V. vulnificus 오염으로부터 패류의 안전성을 조사하기 위해 굴을 V. vulnificus에 인위감염시키고 4℃와 25℃에서 패각 유무에 따른 V. vulnificus 균수 변화를 조사하였다. V. vulnificus가 있는 인공해수에 침지시킨 굴에서 분리된 V. vulnificus 균수는 인공해수 속의 균수보다 많았다. 굴을 4℃에 보관하는 경우는 실험기간 동안 V. vulnificus 균수의 차이가 관찰되지 않았지만 25℃에 보관하는 경우는 빠른 균수의 증가가 관찰되어 보관온도가 균수 변화에 많은 영향을 주었다. 여러 염분농도, 5, 15 및 35 ‰의 인공해수에서 V. vulnificus 균수는 25℃와 4℃에서 모두 감소하였다. 그러나 4℃에서 균수의 감소율은 25℃에서 보다 빨랐고 4℃에서 염분도 V. vulnificus 균수 감소율에 영향을 주어 35 ‰의 인공해수에서 가장 높은 감소율을 보였다.
V. vulnificus에 대한 매실 추출액의 항균활성을 측정함으로서 다소비 식품인 수산물의 미생물학적 안전성 확보에 기여하고자 하였다. 실험에서 사용한 균주는 수산물, 수족관수, 해수, 갯벌에서 분리된 V. vulnificus 28주를 대상으로 하였다. V. vulnificus 28주 모두에서 vvhA 유전자가 검출되고 good identification 이상의 생화학 동정 결과를 나타내어 V. vulnificus임이 확인되었다. 실험에 사용된 V. vulnificus는 tetracycline과 chloramphenicol 항생제에 감수성을 나타내어 환자 발생 시 이 두 종류의 항생제가 치료에 용이할 것으로 판단되었다. V. cholerae NCCP 13589와 V. parahemolyticus NCCP 11143 표준균주 모두 매실 추출물 2.5%와 5%에서 생육 저지환을 나타내었다. 또한 V. vulnificus 분리균주와 V. vulnificus NCCP 11135 표준균주 모두 매실 추출물 1.25%, 2.5%, 5%에서 생육 저지환을 나타내어 V. cholerae와 V. parahemolyticus에 비해 V. vulnificus에 대한 매실 추출물의 항균활성이 높게 나타났다. V. vulnificus에 대한 매실 추출액 최소살균농도가 1.6%로 나타나 수산물 중 V. vulnificus 생육억제에 매실 추출물이 매우 유용할 것으로 판단되었다. 수산물과 관련된 비브리오균 중 패혈증을 일으키는 V. vulnificus균은 국내에서 매년 지속적으로 환자와 사망자를 발생시키고 있다. 수산물 생식 시 발생할 수 있는 식중독을 예방하기 위한 매실 추출물 활용연구가 필요한 것으로 판단된다.
Vsrio vulnificus is an estuarine gram-negative human pathogen that affects people with chronic hepatitis, alcoholic cirrhosis, diabetes mellitus or other underlying diseases. V. vulnificus infection is mediated primarily by consumption of raw fish or by exposure of pre-existing wounds to seawater, causing permanent tissue damages or fatal septic shock. We have been developing a vaccine against V. vulnificus composed of whole cell Iysate of a V. vulnificus O-antigen serotype 4 strain. Oral administration of the V. vulnificus;oral vaccine;immunogenicity;protective efficacy vaccine elicited a high serum antibody response in rabbits. The induced antibodies were reactive not only to the homologous strain but also to heterologous O-antigen serotype strains, indicating cross-reactivities among serotypes. Western blot analysis revealed that the antibodies are mainly specific for outer membrane proteins (OMPs) and reacted equally well with OMPs purified from 9 O-antigen serotypes. The rabbit antisera showed opsonophagocytic killing activity against heterologous strains as well as the homologous strain. Passively transferred rabbit antisera into mice were protective against a lethal V. vulnificus infection. These data demonstrate that oral administration of the V. vulnificus vaccine induced a systemic antibody response which had a protective efficacy against V. vulnificus infections, suggesting that this vaccine preparation could be used to develop an oral vaccine against V. vulnificus.
Vibrio vulnificus is a gram-negative, halophilic, oxidase-positive, lactose-positive, motile, rod shaped bacterium that has been associated with primary septicemia and wound infection. Elucidating the growth and survival of V. vulnificus in ecological conditions is of great importance to develop sanitary measure against this microorganism. Thus we simulated the ecological conditions and evaluated the effect. About $10^5\;CFU/ml$ of V. vulnificus was inoculated to fresh water, brackish water $(1\%\;NaCl)$, sea water $(3\%\;NaCl)$, and bottom deposit solution. The same concentration of V. vulnificus was also inoculated to distilled water, $1\%\;NaCl$ solution and $3\%\;NaCl$ solution as controls. These were stored at 4, 15 and $25^{\circ}C$, respectively and were used to assess the effects of temperature and salinity on the survival of V. vulnificus. In fresh water V. vulnificus could not survive regardless of storage temperature. In case of brackish water and sea water survival time of V. vulnificus was the longest at $25^{\circ}C$, and the number of V. vulnificus was decreased most rapidly at $4^{\circ}C$. V. vulnificus survived longer in brackish water than in any other conditions. In bottom deposit solution containing brackish water, the survival time of V. vulnificus was longer and the rate of decline was slower than that in brackish water. These results indicate that both biological and physicochemical factors such as temperature and salinity could affect survival of V. vulnificus. V. vulnificus, damaged in normal fresh water, did not grow on TCBS agar of selective plating medium but grew on BHI agar plate; However, V. vulnificus was recovered by addition of salt and nutrient materials.
본 연구는 생명을 위협하는 Vibrio vulnificus의 생존에 온도, 염분 pH 및 자외선과 같은 환경적 요인이 어떠한 영향을 미치는 가를 알아보기 위하여 수행하였다. 6일 동안 15에서 ${25\circ}C$의 온도범위에서 V.vulnificus의 수는 증가하였지만 이 범위외에서 V.vulnifivus의 생존수는 감소하였다. 1에서 ${10\circ}C$사이에서의 실험 결과, V.vulnificus 가 $10{\circ}C$이하에서는 생존수가 적었다. 한편 6일 동안 5에서 25ppt정도의 염분조건에서는 V.vulnificus수는 감소하였다. 최적의 pH 영역은 6.5에서 8.0이었고 이 영역밖에서는 V.vulnificus의 생존율은 낮았다. 15와 $25{\circ}C$에서 자외선은 V.vulificus에 대해 살균효과를 나타내어서 2시간 동안 자외선 처리후 V.vulnificus수가 약 10,00배 감소되었다. 이상과 같은 결과들은 환경적 요인이 V.vulnificus의 생존에 미치는 영향이 크다는 것을 보여주었다.
The cells of Vibrio vulnificus can be induced to the viable but nonculturable (VBNC) state by natural environmental parameters. The V. vulnificus cells in the VBNC state can not be recovered by ordinary laboratory techniques. This nonculturability could often hamper development of effective processing strategies to minimize the number of V. vulnificus in seafoods. Even with V. vulnificus cells in a culturable state, the length of time required to identify the bacteria in contaminated food by phenotyphic characterization may prevent appropriate in-time responses by public health agencies to infections of the bacteria. In the present study, we used polymerase chain reaction (PCR) to develop a rapid and direct detection method for V. vulnificus in small octopus (Octopus variabilis) which is consumed as a raw food in Korea. The region targeted was a 704-base pair (bp) portion of the hemolysin gene, vvhA, of V. vulnificus. The primers designed for PCR amplification were specific for all V. vulnificus sp. tested. Several methods were examined to extract total DNA directly from V. vulnificus seeded into the octopus homogenate and the guanidine isothiocyanate (CITC) method appeared to be most effective. From the octopus homogenate seeded by V. vulnificus at an initial level of $10^2$ CFU/ml of the homogenate and then incubated for 12 h, the targeted sequence was successfully amplified by PCR and the 704-bp DNA fragment was observed by gel electrophoresis. The total completion of this assay requires less than one day.
This study was focused on the isolation of pathogenic Vibrio species, V. vulnificus and V. parahaemolyticus from marine environment from May to July of 1999. Isolation sites were coast near by Pusan and Daechon. The results obtained were as follows: 1. Seventy strains of V. parahaemolyticus and 19 strains of V. vulnificus were isolated from a total of 120 specimens. 2. Nineteen strains of V. vulnificus did not fermented arabinose and salicin but fermented lactose and cellobiose. All of V. parahaemolyticus isolates did not fermented lactose and cellobiose. 47 strains of V. parahaemolyticus fermented arabinose but 53 strains did not fermented salicin. 3. V. vulnificus and V. parahaemolyticus isolates showed three different API index numbers with 5046105 and 4346107 dominant. 4. V. vulnificus did not grow on 0% and 8% NaCl containing medium. V. parahaemolyticus grew on 8% NaCl containing medium. 5. V. vulnificus isolates and V. parahaemolyticus revealed different outer membrane protein profiles on SDS-PAGE.
대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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pp.132.2-132.2
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2003
Vibrio vulnificus, a Gram-negative estuarine bacterium, is the causative agent of food-borne diseases, such as life-threatening septicemia. V. vulnificus penetrating into the intestinal epithelial barrier stimulates an inflammatory response in the adjacent intestinal mucosa. Therefore, interaction between V. vulnificus and intestinal cells is important for understanding of both the immunology of mucosal surfaces and V. vulnificus. In this study we investigated the effects of V. vulnificus infection on cytokine gene expression of human intestinal epithelial cells, Caco-2 and INT-407 cells. (omitted)
Vibrio vulnificus, a halophilic Vibrio has gained worldwide attention as a cause of severe and frequently fatal wound infections and life-threatening septicemia. For this reason V. vulnificus is thought to produce extreme hemoconcentration and rapid death after infection, and because V. vulnificus is thought to be less susceptible to bactericidal activity of normal human serum, the present study was undertaken to assess the susceptibility of V. vulnificus to human serum bactericidal activity with that of V. parahemolyticus and V. cholerae and to assess the effect of Vibrio species, Salmonella typhimurium and E. coli on hematocrit values in experimentally infected mice. Serum bactericidal activity against both V. vulnificus and V. cholerae was higher than against V. parahemoltyicus. Survival of the test strains in heat-inactivated human serum was greater than that in heat-uninactiveted serum. Both V. parahemolyticus and V. cholerae produced slight hemoconcentration within 2 to 6 hr after intraperitoneal injection of $10^7$ viable bacteria into mice. In contrast, V. vulnificus, S. typhimurium and E. coli produced hemodilution rather than hemoconcentration after 4 or 6 hr after infection. With these results the author can conclude that V. vulnificus is more susceptible to serum bactericidal activity than other Vibrio species, and V. vulnificus did not produce hemoconcentration.
Vibrio vulnificus Lipopolysaccharide (LPS) was extracted, performed chemical analysis, tested its biological activities, and compared to those of Escherichia coli LPS and Salmonella typhimurium LPS. The lethal activity of V. vulnificus LPS was 138.6138.6 mg/kg in mouse, but this was lower than thowe of E. coli LPS (56.3 mg/kg) and S. typhimurium LPS (37.5 mg/kg). The result of fatty acid analysis showed that V. vulnificus LPS had more saturated fatty acid than E. coli LPS and S. typhimurium LPS. Above results indicated that V. vulnificus LPS did not have much effect on the lethality. The results of biological responses of enzymes and blood cells by LPSs showed that V. vulnificus LPS had slightly greater activity than E. coli LPS and S. typhimurium LPS. V. vulnificus LPS was recommendavle for stimulant on interferon induction because of adequate stimulation and safety for host and cell lines.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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