeb, Grifola umbellata (pers.) Pilat, and Gambogia, are combined to form a compound extract, AGC. In this study, the in vitro and in vivo inhibitory effects of AGC on human gastric carcinoma MGC-803 cells were demonstrated, and the molecular mechanisms underlying these effects are investigated. Our results indicate that AGC inhibited MGC-803 cell growth in a dose-dependent manner as measured by a 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay, with an $IC_{50}$ of about $6.045{\pm}0.69{\mu}g/mL$. In vivo, AGC inhibited growth of human gastric carcinoma in xenograft tumors in nude mice, and the inhibitory rate reached 55.2% at 300 mg/kg. The pro-apoptotic activity of AGC was attributed to its ability to decrease the expression of Bcl-2 and Pro-caspase3 and increase the expression of Bax. These results demonstrate that AGC can effectively induce programmed cell death and may be a promising anti-tumor drug in human gastric carcinoma.
The joint distribution of wind speed and wind direction at a bridge site is vital to the estimation of the basic wind speed, and hence to the wind-induced vibration analysis of long-span bridges. Instead of the conventional way relying on the weather stations, this study proposed an alternate approach to obtain the original records of wind speed and the corresponding directions based on field measurement supported by the Structural Health Monitoring System (SHMS). Specifically, SHMS of Sutong Cable-stayed Bridge (SCB) is utilized to study the basic wind speed with directional information. Four anemometers are installed in the SHMS of SCB: upstream and downstream of the main deck center, top of the north and south tower respectively. Using the recorded wind data from SHMS, the joint distribution of wind speed and direction is investigated based on statistical methods, and then the basic wind speeds in 10-year and 100-year recurrence intervals at these four key positions are calculated. Analytical results verify the reliability of the recorded wind data from SHMS, and indicate that the joint probability model for the extreme wind speed at SCB site fits well with the Weibull model. It is shown that the calculated basic wind speed is reduced by considering the influence of wind direction. Compared to the design basic wind speed in the Specification of China, basic wind speed considering the influence of direction or not is much smaller, indicating a high safety coefficient in the design of SCB. The results obtained in this study can provide not only references for further wind-resistance research of SCB, but also improve the understanding of the safety coefficient for wind-resistance design of other engineering structures in the similar area.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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