본 실험은 쇠고기의 비 선호부위를 고도로 이용하기 위한 연구의 일환으로 쇠고기의 염통과 지라를 각종효소로 가수분해하여 얻은 분획물을 한외여과와 gel-filtration, 그리고 HPLC를 이용하여 분리 및 정제하여 얻은 펩타이드의 ACE 저해 활성을 검토한 실험이다. 쇠고기 염통과 지라에서 수용성 단백질을 추출한 다음 효소 처리하여 4, 8, 12, 24시간 동안 37$^{\circ}C$에서 배양하였다. 염통과 지라단백질의 가수분해물의 ACE 저해 활성을 측정한 결과 염통에서는 Thermolysin과 Proteinase A 효소를 12시간 혼합처리한 가수분해물에서 가장 좋은 ACE 저해 효과를 보여주었고 지라에서는 Thermolysin과 Protease 효소를 24시간 혼합처리한 가수분해물에서 ACE 저해 효과가 가장좋았다. ACE 저해효소가 가장 좋은 가수분해물을 Ultrafiltration 통해 분리하였으며, 분리 정제된 가수분해물을 Gel-filtration을 통해서 분획 하였다. 이때 염통에서는 F11, F36, F51, F63, F72의 큰 분획물을 얻었고 지라에서는 F30, F55, F71, F91에서 큰 분획물을 얻었다. 이 분획물들의 ACE 저해 활성을 측정한 결과 염통에서는 F72에서 $IC_{50}$값 0.37mg/ml로 ACE 저해 활성이 가장 좋았다. 지라에서는 F30에서 $IC_{50}$값 1.840 mg/ml로 ACE 저해 활성이 가장 좋았다. 그리고 여기서 활성이 좋은 염통을 가지고 Reversed- Phase HPLC를 이용하여 분리 한 결과 4개의 큰 피크들을 얻을 수 있었다. 그 결과 peak 1, peak 2, peak 3, peak 4의 IC50값은 각각 0.28mg/ml, 0.26mg/ml, 0.25mg/ml, 0.35mg/ml이었다. 이 peak들의 아미노산을 분석한 결과, peak 1에서는 glycine과 methionine, peak 2는 proline, cystine, methionine, peak 3는 proline, peak 4는 alanine, methionine, leucine 이 주요 구성 성분 아미노산이었다. 위 실험 결과로서, 염통과 지라에서의 ACE저해 활성은 염통이 지라보다 좋았고, 특히 Thermolysin과 Proteinase A 효소를 12시간 배양한 염통단백질 가수분해물에서 가장 좋은 ACE 저해 활성 peptide을 얻을 수 있었다.
고혈당과 고지질혈증이 운동 중 골격근의 당원절약효과가 있는지 또는 골격근섬유의 특생에 따른 차이가 있는지를 규명하기 위해서 흰쥐(Sprague Dawley)를 대상으로 실험한 연구결과를 요약하면 다음과 같다. 먼저 고혈당에 의한 결과는 하지근 중 족척근의 운동부하 45분군의 당원농도가 고혈당군에서 대조군의 그것보다 약 13% 높아서 고혈당에 의한 족척근의 당원절약효과를 관찰할 수 있었으며 또한 백색 비복근의 운동부하 45분군에서 절약효과를 관찰할 수 있었다. 그러나 서근인 가자미근과 서근의 특성이 강한 적색 비복근에서는 모든 실험군에서 5-13%의 절약경향이 있었다. 이때 고혈당군의 혈당농도는 운동부하 전, 운동부하 30 및 45분후에 각각 $145.7{\pm}7.4$, $164{\pm}6.2$ 및 $156{\pm}6.8mg/dL$로서 대조각군의 혈당농도보다 유익하게 높았다. 고지질혈증은 복강내 heparin투여와 10% 인트라리포즈를 경구 투여하여 유도하였으며 대조군, 대조운동부하군 및 고지질혈증군에서 유리지방산 농도(uEq/L)가 $247{\pm}41.1$, $260{\pm}58.6$ 및 $444{\pm}23.1$로서 고지질혈증군이 다른 양 군보다 유의하게 높았다. 고지질혈증에 의한 근당원절약효과가 있는지 여부를 관찰한 결과 가자미근, 적색 비복근 및 족척근 등에서 통계적으로 유의한 절약효과를 관찰할 수 없었으나 백색 비복근에서 절약의 경향을 보였다. 이상의 결과로 보아 흰쥐에서 비교적 단시간의 운동부하 중 평균 155mg/dL의 고혈당을 유지하였을 때 족척근과 백색 비복근에서 근 당원이 절약되었으며 고지질혈증에 의해서는 근당원의 절약효과가 없었다. 또한 속근섬유의 근육에서 고혈당에 의한 당원절약효과가 서근보다 뚜렷하였다.
Elijah Ogola Oketch;Yu Bin Kim;Myunghwan Yu;Jun Seon Hong;Shan Randima Nawarathne;Jung Min Heo
Journal of Animal Science and Technology
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제65권2호
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pp.377-386
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2023
The effect of different commercially available bedding materials on the growth performance and carcass characteristics of ducks for 42 days was investigated. 336 one-day-old White-Pekin ducklings (60.48 ± 0.16 g) were randomly allocated into 24-floor pens with one of the three beddings namely i) coco peat, ii) rice husks, or iii) sawdust. 14 ducklings per pen and 8 replicate pens per bedding material were used. Birds were fed a starter diet from days 1-21 and a grower diet from days 22-42. Weekly growth performance evaluation was conducted for the average body weight, weight gains, daily feed intake, and feed conversion efficiency. One bird per pen was sacrificed on day 42 for the evaluation of carcass characteristics including the carcass, breast, and leg muscle percentages. Breast and leg muscle samples were then collected and analyzed for their proximate and pH values. Higher body weights (p < 0.05) were noticed with rice husks on day 42 only. Improved daily gains (p < 0.05) were also noticed for birds raised with rice husks over the entire period (days 1-42). Concerning feed intake, higher values (p < 0.05) were similarly noted with rice husks for the grower phase (days 22-42), and the entire experimental period (days 1-42). Marginally improved feed intake values were also noted with the use of rice husks as the bedding materials on day 42 (p = 0.092). Improved feed efficiency (p < 0.05) was noticed with rice husks on day 35, the grower period, and the entire 42-day period. However, no significant differences were noticed for most of the carcass characteristics that were evaluated. Nevertheless, higher (p < 0.05) pH values for the breast muscle were noticed with the use of coco peat and sawdust as the bedding. Conclusively, the bedding type could have a significant impact on the growth performance of ducks without adverse effects on carcass characteristics. The use of rice husks as bedding might be advantageous and is therefore recommended.
In recent years, experimental evidence have been suggested that melatonin has either contractive or relaxing effects on the vascular smooth muscle in vitro. But the effect of melatonin on the cardiovascular system in vivo had been emphasized about the hypotensive effect. In this work, we found not only hypotensive effect but also hypertensive effect of melatonin in rats and attempted to determine the mechanism of these effects elicited by melatonin. Regadless of concentration, melatonin(0.002~5 mg/kg) produced increase in mean blood pressure (MBP) in 36% (54/150 cases) and decrease in mean blood pressure in 64%(96/150 cases). As a whole melatonin caused an increase or a decrease in MBP without compensatory decrease or increase in heart rate. The melatonin-induced hypertension was abolished by the pretreatment of phenoxybenzamine, a ${\alpha}$-adrenoceptor antagoninst. The melatonin-induced hypotension was abolished by the pretreatment of propranolol, a ${\beta}$-adrenoceptor antagonist, ODQ, a NO-sensitive guanylate cyclase inhibitor, or nifedipine, a L-type $Ca^{2+}$ channel blocker, but not by bilateral cervical vagotomy. The results indicate that melatonin-induced hypertension may be related to ${\alpha}$-adrenoceptor stimulation and melatonin-indued hypotension may be related to ${\beta}$-adrenoceptor stimulation, inhibition of $Ca^{2+}$ channel and/or activation of guanylate cyclase.
The insulin-like growth factor (IGF) is found in all vertebrates and its type-II molecule is regarded as a fundamental embryonic growth factor during development. We have firstly identified, in this study, a cDNA clone corresponding to IGF-II (flIGF-II) from the adult brain of the teleost, Paralichthys olivaceus. We also examined the tissue expression of flIGF-II in several adult tissues by RT-PCR. The flIGF-II cDNA contained a complete ORF consisting of 215 amino acids and one stop codon. Its molecular characteristics appear to be similar to the previously identified IGF-II molecules, in which a common primary structure exhibiting B, C, A, D, and E domains is evidently observed. This cDNA clone seems to be cleaved at $Ala_{52}$ for the $NH_2$-end signal peptide and appears to produce a 98 amino acid-long E-peptide from the $Arg^{118}$. The functional B-D domain regions, therefore, include 65 amino acids and is able to encode a 7.4-kDa protein. The most prominent structural difference between IGF-I and IGF-II was that the D domain of IGF-II exhibits a two-codon-deleted pattern compared to the 8 amino acid-containing IGF-I. The insulin family signature in the A domain and six cysteins forming three disulfide bridges between the B and A domains were evolutionary-conserved from teleosts to mammalian IGF-II. Interestingly, the E-peptide region appears to provide a distinct hallmark between teleosts in amino acid composition. The flIGF-II shows 85.1% of sequence identity to salmon and trout, 90.6% to tilapia, and 98.4% to perch in amino acid level. In tissue expressions of IGF-II, it is very likely that flIGF-II has a significant expression in the adult brain. However, liver seems to be the main source for IGF-II production, and relatively low signals were observed in the adult muscle and kidney. Taken together, it would be concluded that the functional region for IGF-II mRNA is highly similar in phylogeny and is evolutionary, conserved as a mediator for the growth of vertebrates.
Purpose: Deficits of the respiratory chain are reported to be the major cause of Leigh syndrome is said to be the underlying causes. The need for biochemical diagnosis to draw more accurate diagnosis or prognosis to support treatments is rapidly increasing. This study tried to analyze the aspects of clinical characteristics and biochemical diagnosis of mitochondrial respiratory chain complex (MRC) defect in Leigh syndrome, using methods of biochemical enzyme assay. Methods: We included total number of 47 patients who satisfied the clinical criteria of Leigh syndrome and confirmed by biochemical diagnosis. All those patients went through muscle biopsy to perform biochemical enzyme assay to analyze MRC enzyme in order to find the underlying cause of Leigh syndrome. Results: MRC I defect was seen in 23 (48.9%) cases taking the first place and MRC IV defect in 15 (31.9%) following it. There were 9 (19.2%) cases of combined MRC defect. Combined cases of type I and IV were detected in 7 (14.9%) patients while type I and V in 2 (4.3%). The onset age of symptom was less than 1 year old in 28 (59.6%). The most common early symptom, observed in 23 (48.9%), was delayed development, but there were other various neurological symptoms observed as well. In regard with the disease progression, 35 (74.5%) patients showed slowly progressive course, the one that progressed continuously but slowly over 2 years of period. As for Maximum motor development, 22 (46.8%) were bed-ridden state, most of them suffering serious delayed development. Patients showed various symptoms with different organs involved, though neuromuscular involvement was most prominent. Delayed development was seen in all cases. Multifocal lesion in brain MRI study was seen in 36 (76.6 %) cases, taking a greater percentage than 11 (23.4%) cases with single lesion. In MR spectroscopy study, the characteristic lactate peak of mitochondrial disease was identified in 20 (42.6%) patients. Conclusions: Further analysis of clinical and biochemical diagnosis on more extended group of patients with Leigh syndrome will enable us to improve diagnostic precision and to understand the natural course of mitochondrial disease.
연구배경: TRAIL 은 death 수용체(DR4, DR5)와 decoy 수용체(DcR1, DcR2)라는 독특한 수용체 시스템 덕분에 정상세포는 보호하고 종양선택적 살상능을 가진 유망한 항암제로 주목받고 있다. DR5 TRAIL 수용체는 wild-type p53 세포에서 DNA 손상항암제인 doxorubicine에 의해 발현 유도되는 p53-조절 death 수용체 유전자로 처음에 발견되었다. 폐암 조직에서 이러한 DR5와 p53 발현에 관연 연구 보고는 많지 않다. 본 연구에서 비소세포폐암 조직에서 면역조직화학적 방법을 이용하여 DR5 발현과 p53과의 상관관계를 중심으로 분석하였다. 방법: Avidin-biotinylated horseradish peroxidase complex를 이용하여 89예의 수술적 절제된 비소세포폐암 포르말린 고정조직에서 면역조직화학적 염색을 시행하였다. 1차 항체로는 anti-DR5 polyclonal antibody (Pro Sci Inc., Poway, CA)와 anti-p53 monoclonal antibody (DO-7, Novocastra, Inc, Manhasset, NY)를 이용하였다. DR5 발현에 대한 면역조직화학적 판정은 면역염색의 범위와 강도를 합산하여 다음과 같이 판정하였다; 0, non-staining; 1+, weak and diffuse(>50%) or focal (<50%) or moderate and focal; 2+, strong and focal or moderate and diffuse ; 3+, strong and diffuse. 2+ 이상을 고발현(high expression)으로 분류하였다. p53 발현 정도에 따른 p53 wild type과 mutant type의 구분은 3+의 강양성인 경우를 mutant type으로 판정하였고, 나머지 0, 1+, 2+ 발현은 wild type p53으로 판정하였다. 결과: 주변 정상폐조직에서의 DR5발현은 기관지점막에서 89%의 고발현율을 보였으나, type I, II 폐상피세포, 림프구, 평활근세포 등의 정상 세포에서는 거의 발현되지 않았다. 폐암 조직에서 DR5 고발현율은 편평상피암에서 28% (15/53), 선암에서 47% (15/32), 대세포암에서 50% (2/4)의 빈도를 보여 전반적으로 36%의 고발현율을 보였다. DR5 고발현율은 임상병기, 생존기간 등 임상 지표와 유의한 상관관계를 보여주지 못하였지만 p53 발현과는 유의한 역상관관계를 보여주었다. 결론: 비소세포폐암 조직에서 면역조직화학적 분석을 통하여 DR5 발현이 기관지점막을 제외하고는 종양 선택적임을 확인하였고 p53 발현과 유의한 역상관관계가 있음을 확인하였다. 이는 DR5가 p53 조절 유전자임을 in vivo에서 확인한 유력한 증거일 수 있다고 생각된다.
어육단백질을 이용한 새로운 식품소재개발을 목적으로 년간 약 20만톤이 어획되는 다획성 어류인 말쥐치육 단백질을 이용하여 plastein을 합성하였다. Plastein 합성을 위해 pepsin, $\alpha-chymotrypsin$, papain 및 protease을 이용한 말쥐치육 단백질의 가수분해 조건과 plastein 합성 반응 조건을 구명하였다. 가수분해 최적조건은 papain, pepsin, $\alpha-chymotrypsin$ 및 protease의 경우, 온도는 각각 $50^{\circ}C,\;40^{\circ}C,\;55^{\circ}C$ 및 $50^{\circ}C$, pH는 각각 6, 2, 7, 8, 가수분해 시간과 효소첨가농도는 papain과 protease 는 4시간, $0.5\%$, papain과 $\alpha-chymotrypsin$은 24시간, $1.0\%$였다. 이들중 경제성을고려하면 pepsin이 plastein 합성기질 제조에 적합한 것으로 판단되었다. Plastein 합성 최적조건으로서는 papain, pepsin, $\alpha-chymotrypsin$ 및 protease(from Streptomyces griseus)의 경우, pH는 각각 6, 4, 7, 6, 기질농도는 papain $50\%$, pepsin, $\alpha-chymotrypsin$ 및 prolease는 $40\%$였다. 온도는 4종의 효소 모두가 $50^{\circ}C$였다. Protease는 plastein 활성반응에 적합하지 않았다.
Kim, Eunju;Kim, Yoo-Sun;Kim, Kyung-Mi;Jung, Sangwon;Yoo, Sang-Ho;Kim, Yuri
Nutrition Research and Practice
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제10권1호
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pp.11-18
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2016
BACKGROUND/OBJECTIVES: Type 2 diabetes (T2D) is more frequently diagnosed and is characterized by hyperglycemia and insulin resistance. $\small{D}$-xylose, a sucrase inhibitor, may be useful as a functional sugar complement to inhibit increases in blood glucose levels. The objective of this study was to investigate the anti-diabetic effects of $\small{D}$-xylose both in vitro and stretpozotocin (STZ)-nicotinamide (NA)-induced models in vivo. MATERIALS/METHODS: Wistar rats were divided into the following groups: (i) normal control; (ii) diabetic control; (iii) diabetic rats supplemented with a diet where 5% of the total sucrose content in the diet was replaced with $\small{D}$-xylose; and (iv) diabetic rats supplemented with a diet where 10% of the total sucrose content in the diet was replaced with $\small{D}$-xylose. These groups were maintained for two weeks. The effects of $\small{D}$-xylose on blood glucose levels were examined using oral glucose tolerance test, insulin secretion assays, histology of liver and pancreas tissues, and analysis of phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPCK) expression in liver tissues of a STZ-NA-induced experimental rat model. Levels of glucose uptake and insulin secretion by differentiated C2C12 muscle cells and INS-1 pancreatic ${\beta}$-cells were analyzed. RESULTS: In vivo, $\small{D}$-xylose supplementation significantly reduced fasting serum glucose levels (P < 0.05), it slightly reduced the area under the glucose curve, and increased insulin levels compared to the diabetic controls. $\small{D}$-xylose supplementation enhanced the regeneration of pancreas tissue and improved the arrangement of hepatocytes compared to the diabetic controls. Lower levels of PEPCK were detected in the liver tissues of $\small{D}$-xylose-supplemented rats (P < 0.05). In vitro, both 2-NBDG uptake by C2C12 cells and insulin secretion by INS-1 cells were increased with $\small{D}$-xylose supplementation in a dose-dependent manner compared to treatment with glucose alone. CONCLUSIONS: In this study, $\small{D}$-xylose exerted anti-diabetic effects in vivo by regulating blood glucose levels via regeneration of damaged pancreas and liver tissues and regulation of PEPCK, a key rate-limiting enzyme in the process of gluconeogenesis. In vitro, $\small{D}$-xylose induced the uptake of glucose by muscle cells and the secretion of insulin cells by ${\beta}$-cells. These mechanistic insights will facilitate the development of highly effective strategy for T2D.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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