• Restorative Dentistry and Endodontics
• /
• 제27권5호
• /
• pp.473-478
• /
• 2002

근관내 spirochetes의 존재유무가 명확하게 밝혀져 있지 않았으나 최근 PCR을 사용한 연구에서 Treponema denticola균주가 감염근관의 50% 이상의 경우에서 발견됨에 따라 이 세균이 치수 및 치근단 질환에 관여하는지에 대한 관심 이 높아졌다. 하지만 그 정확한 기전은 아직 밝혀져 있지 않다. 이와 관련하여 Shenker등이 T. denticola의 sonicated extract에서 순수분리된 단백질 (SIP)이 임파구 proliferation을 방해함을 보고한바 있다. 따라서 본 연구의 목적은 면역억제단백질 SIP이 어떤 기전에 의해서 임파구증식을 억제하는지를 밝히는 데 있다. 건강한 혈액 공여자로부터 추출해낸 T세포에 PHA (phytohemagglutinin)로 증식자극을 주게되는데 이 과정에서 SIP을 처리하거나 처리하지 않은 경우를 비교하여 세포주기 진행과정을 유세포분석기 (Becton-Dickinson FACS$^{tarplus}$) 를 통하여 평가하였다. 실험결과 세단계의 chromatography과정을 통해 순수정제된 SIP은 50kDa와 56kDa의 두가지 polypeptide로 구성되어 있고 0.25$\mu\textrm{g}$으로 처리된 T 임파구는 42.5%의 [$^3$H]thymidine incorporation 억제가 그리고, 0.5$\mu\textrm{g}$으로 처리한 경우는 75.1%의 억제가 일어나 dose-dependent한 양상이 나타났다. Propidium iodide와 유세포 분석기를 사용하여 세포주기를 분석한 결과 medium으로만 처리한 경우 97%이상의 임파구는 G$_0$/G$_1$ phase에 머물러 있었으나 PHA자극을 받은 경우 G$_0$/G$_1$ phase에서 58%, S phase에서 34.6%, G$_2$/M phase에서 7.4%로 분포되어 나타났다. SIP으로 전처리한 경우 세포 증식이 감소하여 0.25$\mu\textrm{g}$을 첨가한 경우 75.1%가 G$_0$/G$_1$ phase에 머물러 있었고 더 강한 농도의 0.5$\mu\textrm{g}$을 첨가한 경우는 87.7%가 G$_0$/G$_1$ phase에서 S phase로 진행되지 않고 머물러있었다. 따라서 SIP으로 전처리된 T 임파구는 그 증식이 G$_0$/G$_1$ phase에서 차단된 것으로 보인다. 이러한 면역억제현상이 in vitro 상태뿐 아니라 in vivo에서도 진행된다면 spirochete가 치수 및 치근단 질환의 병인론에 연관된 면역반응저하기전에 중요한 역할을 하는 것으로 추론할 수 있다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
• /
• 제29권2호
• /
• pp.311-326
• /
• 1999

본 연구에서는 치주질환과 관련이 깊은 것으로 알려진 구강내 spirochetes 균 중 Treponema denticola(TDC)와 가장 최근에 분리 배양된 Treponema lecithinolyticum(TLC)이 치주인대세포에 미치는 영향을 알아보기 위하여 두 spirochtes 균주를 배양한후 MTT test를 이용한 치주인대 세포의 증식 억제효과를 알아보았다. 또한, 위상차 현미경을 이용한 세포형태의 변화를 관찰 하였으며, LDH(lactate dehydrogenase) test를 이용한 세포독성 실험과, gelatin zymography를 시행하여 교원질 분해효소의 하나인 gelatinase의 활성화 여부를 측정한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 일정한 반응시간에서 농도에 따른 세포증식 억제효과에서는 TLC의 경우 높은 농도$(150{\mu}g/well)$에서부터 세포증식 억제 효과가 나타났으며, TDC에서는 낮은 농도$(9.4{\mu}g/well)$에서도 억제 효과가 나타났다. 2. 일정한 농도에서 시간에 따른 세포증식 억제효과에서는 TLC의 경우 2일째 $150{\mu}g/well$ 농도에서부터 세포증식 억제효과가 나타났으며, TDC에서는 $9.4{\mu}g/well$ 농도에서는 2일째에 세포증식 억제효과가 나타났다. 3. 열처리한 세균의 세포증식 억제 효과에서는 TDC의 경우에서 열처리 시킨 경우와 그렇지 않은 경우에 차이가 나타났으나, TLC의 경우에는 차이가 없었다. 4. 위상차현미경으로 관찰한 치주인대세포의 형태변화는 대조군에 비해 실험군에서 세포 형태의 손상으로 방추형이 소실되었고 세포증식이 억제되었으며, 세포끼리의 연결 또한 끊어져 분리되어 있었다. 5. 세포독성을 알아보기 위한 LDH test에서는 대조군, 실험군 모두 큰 차이가 없었다. 6. Zymography를 통한 교원질 분해에 미치는 영향에서는 TDC와 TLC에 의한 분자량 72kDa의 progelatinase A가 활성형으로 발현되었다. 이상의 결과를 보아 TLC와 TDC는 세포증식 억제효과를 통해 치주인대세포에 영향을 미치며, 교원질 분해 효소 Type IV의 하나인 progelatinase A를 활성형으로 발현시킴을 확인하였다.

• International Journal of Oral Biology
• /
• 제33권2호
• /
• pp.65-70
• /
• 2008

Oral spirochetes are anaerobes known as one of causative agents for periodontal diseases. In this study, we investigated the possibility of utilizing fluorescent fatty acids for labeling oral spirochetes. Bacterial labeling was standardized with three different lengths of fluorescent fatty acids: 5-octadecanoylaminfluorescein (OAF), 5-dodecanoylamin-fluorescein (DAF), and 5-hexadecanoylaminfluorescein (HAF). Among these fatty acids, OAF showed the best labeling activity. Treponema denticola ATCC 35405 was totally saturated to the maximum when incubated with OAF $1\;{\mu}g/ml$ for 1 hour. Treponema vincentii LA-1 also increased in fluorescence in proportion to incubation time length and the concentration. In conclusion, these findings showed the possibility that the fluorescent fatty acid can be used for labeling oral spirochetes.

• 미생물학회지
• /
• 제49권3호
• /
• pp.292-296
• /
• 2013

본 연구는 multiplex real-time PCR을 이용하여 Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythus, Treponema denticola, Prevotella intermedia 등과 같은 6종의 주요 치주 질환 원인 미생물들을 동시에 검출할 수 있는 분석 방법에 관한 것이다. 4개의 형광 염료를 사용하여 internal control과 함께 3개의 균종씩 나누어 분석하였으며, 분석 대상 균종 간 그리고 다른 종류의 구강 미생물 균종과의 간섭과 교차 반응이 없음을 확인하였다. 본 연구의 multiplex real-time PCR은 타액과 플라그 등의 다양한 샘플에 포함되어 있는 각 미생물들을 정성, 정량적으로 분석할 수 있었으며, 치주염 환자와 건강한 사람들에 대한 비교 분석 결과 분명한 차이를 발견 할 수 있었다.

• Food Science and Biotechnology
• /
• 제14권1호
• /
• pp.94-98
• /
• 2005

Bone resorption surrounding tooth root causes tooth loss in periodontitis patients. Osteoclast has bone resorption activity. Effects of Artemisia asiatica on bone resorption induced by periodontopathogens, Porphyromonas gingivalis and Treponema denticola, were examined using co-culture systems of mouse osteoblasts and bone marrow cells. Addition of A. asiatica ethanol extract to bacterial sonicate abolished bacteria-induced osteoclastogenesis. To determine inhibitory mechanism of A. asiatica against osteoclastogenesis, effects of A. asiatica on expressions of osteoclastogenesis-inducing factors such as receptor activator of NF-${\kappa}B$ ligand (RANKL), prostaglandin $E_2\;(PGE_2)$, interleukin (IL)-1, and tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$, in osteoblasts were examined. A. asiatica suppressed expressions of RANKL, $PGE_2$, IL-$1{\beta}$, and TNF-${\alpha}$ increased by each bacterial sonicate. These results suggest inhibitory action of A. asiatica against osteoclastogenesis is associated with down-regulations of RANKL, $PGE_2$ IL-$1{\beta}$, and TNF-${\alpha}$ expressions.

• 대한소아치과학회지
• /
• 제33권3호
• /
• pp.457-468
• /
• 2006

정상인과 정신지체인 그리고 다운증후군 환자에서 치주상태 및 치주질환 원인균의 출현율을 비교 평가하고자 정상 학생 65명과 정신지체를 가진 학생 34명, 다운증후군을 가진 학생 28명, 총 127명을 조사대상으로 치태지수와 치은지수를 측정하고 치은연하 치태에 존재하는 Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia(B. forsythus), Treponema denticola, Fusobacterium nucleatum, Actinobacillus actinomyce temcomitans 균을 중합효소연쇄반응을 이용하여 검사하고 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 치태지수와 치은지수는 정신지체인군과 다운증후군 환자군에서 정상인군보다 높았다. 2. 정신지체인군과 다운증후군 환자군은 정상인군에 비해 치주질환 원인균의 출현율이 높았으며 특히 P. gingivalis와 T. denticola. A. actinomycetemcomitans가 유의한 차이를 보였다. 다운증후군 환자군과 정신지체인군의 비교시 치주질환 원인균의 출현율은 유의한 차이를 보이지 않았다. 3. 연령별 비교시 정상인군의 P. gingivalis는 14세이상군에서 크게 증가하는 양상을 보였다. 정신지체인군과 다운증후군 환자군에서 P. gingivalis는 정상인군보다 조기에 더 높은 비율로 출현하였으며 연령의 증가에 따라 증가양상을 보였다. T. denticola, A. actinomycetemcomitans는 정상인군보다 정신지체인군과 다운증후군 환자군에서 모든 연령대에서 높은 비율을 보였다. 4. 치태지수는 T. denticola와 유의한 관련성이 있었으며, 치은지수는 T. denticola, A. actinomycetemcomitans와 높은 관련성을 보여주었다. 이상의 결과를 요약해 보면 정신지체인군과 다운증후군 환자군은 정상인군보다 치태지수, 치은지수가 더 높았으며, P. gingivalis, T. denticola, A. actinomycetemcomitans의 출현율에서 유의한 차이를 보였다. 다운증후군 환자군과 정신지체인군은 치주질환 원인균이 어린 시기부터 매우 높게 출현하였으며, 두 군간에는 유의할 만한 차이를 보이지 않았다.

• International Journal of Oral Biology
• /
• 제35권4호
• /
• pp.197-202
• /
• 2010

Most oral microorganisms exist as biofilms which initiate formation via the attachment of an early colonizer to host proteins on the tooth surface. Fusobacterium nucleatum act as a bridge between early and late colonizers. Dental biofilms eventually comprise dental pathogens such as Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola and Tannerella forsythia. To evaluate the effects of mutual interactions between oral bacteria on the growth of biofilms, periodontopathogens were co-cultured with a $0.4\;{\mu}m$ barrier. Streptococcus gordonii inhibited the growth of F. nucleatum and periodontopathogens. However, F. nucleatum, P. gingivalis and T. denticola activated the growth of other bacteria. A co-culture system of early and late colonizers could be a useful tool to further understand bacterial interactions during the development of dental biofilm.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제25권3호
• /
• pp.393-398
• /
• 2015

Aptamers are composed of single-stranded oilgonucleotides that can selectively bind desired molecules. It has been reported that RNA or DNA could act as not only a genetic messenger but also a catalyst in metabolic pathways. RNA aptamers (average sizes 40-50 bp) are smaller than antibodies and have strong binding capacities to target molecules, similar to antigenantibody interactions. Once an aptamer was selected, it can be readily produced in large quantities at low cost. The objectives of this study are to screen and develop aptamers specific to oral pathogens such as Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, and Streptococcus mutans. The bacterial cell pellet was fixed with formaldehyde as a target molecule for the screening of aptamers. The SELEX method was used for the screening of aptamers and a modified western blot analysis was used to verify their specificities. Through SELEX, 40 kinds of aptamers were selected and the specificity of the aptamers to the bacterial cells was confirmed by modified western blot analysis. Through the SELEX method, 40 aptamers that specifically bind to oral pathogens were screened and isolated. The aptamers showed possibility as effective candidates for the detection agents of oral infections.

• 대한소아치과학회지
• /
• 제32권4호
• /
• pp.717-725
• /
• 2005

다운증후군 환자는 치주질환의 진행이 빠르고 치주조직의 파괴가 심하다. 다운증후군 환자의 치주질환 원인균의 출현율을 알아보고자 $7{\sim}19$세 다운증후군 환자 27명과 대조군으로 나이가 비슷한 정신지체자 27명을 대상으로 치태지수와 치은염 정도를 나타내는 치은지수를 측정하고 치은연하 치태에 존재하는 P. gingivalis, T. forsythia, T. denticola, F. nucleatum, A. actinomycetemcomitans균을 중합효소연쇄반응을 이용, 검사하고 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 다운증후군 환자와 대조군의 치태지수와 치은지수간에 통계적 유의성은 없었다(p>0.05). 2. 다운증후군 환자에서 F. nucleatum의 출현율이 96.3%로 가장 높았으며 그 다음이 T. forsythia 74.1%, P. gingivalis는 63.0%였으며 A. actinomycetemcomitans는 55.6%, T. denticola는 40.7%로 출현하였다. 정신지체자는 다운증후군 환자와 비슷한 순서로 치주질환 원인균이 출현하였다. 다운증후군 환자가 대조군에 비해 T. denticola를 제외한 4종의 균에서 높은 비율로 나타났으나 치주질환 원인균 출현율에서 유의한 차이를 나타내지 않았다(p>0.05). 3. 연령에 따른 연구에서 $7{\sim}10$세군에서 다운증후군환자의 P. gingivalis는 16.7%로 낮은 출현율을 보였으나 연령의 증가에 따라 출현율이 평균 53.0%로 높아졌다. 반면 A. actinomycetemcomitans균은 $7{\sim}10$세군부터 83.3%로 높은 비율을 보였다(p<0.05) 같은 연령대에서 다운증후군 환자는 대조군에 비해 치주질환 원인균의 출현율이 더 높은 경향을 보였으나 A. actinomycetemcomitans를 제외하고는 통계적인 유의차를 보이지 않았다(P>0.05). 4. P. gingivalis, T. forsythia, T. denticola가 함께 나타난 경우는 다운증후군 환자와 대조군 모두 33%를 나타내었다. red complex에 A. actinomycetem comitanstans까지가 나타난 경우는 다운증후군 환자에서 22%, 대조군에서 14%로 다운증후군 환자에서 더 높았다. 이상의 결과를 요약해보면 다운증후군 환자군과 정신지체자 대조군 모두에서 치주질환 원인균이 어린 시기부터 매우 높게 출현하였으나 전체적인 두 군간 치태지수, 치은지수. 치주질환 원인균 출현율에서 유의한 차이를 나타내지 않았다. 하지만 A. actinomycetem comitans균은 $7{\sim}10$세군 다운증후군 환자에서 대조군에 비해 높은 비율을 보였다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
• /
• 제29권2호
• /
• pp.325-333
• /
• 1999

The antibacterial efficacy of a mouthrinse(Denta Gargle) containing CPC(cetylpyridinium chloride), NaF and UDCA(ursodeoxycholic acid), on major periodontopathogens, was in vitro examined and compared with that of Listerine by a broth dilution method. The bacteria tested were Actinobacillus actinomycetemcomitans, Bacteroides forsythus, Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii, Prevotella intermedia, Porphyromonas gingivalis and Treponema denticola. The growth of all the bacteria were completely inhibited by a 1-min exposure to the both mouthrinses. When diluted at 1:5 or more, all bacteria analyzed but P. intermedia were not inhibited by Listerine. In contrast, Denta Gargle showed highly increased maximum inhibitory dilutions(MID) against all periodontopathogens included in this study, with MIDs ranging from 5-fold(F. nucleatum) to 160-fold dilutions(P. intermedia). The MIDs against A. actinomycetemcomitans, B. forsythus, P. gingivalis and T. denticola. were 1:40, 1:80, 1:80 and 1:80, respectively.