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온천수로부터 분리한 항진균세균의 특성 및 감마선$(Co^{60})$ 조사를 이용한 돌연변이체 유기 (Characteristics of Antifungal Bacterium, Bacillus subtilis YS1 and It′s Mutant Induced by Gamma Radiation)

  • 이영근;김재성;송인근;정혜영;장화형
    • 미생물학회지
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    • 제37권4호
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    • pp.305-311
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    • 2001
  • 다양한 식물병원성 진균을 방제하기 위하여 온천수로부터 1종의 동물병원성 진균과 12종의 식물병원성 진균에 항진균 활성을 갖는 고온성 세균을 분리하였으며 Bacillus subtilis YS1으로 동정되었다. 분리 균주의 감마선($Co^{60}$)에 대한 감수성 조사 결과, $D_{10}$ value는 2.08 kGy로 20 kGy 의 방사선량에서도 생존 가능한 방사선 저항성 균주였다. 방사선 조사를 이용하여 5종의 돌연변이체를 유기하였으며, 이 중 B. subtilis YS1-1009 돌연변이체는 Botryoshaeria dothidea에 대한 항진균 활성의 증가 및 4종의 식물병원성 진균에 대하여 항진균 활성이 감소하는 종특이적 항진균 활성 변화를 나타내었다. 또한 상용농약인 tebuconazole에 대하여 저항성을 나타내었으며 17종의 다른 농약에 대해서도 전체적으로 야생형 균주에 비해 저항성이 증가하였다. B. subtilis YS1-1006 돌연변이체는 copper hydroxide에 저항성을 나타내었으며, B. subtilis YS67 돌연변이체는 항진균 활성이 소실된 tryptophan 및 proline 또는 uracil 및 arginine 영양요구성 돌연변이체였다. 이러한 결과로부터 극한 환경에서 분리한 본 분리균주는 환경친화적으로 진균에 의한 식물병을 방제할 수 있으며 방사선을 이용한 돌연변이체 유기는 기능성 균주의 개량이나 작용기작 연구를 위한 돌연변이체의 획득에 매우 효과적인 방법이라 사료된다.

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방사성 물질 감시를 위한 부호화 구경 감마카메라 개발 (Development of a Coded-aperture Gamma Camera for Monitoring of Radioactive Materials)

  • 조규성;신형주;지용기;윤정현
    • Journal of Radiation Protection and Research
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    • 제29권4호
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    • pp.257-261
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    • 2004
  • 핀홀 감마카메라의 민감도를 향상시키기 위하여 픽셀화된 CsI(Tl) 섬광체와 위치민감형 광증배관을 이용하여 부호화 구경 감마카메라를 개발하였다. Rounded-hole로 이루어진 $13{\times}11$ 픽셀구조의 개조된 uniformly reductant array (URA) 가 계측기의 공간해상도를 고려하여 부호화된 마스크로 선택되었다. 부호화된 구경 카메라와 핀홀 카메라의 성능을 비교하기 위하여 Tc-99m 소스의 여러 가지 형태를 이용하여 테스트 하였으며, 신호 대 잡음비 또는 민감도의 향상에 대한 카메라의 성능을 분석하였다. 그 결과 공간해 상도에 있어서 약간의 저하가 있었으나 영상의 질은 매우 향상되었다. 비록 카메라의 개발과 테스트가 저에너지 영역에서 이루어졌지만, 부호화 구경 카메라의 구상은 방사성 물질 감시 그리고 다른 응용들에 있어서도 효과적으로 사용되어질 수 있을 것이다.

Fission Yeast-based Screening to Identify Putative HDAC Inhibitors Using a Telomeric Reporter Strain

  • Chung, Kyung-Sook;Ahn, Jiwon;Choi, Chung-Hae;Yim, Nam Hui;Kang, Chang-Mo;Kim, Chun-Ho;Lee, Kyeong;Park, Hee-Moon;Song, Kyung-Bin;Won, Misun
    • Molecules and Cells
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    • 제26권1호
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    • pp.93-99
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    • 2008
  • Transcriptional silencing is regulated by promoter methylation and histone modifications such as methylation and acetylation. We constructed a Schizosaccaromyces pombe reporter strain, KCT120a, to identify modifiers of transcriptional silencing, by inserting the $ura4^+$ gene into a heterochromatic telomere region. Two compounds inhibited the activity of histone deacetylases, induced acetylation of histone H3 and caused apoptotic cell death in HeLa cells. Expression of gelsolin and $p21^{waf1/cip1}$ also increased, as it does in response to HDAC inhibitors such as TSA. Therefore, these compounds appear to be potent inhibitors of HDACs, and hence potential anti-cancer drugs. Our observations suggest that a yeast cell-based assay system for transcriptional silencing may be useful for identifying histone deacetylase inhibitors and other agents affecting chromatin remodeling.

Development of a Genome-Wide Random Mutagenesis System Using Proofreading-Deficient DNA Polymerase ${\delta}$ in the Methylotrophic Yeast Hansenula polymorpha

  • Kim, Oh Cheol;Kim, Sang-Yoon;Hwang, Dong Hyeon;Oh, Doo-Byoung;Kang, Hyun Ah;Kwon, Ohsuk
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제23권3호
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    • pp.304-312
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    • 2013
  • The thermotolerant methylotrophic yeast Hansenula polymorpha is attracting interest as a potential strain for the production of recombinant proteins and biofuels. However, only limited numbers of genome engineering tools are currently available for H. polymorpha. In the present study, we identified the HpPOL3 gene encoding the catalytic subunit of DNA polymerase ${\delta}$ of H. polymorpha and mutated the sequence encoding conserved amino acid residues that are important for its proofreading 3'${\rightarrow}$5' exonuclease activity. The resulting $HpPOL3^*$ gene encoding the error-prone proofreading-deficient DNA polymerase ${\delta}$ was cloned under a methanol oxidase promoter to construct the mutator plasmid pHIF8, which also contains additional elements for site-specific chromosomal integration, selection, and excision. In a H. polymorpha mutator strain chromosomally integrated with pHIF8, a $URA3^-$ mutant resistant to 5-fluoroorotic acid was generated at a 50-fold higher frequency than in the wild-type strain, due to the dominant negative expression of $HpPOL3^*$. Moreover, after obtaining the desired mutant, the mutator allele was readily removed from the chromosome by homologous recombination to avoid the uncontrolled accumulation of additional mutations. Our mutator system, which depends on the accumulation of random mutations that are incorporated during DNA replication, will be useful to generate strains with mutant phenotypes, especially those related to unknown or multiple genes on the chromosome.

Thrust Characteristics of a Laser-Assisted Pulsed Plasma Thruster

  • Masatoshi Kawakami;Hideyuki Horisawa;Kim, Itsuro ura
    • 한국추진공학회:학술대회논문집
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    • 한국추진공학회 2004년도 제22회 춘계학술대회논문집
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    • pp.294-299
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    • 2004
  • An assessment of a novel laser-electric hybrid propulsion system was conducted, in which a laser-induced plasma was induced through laser beam irradiation onto a solid target and accelerated by electrical means instead of direct acceleration only by using a laser beam. A fundamental study of newly developed rectangular laser-assisted pulsed-plasma thruster (PPT) was conducted. On discharge characteristics and thrust performances with increased peak current compared to our previous study to increase effects of electromagnetic forces on plasma acceleration. Maximum peak current increased for our early study by increasing electromagnetic effects in a laser assisted PPT. At 8.65 J discharge energy, the maximum current reached about 8000 A. Plasma behaviors emitted from a thruster in various cases were observed with an ICCD camera. It was shown that the plasma behaviors were almost identical between low and high voltage cases in initial several hundred nanoseconds, however, plasma emission with longer duration was observed in higher voltage cases. Canted current sheet structures were also observed in the higher voltage cases using a larger capacitor. With a newly developed torsion-balance type thrust stand, thrust performances of laser assisted PPT could be estimated. The impulse bit and specific impulse linearly increased. On the other hand, coupling coefficient and the thrust efficiency did not increase linearly. The coupling coefficient decreased with energy showing maximum value (20.8 ?Nsec/J) at 0 J, or in a pure laser ablation cases. Thrust efficiency first decreased with energy from 0 to 1.4 J and then increased linearly with energy from 1.4 J to 8.6 J. At 8.65 J operation, impulse bit of 38.1 ?Nsec, specific impulse of 3791 sec, thrust efficiency of 8 %, and coupling coefficient of 4.3 ?Nsec/J were obtained.

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분열효모에서 spNab2 유전자의 결실돌연변이 및 과발현에 대한 분석 (Effects of spNab2 Deletion and Over-Expression on mRNA Export)

  • 윤진호
    • 미생물학회지
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    • 제45권4호
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    • pp.300-305
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    • 2009
  • mRNA의 3' 말단형성 뿐만 아니라, 성숙한 mRNA의 핵에서 세포질로의 이동에 중요한 역할을 하는 출아효모 Saccharomyces cerevisiae의 폴리(A)-RNA 결합단백질인 Nab2와 유사한 분열효모 Schizosaccharomyces pombe의 단백질을 암호화하는 유전자(spNab2로 명명)의 결실돌연변이주(deletion mutant)를 제조하여 그 특성을 조사하였다. 이배체인 S. pombe 균주에 하나의 spNab2 유전자만을 결실시킨 후 4분체분석(tetrad analysis)을 수행한 결과, S. cerevisiae NAB2와는 다르게 이 유전자는 생장에 반드시 필요하지 않았다. 또한 spNab2 결실돌연변이는 mRNA의 핵에서 세포질로의 이동도 정상적으로 보였다. spNab2의 역할을 알아보기 위해, 티아민에 의해 발현이 조절되는 강력한 프러모터를 이용하여 spNab2를 과발현시켰다. spNab2 유전자가 과발현되면, 세포의 생장이 심하게 억제되었으며, 폴리(A)-RNA가 핵 안에 축적되고 세포질에서는 줄어들었다. 또한 GFP 융합단백질을 이용하여 spNab2 단백질의 세포 내 위치를 관찰한 결과, spNab2-GFP는 주로 핵 안에 존재하였지만 세포질에서도 관찰되었다. 이와 같은 결과들은 spNab2 유전자 역시 mRNA의 핵에서 세포질로의 이동에 관여하고 있음을 시사한다.

Creation of an Ethanol-Tolerant Yeast Strain by Genome Reconstruction Based on Chromosome Splitting Technology

  • Park, A-Hwang;Sugiyama, Minetaka;Harashima, Satoshi;Kim, Yeon-Hee
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제22권2호
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    • pp.184-189
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    • 2012
  • We sought to breed an industrially useful yeast strain, specifically an ethanol-tolerant yeast strain that would be optimal for ethanol production, using a novel breeding method, called genome reconstruction, based on chromosome splitting technology. To induce genome reconstruction, Saccharomyces cerevisiae strain SH6310, which contains 31 chromosomes including 12 artificial mini-chromosomes, was continuously cultivated in YPD medium containing 6% to 10% ethanol for 33 days. The 12 mini-chromosomes can be randomly or specifically lost because they do not contain any genes that are essential under high-level ethanol conditions. The strains selected by inducing genome reconstruction grew about ten times more than SH6310 in 8% ethanol. To determine the effect of mini-chromosome loss on the ethanol tolerance phenotype, PCR and Southern hybridization were performed to detect the remaining mini-chromosomes. These analyses revealed the loss of mini-chromosomes no. 11 and no. 12. Mini-chromosome no. 11 contains ten genes (YKL225W, PAU16, YKL223W, YKL222C, MCH2, FRE2, COS9, SRY1, JEN1, URA1) and no. 12 contains fifteen genes (YHL050C, YKL050W-A, YHL049C, YHL048C-A, COS8, YHLComega1, ARN2, YHL046W-A, PAU13, YHL045W, YHL044W, ECM34, YHL042W, YHL041W, ARN1). We assumed that the loss of these genes resulted in the ethanol-tolerant phenotype and expect that this genome reconstruction method will be a feasible new alternative for strain improvement.

써클콘택트렌즈의 염료 용출에 대한 연구 (A Study on Dye Elution from the Circle Contact Lenses)

  • 김소라;강유라;서보민;박미정
    • 한국안광학회지
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    • 제19권2호
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    • pp.171-177
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    • 2014
  • 목적: 본 연구는 면봉으로 문지르기를 하였을 때 써클콘택트렌즈로부터의 염료 용출 여부를 알아보기 위하여 수행되었다. 방법: 총 7종의 써클콘택트렌즈를 면봉으로 문질렀을 때 표면의 변화를 주사전자현미경으로 관찰하고, $20^{\circ}C$$36.5^{\circ}C$에서 각각 다목적용액에 1 주일간 담가두었을 때의 염료용출과 비교하였다. 결과: 면봉으로 문지르기를 하였을 때 전면 혹은 후면에서 염료가 용출되어 나오는 렌즈는 총 7종 중 5종으로 나타났으며, 염료 용출 여부는 써클콘택트렌즈 종류에 따라 상이하였고 동일 써클콘택트렌즈라 하더라도 전면과 후면에서 상이하였다. 염료가 용출된 경우는 문지르기로 인하여 염료 부분이 긁혀 나감을 주사전자현미경 관찰을 통하여 확인할 수 있었다. 그러나 다목적용액에 $20^{\circ}C$ 혹은 $36.5^{\circ}C$에 1 주일간 담궈 두었을 때에는 염료는 용출되지 않았다. 실험 대상 써클콘택트렌즈 중 50% 이상의 제조사에서 착색제의 성분에 대한 정보를 제공하지 않고 있으며 염색방법 등과 같은 기본정보들이 부실하게 제공되고 있었다. 결론: 본 연구에서는 물리적인 힘이 가해졌을 때 써클콘택트렌즈의 염료 용출에 대한 결과를 도출하였고 써클콘택트렌즈의 개발 및 안전한 착용에 기여할 것으로 보인다.

일본국(日本國) 경도(京都)의 정가(町家) 유형(類型) 연구(硏究) -신경정가(新京町家)의 "후끼누께" (취발(吹拔))를 통하여 본 "열림" 성향(性向)에 대하여- (THE OPEN-ORIENTED CHARACTERISTICS OF THE NEW TOWN HOUSE 'MACHIYA' IN KYOTO FROM ITS 'HUKI-NUKE' SPACE POINT OF VIEW)

  • 김태영
    • 건축역사연구
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    • 제5권1호
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    • pp.50-72
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    • 1996
  • The typical Japanese house has the characteristics of open dwellings to make them cool in the hot and humid summer. And then the traditional town house 'Machiya', being built very closely to each other and walled up both sides, it has taken the open-oriented characteristics in itself. The purpose of this study is to clarify that the open-oriented of traditional 'Machiya' has been succeeded to the new 'Machiya' in the latest. The new 'Machiya' shows the open-oriented, taking the ventilative 'Huki-nuke' space of traditional 'Machiya' as the new spatial formal elements, in the changes such as scale material space organization. The characteristics of 'Huki-nuke' space are represented as follows ; 1. The facade of the traditional 'Machiya', which has taken on a semitransparent qualty, has been generally changed to the closing qualty except for the open parts of shop and garage. This facade of the new 'Machiya' has been taken to be in keeping with the existing town as much as possible. 2. A series of three rooms, composed of shop/living dining kitchen/room from the road, have been dispersed to every floors in a building with a very extensive scale. But this serial and linear type remains as the loosefit space, and the long dwellings of the upper stories are divided by type each dwelling unit. 3. 'Tori-niwa', which is a consecutive and penetrating space, connects the road with the rooms of dwelling and functions as the circulation of man thing energy, The new 'Machiya' changed to the multi-story, the corridor and the stair have been fumed up as the elements in the place of 'Tori-niwa' The 'Huki-nuke' space was locted in the hall, stairwell, living dining kitchen room, and so on. 4. The small court yard 'Tsubo-niwa' and back yard 'Ura-niwa' at the both ends of living spaces would be made a hole in a series of rooms and enclosed by the neighboring 'Machiya'. On the contrary the new 'Machiya' at present takes in the private and closing organization enclosing the innercourt. 5. The open-oriented ${\ulcorner}$In${\lrcorner}$ or ${\ulcorner}$Out${\lrcorner}$ is not brought out because of the delicate spatial formal configuration in the traditional 'Machiya'. But the open-oriented ${\ulcorner}$In${\lrcorner}$, all sides being closed by walls, is well brought out in the new 'Machiya'.

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Saccharomycopsis속과 Saccharomyces속의 잡종형성 균주에서 생산하는 ${\alpha}$-amylase의 특성 (Characterization of ${\alpha}$-amylase Producing Hybrid Constructed between Saccharomycopsis and Saccharomyces)

  • 양영기;문명님;임채영;이영하;김정호
    • 미생물학회지
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    • 제35권4호
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    • pp.315-321
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    • 1999
  • 핵전이 방법을 이용하여 효모에서 전분분해능이 향상된 새로운 우수 균주를 개발하고자 하였다. Saccharomycopsis fiburigera KCTC 7393과 Saccharomyces cerevisiae KCTC 7049에서 핵을 분리한 후 영양요구 돌연변이주인 S. cerevisiae의 안으로 전달시켜 잡종(MN-16)을 형성하여 전분 분해능이 증가된 잡종을 선별하였다. 세포 배양액으로 조효소 용액을 만든 후 ammonium sulfate 침전, DEE-Sephacel column chromatography, Sephacryl S-200 column chromatography 등의 정제과정을 통해 9.7%의 회수율로 약 10.6배 정제 된 효소를 얻을 수 있었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE 전기영동을 통해 단일 band를 보여 주었으며, SDS-PAGE 와 Sephacryl S-200 column chromatography를 통해서 53kDa으로 나타났다. 정제효소의 최적 활성 온도는 40${\circ}C$이고, 안정성은 40~45${\circ}C$로 나타났다. 최적 활성 pH는 5.5이었고, pH 5.0~7.0 정도에서 pH안정성이 80%정도 유지되었다. 가용성 전분에 대한 $K_{m}$ 값은 2.5㎎/㎖이었다. 또한, 정제 효소의 금속 이온의 효과로 $Ca^{2+}, Co^{2+}, EDTA, Mg^{2+}, Mn^{2+}, Zn^{2+}$ 첨가시 활성이 촉진되었고, $Ca^{2+}$의 경우 가장 높은 반면 $Cu^{2+}, Fe^{2+}, Ni^{2+}$의 경우는 오히려 활성이 감소되었다.

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