Vibrio cholerae non-O1 49균주와 V. Vibrio cholerae non-O1, V. mimicus, V. vulnificus와 V. parahaemolyticus의 균체 지방산(fatty acid methyl ester; FAME)을 gas liquid chromatogrphy로 분석하였다. 이들 분석자료를 통계학적으로 처리하여 Vibrio 종과 V. cholerae의 혈청형별 유연성을 비교 검토하였다. 검출된 지방산은 모두 41종이었고 분포량이 많은 것은 16:0, 16:1 cis 9, 18:1 trans 9/16/cis 11과 15:0 iso 2 OH/16:1 cis 9였다. 검출된 지방산 중에서 35종은 V. cholerae를 동정하는데 주요한 인자로 작용되었다 지방산분포를 UPGMA(비가중수리분석)으로 dendrogram을 작성한 결과 V. cholerae non-O!은 V. cholerae O1보다 V. choleare non-O1 중에서 O2, O5, O8, O10, O14, O27, O37, O39, O45와 O69의 총 10종류 혈청을 대상으로 지방산 조성에 의한 유사성을 검토한 결과 유사도가 92% 이상 수준에서 7개의 아종을 형성하여 혈청형과 지방산 조성간에는 유의할 만한 상관관계가 있었다. 따라서 V. cholerae non-O1의 동정 및 역학적인 조사시 지방산 분석은 유용하게 활용될수 있음을 알 수 있다.
새로운 식중독 원인균으로 알려지고 있는 V cholerae non-O1과 V mimicus의 분포와 서식 조건을 밝히고자 금강 하구에서 1993년 3월 26일부터 1994년 2월 22일까지 수질 환경과 V cholerae non-O1 및 V mimicus의 분포를 조사한 결과는 다음과 같다. 1. V cholerae non-O1은 해수 54개 시료에서 $16.7\%$, 뻘 49개 시료에서 $6.1\%$, 전체 $11.7\%$가 검출되었으며 V mimicus는 해수 54개 시료에서 $11.1\%$, 뻘 49개 시료에서 $10.2\%$, 전체 $10.7\%$가 검출되었다. 2. V cholerae non-O1과 V. mimicus는 수온 $24^{\circ}C$이상, 염도 $10\%o$ 이하의 기수에서 주로 검출되었으나, 수온이 $3.5^{\circ}C$인 1월에 뻘에서 검출되었다. 3. V cholerae non-O1과 V. mimicus의 서식에 영향을 주는 주요 인자는 온도, 염도 및 유기물질의 오염이며, V. cholerae non-O1은 V. mimicus보다 염도 변화에 대한 적응력이 더 높았다.
우리나라 연안해역의 해수나 어패류에서 V. cholerae non-O1의 분포를 밝힘과 동시에 1996년 4월부터 동년 11월까지 분리된 환경분리주와 1984년부터 1996년까지 서울 및 부산소재 각 대학병원에서 환자로부터 분리된 총 55균주를 대상으로 생화학적 특성과 혈청형을 분석하였다. V. cholerae non-O1은 한국의 연안에서 206거체중 21검체(10%)에서 분리되었으나 V. cholerae O1 및 O139는 검출되지 않았다. 지역별로는 군산에서 16%로 검출률이 제일 높았다. 환경이나 환자에서 분리된 V. cholerae non-O1 55 균주에 대한 혈청형 분석결과 15종류의 혈청형이 검출되었는데 환경분리주 12종류, 환자분리주에서는 6종류이였다. 그런데 환경분리주에서는 O14가 68.3%(28/41)이였고, 환자분리주에서는 O8이 약 36%(5/14)로 많았고 그다음으로 O2와 O10등의 순이었다. 그리고 O2, O10와 O39는 환경 및 환자분리주에서 동시에 검출되었다.
새로운 식중독 원인균으로 주목을 받고 있고 수권에서 잘 검출된다고 알려져 있는 V cholerae non-O1과 V. mimicus를 대상으로 민물, 기수 및 해수에서 염도와 온도의 변화에 따른 균수의 증감을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 민물에서 V. cholerae non-O1은 $26\pm1^{\circ}C$보다 4와 $15^{\circ}C$에서 생잔기간이 길었으며 V. mimius는 4와 $26\pm1^{\circ}C$보다 $15^{\circ}C$에서 생잔기간이 길었다. 2. 기수에서는 두 균주 모두 15, 4, $26\pm1^{\circ}C$으로 생잔기간이 길었다. 3. 해수에서는 두 균주 공히 온도가 높을수록 생잔기간이 짧았으며, $4^{\circ}C$에서 실험조건 중 생잔기간이 가장 길었다. 4. 민물에서는 V. mimicus보다 V. cholerae non-O1의 안정성이 높았고, 기수에서는 V. cholerae non-O1보다 V. mimicus의 안정성이 높았으며 해수에서는 두 균 사이에 큰 차이가 없었다. 5. 염도와 온도의 변화는 V. cholerae non-O1과 V. mimicus의 생잔에 중요한 인자이다.
한국의 환경에서 분리된 47주와 환자 혈액에서 분리된 18주의 Vibrio cholerae serovar non-O1 및 non-O139를 대상으로 하여 콜레라 독소, 콜레라 독소 유전자, 용혈소, 그리고 혈구응집소 등이 병독인자 분포를 알아보았다. 시험된 65균주 중 용혈소만 생산하는 균은 29균주였고, 용혈소와 혈구 응집소를 생산하는 것은 65균주 중 36 균주였다. 용혈소, 콜레라 독소 및 유전자, 그리고 혈구응집소 모두를 가지고 있는 것은 환경에서 분리된 O37형 한 균주이었다. 한편 첨가한 당농도에 따른 혈구응집소 억제시험에서, 1% 이하의 mannose 와 galactose에서 응짐이 억제된 것은 환경분리균주 47 균주 중에서 26균주로 내혈구응집소나 외혈구응집소가 비슷한 비율로 분포하였고, 반면 환자분리균주는 18균주 중에서 5균주가 외혈구응집소의 비율이 훨씬 높았다. 따라서 V.cholerae non-1 및 non-O139의 용혈소가 주독소로 병독인자 분포는 다양하게 나타났다. 콜레라 독소가 유일한 병독이자라고 인식하기는 어려웠고 여러 가지 인자들이 복합적으로 작용될 것으로 생각되었다. 특히 환경분리주 O37 형에서 콜레라 독소 생성윤이 발견된 것을 향후 역학적인 측면에서 많은 연구가 되어야 할 것으로 사료되었다.
The genus Vibrio contains some of the most important intestinal pathogens of humans, including Vibrio cholerae, the cause of epidemic Asiatic cholera. A group of organisms which have been reffered to as the non-agglutinating vibrio (NAG) do not agglutinate in the Vibrio cholerae 0 group 1 antisera, but are indistinguishable from the 0-1 group both chemically and genetically. Non-O-l Vibrio cholerae can cause isolated as well as focal outbreaks of diarrhea, but the volume of fluid loss does not approach that of classic cholera, and the disease is usually self-limiting. These free-living organisms are found world-widely distributed in the environment including sewage, contaminated water, estuaries, seafood and animals. These strains involved in several cases were isolated from the environment and some patients of diarrhea, and a few epidemiologic reports indicated the wide distribution of the strains throughout the country, giving an attention to the role the organisms may play in an outbreak of diarrhea in Korea. More research on the epidemiology, serologic typing and virulence of the group of organisms, should be, therefore, done to obtain a complete understanding of their role in human disease.
해수로부터 분리한 V. cholerae non-O1 FM-3 이 생산하는 hemolysin의 특성에 관하여 연구한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. V. cholerae non-O1 FM-3이 생산하는 hemolysin은 대수증식기일 때 가장 높은 활성을 나타내었으며, Sephadex G-100 gel column chromatography로 부분정제한 후 hemolysin의 특성을 실험한 결과, pH 7.0, $4^{\circ}C$에서 가장 안정하였으며, $60^{\circ}C$, 30분 가열에 의해 완전히 실활되었다. 2. 적혈구와 hemolysin이 반응할 때, $Na^+,\;K^+$과 같은 1가 양이온을 첨가하면 약간의 활성증가를 보였으며, $Ca^{2+},\;Mg^{2+},\;Mn^{2+}$과 같은 2가 양이온을 첨가하였을 때 급격한 활성증가를 보였고, 반면 $Zn^{2+}$ 첨가시에는 급격히 활성이 저하되었다. 3. 적혈구 현탁액과 hemolysin을 각각 다른 온도대에서 반응시킨 결과, $4^{\circ}C$에서도 온도와 관계없이 적혈구막과 hemolysin의 결합이 가능한 온도 비의존적인 제1단계와, 용혈황성의 최적온도대인 $37^{\circ}C$에서만 용혈작용이 일어나는 온도 의존적인 제2단계로 나누어졌다.
수온 $25^{\circ}C$ 부근의 $7\~8$월에 걸쳐 해수로부터 V. cholerae non-O1을 분리하여 분리된 균주 중 용혈활성이 가장 확실한 균주를 선정하여 V. cholerae non-O1 FM-3으로 명명하고 이 균의 생육인자와 항생제에 대한 감수성을 조사하였다. 1. 분리균주 (V. cholerae non-O1 FM-3)는 Gram 음성간균으로 운동성이 있으며, Voges-Proskauer test 양성으로 galactose와 sucrose를 분해하고 arabinose, lactose, salicin을 분해하지 못하며, CAMP test 양성으로서 표준균주와 동일한 생화학적 특성을 나타내었다. 2. $4\~50^{\circ}C$의 범위에서 생육에 대한 영향을 조사한 결과, 표준균주와 분리균주 모두 $4^{\circ}C$와 $50^{\circ}C$에서는 생육이 불가능하였으나 $15\~45^{\circ}C$의 온도범위에서는 생육하였으며 두 균주의 증식 최적조건은 $37^{\circ}C$로 나타났다. 특히 생육온도 범위내에서 분리균주는 표준균주보다 높은 증식율을 나타내었다. 3. $0\~5.0\%$의 식염농도에서 생육에 대한 영향을 조사한 결과, 표준균주와 분리균주 모두 $0\~1.0\%$식염농도에서 증식율이 가장 높게 나타났으며, 표준균주보다 분리균주의 증식속도가 약간 빠른 경향을 나타내었다. $3\%$식염농도에서도 표준균주에 비해 분리균주가 증식율이 높았다. 한편, $5\%$의 식염농도에서 표준균주는 생육이 불가능하였으나 분리균주는 미약하나마 증식하는 것으로 나타났다. 4. $pH\;5.0\~10.0$의 범위에서 생육에 대한 영향을 조사한 결과, $pH7\~9$의 범위에서 표준균주와 분리균주는 모두 잘 증식하였으며, 특히 pH8.5에서 가장 높은 증식율을 나타내었다. 한편 pH6.0과 pH10.0에서는 증식율이 감소하였고, pH5.0에서는 전혀 증식하지 않았다. 5. 표준균주와 분리균주는 모두 vancomycin, oxacillin, colistin, polymyxin B, sulfadiazine 등의 항생제에 대해서는 내성을 나타내었고, 그 외 다른 항생제에 대해서는 민감한 것으로 나타났다.
Rambhatla, Prashanthi;Kumar, Sanath;Floyd, Jared T.;Varela, Manuel F.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제21권9호
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pp.914-920
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2011
Vibrio cholerae utilizes mannitol through an operon of the phosphoenolpyruvate-dependent phosphotransferase (PTS) type. A gene, mtlD, encoding mannitol-1-phosphate dehydrogenase was identified within the 3.9 kb mannitol operon of V. cholerae. The mtlD gene was cloned from V. cholerae O395, and the recombinant enzyme was functionally expressed in E. coli as a $6{\times}$His-tagged protein and purified to homogeneity. The recombinant protein is a monomer with a molecular mass of 42.35 kDa. The purified recombinant MtlD reduced fructose 6-phosphate (F6P) using NADH as a cofactor with a $K_m$ of $1.54{\pm}0.1$ mM and $V_{max}$ of $320.8{\pm}7.81\;{\mu}mol$/min/mg protein. The pH and temperature optima for F6P reduction were determined to be 7.5 and $37^{\circ}C$, respectively. Using quantitative real-time PCR analysis, mtlD was found to be constitutively expressed in V. cholerae, but the expression was up-regulated when grown in the presence of mannitol. The MtlD expression levels were not significantly different between V. cholerae O1 and non-O1 strains.
Vibrio spp. are aquatic bacteria that are ubiquitous in warm estuarine and marine environments. Especially, V. vulnificus and V. cholerae are currently known to cause potentially fatal infections in humans. This study investigated the distribution and antibiotic resistance of V. vulnificus and V. cholerae isolated from coastal areas of Gyeongsangnam-do in 2022. A total of 252 samples of water, shellfish and coastal sediment were collected from 7 locations along the coast, and 124 samples of fishery products were collected from markets. Among the 252 samples, forty-four V. vulnificus (11.7%) and fourteen V. cholerae non-O1/non-O139 (3.7%), none of which carried the ctx gene, were isolated. Out of the 124 samples, 6 (4.8%) tested positive for V. vulnificus and V. cholerae was not detected. The isolation rates of V. vulnificus and V. cholerae showed a significant correlation with environmental factors such as seawater temperature and salinity. In an antibiotic resistance test, V. vulnificus was susceptible to amikacin, gentamicin, imipenem trimethoprim/sulfamethoxazole, and ciprofloxacin, but resistant to cefoxitin (100.0%), followed by tetracycline (9.1%). Multidrug resistance was also observed. Continuous monitoring of Vibrio pathogens with water temperature and salinity is expected to help reduce the outbreaks, and rational use of antibiotic agents is needed to prevent the accession of antibiotic-resistant microorganisms in aquatic ecosystems.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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