Suzuki, T.;Takagi, M.;Yamamoto, M.;Boediono, A.;Saha, S.;Sakakibara, H.;Oe, M.
Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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1997.05a
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pp.9-15
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1997
치밀 난구세포로 둘러싸인 소 난자를 $38^{circ}C$. 5% $CO_2$ 배양기에시 5% superovulated cow serum(SCS)이 첨가된 m-TCM 199 medium 으로 $20{\sim}22$ 시간 배양하였으며, 수정능이 획득된 정자와 체외수정하였다. 7일${\sim}$8일경의 수정란을 1.3M methyl cellosolve(MC), 1.1M diethylene glycol(DEG), 1.8M ethylene glycol(EG), 1.6M propylene glycol(PG) 및 1.1M 1,3-butylene glycol(BG) 용액에서 10분간 평형시킨 후 0.25 ml 스트로내에 장전하였다. 스트로를 $0^{\circ}C$의 alcohol bath freezer에 넣고 $-6^{\circ}C$까지 $-1^{\circ}C$/분 속도로 냉각, 식빙 후 10분간 정체시켰으며, $-0.3^{\circ}C$/분 또는 $-0.5^{\circ}C$/분으로 $-30^{\circ}C$까지 냉각 후 스트로를 액체질소에 침지하여 보관하였다. 수정란이 들어있는 스트로를 $30^{\circ}C$ 온수에서 융해하였으며, 수정란을 TCM 199 medium 으로 옮긴 후 5% SCS가 첨가된 TCM 199 medium 에서 48시간 배양하였다. 수정란이 양호한 형태를 유지하며 나중의 발육단계로 진행된 것을 생존한 것으로 간주하였다. 각 종류의 동해방지제에서 동결된 수정란의 일부는 융해 후 동해방지제를 제거하지 않고 직접 비외과적으로 이식하였다. 동결-융해 후 동해방지제의 종류에 따른 탈출배반포 발달율은 EG 50.0%, MC 53.6%, DEG 56.9%, PG 58.0% 그리고 BG 11.5%였다. $-0.3^{\circ}C$/분 또는 $-0.5^{\circ}C$/분 으로 냉각한 수정란의 생존율은 두 그룹간에 유의적인 차이가 없었으나 (P<0.05), 탈출배반포 발달율은 -0.5분 $^{\circ}C$/분(22.6%, 12/53)보다 $-0.3^{\circ}C$/분(64.6%, 31/48) 냉각시에 유의적으로 높았다(P<0.01). 동해방지제의 종류에 따른 수정란의 수태율은 MC 48%(10/21). DEG 30%(3/10), EG 74%(20/27) 및 PG 40%(4/10) 였다. 이러한 결과로 보아 MC, DEG, EG 그리고 PG는 소의 체외수정란의 동결을 위한 동해방지제로서 이용될 수 있음을 보여주었다.
Suzuki, T.;Takagi, M.;Yamamoto, M.;Boediono, A.;Saha, S.;Sakakibara, H.;Oe, M.
Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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1997.05a
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pp.27-34
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1997
Bovine oocytes surrounded with compact cumulus cells were cultured for 20 to 22 hours($38^{\circ}C$, 5% $CO_2$) in modified TCM-199 medium supplemented with 5% superovulated cow serum(SCS) and inseminated by in vitro capacitated spermatozoa. Day 7 to 8 embryos were equilibrated for 10 minutes in 1.3M methyl cellosolve(MC) <1.1M diethylene glycol(DEG), 1.8M ethylene glycol(EG), 1.6M propylene glycol(PG) and 1.1 M 1,3-butylene glycol(BG) solutions. They were then loaded into 0.25ml straws, placed into an alcohol bath freezer at $0^{\circ}C$, cooled from $0^{\circ}C$ to $-6^{\circ}C$ at $-1^{\circ}C$/minute, seeded, held for 10 minutes, and stored in liquid nitrogen. After thawing in $30^{\circ}C$ water, the embryos wee rehydrated in TCM-199 medium and then cultured for 48 hours in TCM-199 plus 5% SCS. Embryos were considered viable if they progressed to later developmental stages with a good morphology. Some of the embryos frozen in each cryoprotectant were thawed and transferred non-surgically without removing the cryoprotectant. Hatched embryos survived freezing and one-step dilution as follows : EG(50.0%), MC(53.6%), DEG(56.9%), PG(58.0%) and BG(11.5%). The survival rate of embryos cooled at -0.3^{\circ}C$ vs. $-0.5^{\circ}C$/minute was not significantly different(P<0.05), however, blastocysts hatched most often (P<0.01) in vitro when cooled at a rate of $0.3^{\circ}C$/minute(64.6%), 31/48) than at $-0.5^{\circ}C$/minute(22.6%, 12/53). Pregnancy rates resulting from embryos frozen in the different cryoprotectants were as follows : MC(48%, 10/21); DEG(30%, 3/10); EG(74%, 20/27); and PG(40%, 4/10). These results indicate that MC, DEG, EG and PG have utility as cryoprotectants for the freezing and thawing of IVF Bovine embryos.
Agricultural waste products, beech wood and walnut shells, were hydrolyzed at 40$^{\circ}C$ using mixed crude enzymes produced by Penicillium sp. AHT-1 and Rhizomucor pusillus HHT-1. D-xylose, 4.1 g and 15.1 g was produced from the hydrolysis of 100 g of beech wood and walnut shells, respectively. For xylitol production, Candida tropicalis IFO0618 and the waste product hydrolyzed solutions were used. The effects on xylitol production, of adding glucose as a NADPH source, D-xylose and yeast extract, were examined. Finally, a 50% yield of xylitol was obtained by using the beech wood hydrolyzed solution with the addition of 1% yeast extract and 1% glucose at an initial concentration.
Oleanane-type triterpenoids exist as secondary metabolites in various plants. In particular, soyasaponin, an oleanane-type triterpenoid, is abundant in the hypocotyl of soybean, one of the most widely cultivated crops in the world. Depending on their chemical structure, soyasaponins are categorized as group A saponins or group DDMP (2,3-dihydro-2,5-dihydroxy-6-methyl-4H-pyran-4-one) saponins. The different soyasaponin chemical structures present different health functionalities and taste characteristics. However, conventional phenotype screening of soybean requires a substantial amount of time for functionality of soyasaponins. Therefore, we attempted to use liquid chromatography with a photodiode array detector and tandem mass spectrometry (LC-PDA/MS/MS) for accurately predicting the phenotype and chemical structure of soyasaponins in the hypocotyl of five common soybean natural mutants. In this method, the aglycones (soyasapogenol A [SS-A] and soyasapogenol B [SS-B]) were detected after acid hydrolysis. These results indicated that the base peak and fragmentation differ depending on the chemical structure of soyasaponin with aglycone. Thus, a fragmentation database can help predict the chemical structure of soyasaponins in soyfoods and plants.
Fahrudin, Mokhamad;Otoi, Takeshige;Karja, Ni Wayan Kurniani;Murakami, Masako;Suzuki, Tatsuyuki
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.14
no.8
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pp.1057-1061
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2001
In this study we explored the possibility of performing nuclear transfer in the domestic cat and assessed the ability of different culture media to support in vitro development of reconstructed cat embryos. Donor somatic cells were derived from cultured cumulus cells or explants of oviduct tissue, and recipient cytoplasts from in vitro matured oocytes. A higher percentage of cleavage (84.6% and 86.5%) and development to the morula stage (35.9% and 44.2%) was found when reconstructed embryos receiving cumulus or oviduct cells were cultured in MK1 medium, compared with those cultured in CR1aa (58.7% and 72.5%, 13.8% and 13.6%, respectively). There was no significant difference between MK1 and CR1aa media with respect to the proportion developing to the blastocyst stage (15.4% and 17.3% vs 6.8% and 8.6%, respectively, p>0.05). There was no significant effect (p>0.05) of donor cell type (cumulus and oviduct cells) on the rates of fusion (65.0% and 52.5%), cleavage (84.6% and 86.5%), development to the morula (35.9% and 44.2%), and blastocyst (15.4% and 17.3%) stages when reconstructed embryos were cultured in MK1 medium. Similar results were found for the reconstructed embryos cultured in CR1aa medium. These results show that culture medium has a significant impact on the early development of reconstructed cat embryos, whereas donor cell type does not have a significant effect.
This is a case study on the new model of Graduate School recently established by 22 government-sponsored research institutes, focused on the University of Science and Technology(UST). It first deals with the necessity of authorized education system in government-sponsored research institutes not only for nourishing highly caliber manpower but also for activating research institutes. And then it analyzes the general status of the UST and Japanese graduate school model and its comparison. Finally it points out some suggestions for future development of the UST.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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