2016년 충북 충주에서 모자이크 병징을 보이는 초석잠을 채집하였다. 담배와 명아주에 즙액접종을 실시한 결과 담배에서 접종엽에 괴사반점이 나타나고 명아주 2종에서 상엽에 퇴록반점을 동반한 모자이크 병징이 관찰되었다. 기주반응과 결과를 통해 여러 바이러스의 복합감염을 추정할 수 있었고, 추정되는 바이러스의 확인을 위해 속특이 및 종특이 프라이머를 이용하여 RT-PCR을 수행하여 3종의 바이러스(AMV, CMV, TMV)를 검정하였다. 본 연구는 국내 초석잠에서 3종의 바이러스 감염을 확인하였고 CMV의 감염에 대한 첫 보고이다.
Gladioli (Gladiolus hybridus) showing flower colour breaking leaf mosaics, notched leaf, and dwarfing or lack of visible symptoms were collected from gladioli growing areas in Taegu and Kyungpook province, Korea. The three viruses isolated from the naturally infected gladioli were identified as broad bean wilt virus (BBWV), cucumber mosaic virus (CMV), and tobacco rattle virus (TRV) by their host range, immunosorbent electron microscopy (ISEM), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), direct tissue blotting immunoassay (DTBIA), and intracellural symptoms. By DTBIA and ISEM, TRV was detected in gladiolus showing notched leaf, while CMV was frequently detected in gladioli with dwarfing, color breaking and malformation of flowers. BBWV was also often detected in many symptomless gladiolus plants, but TRV was detected in notched-leaf of gladiolus. Electron microcopic examination of negatively stained preparations showed that BBWV and CMV are spherical particles of 28 nm and 30 nm in diameter, and TRV is rigid rod-shaped particles of 40∼200 nm in length. The rigid rodshaped virus particles reacted positively with TRV antiserum in ISEM and DTBIA, respectively.
Out of various fungi and bacteria tested for inhibition of Tobacco mosaic virus(TMV) infection using Nicotiana tabacum cv. Xanthi-nc, a bacterial isolate JB-l, identified as Pseudomonas putida had a strong direct inhibitory activity against the TMV infection. Its systemic or indirect activity was also noted at more than a half level of the direct control efficacy. Disease severity was reduced significantly in the susceptible tobacco N. tabacum cv. NC 82 by the treatment of the bacterial culture filtrate, somewhat more by the pretreatment than by simultaneous treatment, probably by inhibiting the TMV transmission and translocation in the plants, showing negative serological, which responses in the viral detection by DAS-ELISA. TMV-inhibitory substances from P. putida JB-1 were water-soluble, stable to high temperature(even boiling), and to a wide range of pH. As proteinase K nullified their antiviral activity, the TMV inhibition activity of P. putida may be derived from proteinaceous materials. In electron microscopy, TMV particles treated with the JB-1 culture were shown to be shrunken with granule-like particles attached on them. All of these aspects suggest that P. putida JB-1 may be developed as a potential agent for the control of TMV.
$AOS(\alpha-olefin),$ LAS(linear alkyl benzene), OSS(dioctyl sulfosuccinate) 및 SAS (dodecyl benzene sulfonic acid)등 4종 계면활성제의 TMV 감염저지 효과를 잎담배 품종 Xan-thi-nc 및 NC 82를 이용하여 조사하였다. 각 계면활성제를 2,500ppm 농도로 담배잎에 처리한 경우 바이러스(TMV) 또는 TMV RNA를 접종했을 때 모두 98% 이상의 감염저지 효과를 나타냈다. 그러나 이들을 담배 근권토양에 처리 3일후 잎에 Virus를 접종하여 병징 및 엽중 Virus 농도를 조사한 결과 무처리구와 차이가 없어 침투이행에 의한 TMV 감염저지 효과는 인정되지 않았다. 순화된 바이러스를 각 계면활성제 2,500ppm 용액과 혼합한 후 초고속원심분리에 의해 다시 Virus를 회수하여 활성을 조사한 결과 LAS는 96% 이상 Virus를 불활성화시켰으며, 이 외는 바이러스 활성에 영향을 미치지 못했다. 또 각 계면활성제가 처리된 Virus 입자의 형태는 무처리입자와 차이가 없었다. 이같은 결과들로 미루어 4종의 계면활성제가 나타낸 TMV 감염저지 효과는 바이러스 입자의 파괴 또는 감염초기 바이러스 입자의 외피 단백질 탈피억제에 의한 것이 아닌 것으로 판단된다.
Park, Minju;Baek, Eseul;Yoon, Ju-Yeon;Palukaitis, Peter
The Plant Pathology Journal
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제33권4호
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pp.429-433
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2017
Chrysanthemums (Chrysanthemum morifolium) are susceptible to tobacco mosaic virus (TMV). TMV-based expression vectors have been used in high-throughput experiments for production of foreign protein in plants and also expressing green fluorescent protein (GFP) to allow visualization of TMV movement. Here, we used TMV expressing the GFP to examine the infection of chrysanthemum by a TMV-based expression vector. Viral replication, movement and GFP expression by TMV-GFP were verified in upper leaves of chrysanthemums up to 73 days post inoculation (dpi) by RT-PCR. Neither wild-type TMV nor TMV-GFP induced symptoms. GFP fluorescence was seen in the larger veins of the inoculated leaf, in the stem above the inoculation site and in petioles of upper leaves, although there was no consistent detection of GFP fluorescence in the lamina of upper leaves under UV. Thus, a TMV-based expression vector can infect chrysanthemum and can be used for the in vivo study of gene functions.
Tobacco plants(Nicotiana tabacum cv. NC82) transformed with TMV CP cDNA were self-fertilized until 8th generation (R$_{8}$), and the transgenic plants from 6th to 8th generation were analized for their resistance to tobacco mosaic virus(TMV) and stability of the gene expression. The 6th generation of the plants(R$_{6}$) showed high resistance(81-91 %) to TMV at eight weeks after artificial inoculation with the virus. The transgenic cell line 601 was the most prominant in the expression of resistance. 98 % of the plants showed no symptom without any agronomic phynotepe variation when they were inoculated with the virus in a experimental field. However, 2% of the plants were revealed as delay type of symptom with mild mosaic on a few leaves. The viral resistance in greenhouse tests of the 7th generation (R$_{7}$) was 54-64%, and the number of delay type plants were increased than that of 6th generation plants. In the 8th generation, 81 % of the plants was complete resistant to the virus. The TMV CP cDNA of the transgenic plants of each generation was also confirmed by genomic PCR, and there was no systemic viral multiplication in the resistant plants. It suggests that the viral resistance and gene expression of the transgenic plants might be stable through the generations.ons.s.
The cDNAs derived from the coat protein (CP) genes of six plant RNA viruses, tobacco mosaic virus-pepper strains (TMV-P) and -ordinary strain (TMV-OM), potato virus Y (PVY), turnip mosaic virus (TuMV), cucumber mosaic virus (CMV) and potato leafroll virus (PLRV), were subcloned into the transcription vector, pSPT18, containing SP6 and T7 promoters. The digoxigenin (DIG)-labeled RNA polymerase after linearlization of the cloned pSPTs with XbaI or SacI, and were tested for their sensitivities for the detection of the six viruses. In slot-blot hybridization, dilution end points for the detection of TMV-P and TMV-OM were 10-4, while those of PVY, TuMV and CMV were 10-3. PLRV was detected at the dilution of 10-2. When each RNA probe was applied for the detection of the viruses in the preparations from the leaf disks (8 mm in diameter, and 12 to 15 mg in weight) of infected natural host plants, TMV-P, TMV-OM and TuMV could be detected from one disk, while PVY from 1 or 2 disks. CMV was detected in the preparation from two disks, and PLRV from three disks. With DIG-labeled RNA probe, PVY was detected at 5 days after inoculation, but with ELISA the virus was detected at 8 days after inoculation to tobacco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc) plants on which symptoms appeared at 9 days after inoculation. No difference was observed in cross reaction between the RNA probes for the detection of TMV-P and TMV-OM.
We conducted a survey on pepper virus diseases in 31 regions in Korea from November 2001 to December 2004. Using electron microscopy, test plant reaction, rapid immuno-filter paper assay (RIPA), reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and/or analysis of viral nucleotide sequences, we found a number of viruses from 1,056 samples that we collected. These included Cucumber mosaic virus (CMV), Pepper mottle virus (PepMoV), Pepper mild mottle virus (PMMoV), Broad bean wilt virus 2 (BBWV2), Tobacco mild green mosaic virus (TMGMV), and Tomato spotted wilt virus (TSWV). Of the samples analyzed, $343(32.5\%)$ were infected with CMV, $209(19.8\%)$ with PepMoV, $141(13.4\%)$ with PMMoV, $12(1.1\%)$ with BBWV2, $40(3.8\%)$ with TMGMV, $5(0.5\%)$ with TSWV, $153(14.5\%)$ with CMV and PepMoV, $54 (5.1\%)$ with CMV and PMMoV, $31(2.9\%)$ with PepMoV and PMMoV, $3(0.3\%)$ with CMV and BBWV2, $1(0.1\%)$ with CMV, PepMoV and BBWV2, $8(0.8\%)$ with CMV, PepMoV and PMMoV, and $30 (2.8\%)$ samples were infected with viruses which were not identified. CMV was the most predominant virus in all inspected fields and the number of the samples infected with PMMoV was relatively low as compared PepMoV infection level in pepper. TMGMV was only found in the southern part of Korea, while TSWV was isolated in Anyang and Yesan. However, we did not encounter in this survey the Alfalfa mosaic virus (AMV), Potato virus Y (PVY), Tobacco mosaic virus (TMV), and Pepper vein chlorosis virus (PVCV).
오이 모자이크바이러스(CMV, cucumber mosaic virus)는 작물의 생산량과 품질에 심각한 피해를 주기 때문에 외피단백질 유전자(CP, coat protein gene)를 도입하여 저항성 작물를 개발하고자 하였다. CMV CP유전자가 도입된 형질전환 담배 39 계통을 대상으로 오이모자이크바이러스 저항성을 검정하였다. 바이러스 저항성은 바이러스 감염으로 인한 생장 억제정도, 병징발현에 따른 잎모양의 변화로서 고도저항성, 저항성, 중간성, 감수성 등으로 판정하였고 39개 계통중 16 계통이 뚜렷한 바이러스 저항성을 보였다. 특히, 저항성 계통중 2 계통은 생장량과 잎모양에서 다른 저항성 계통보다 우수하여 고도저항성으로 세분하였다. 각 형질전환계통에서 CP단백질과 CP RNA 생성량을 조사하였는바, CP단백질 생합성은 대부분의 저항성과 감수성계통에서 검출되어 저항성과 특별한 관련을 인정할 수 없었으나 CP RNA는 대부분의 저항성 및 중간성 계통에서 다량 축적되는 경향을 보여 CP RNA가 저항성에 좀더 밀접함을 알수 있었다. 그러나 고도저항성 계통에서는 CP RNA가 검출되지 않아 저항성의 근원을 파악하기 위해서는 계속적인 연구가 요구된다.
A new isolate of Cucumber mosaic virus (CMV), identified as Li-CMV was isolated from a diseased Korean native lily (Lithium tsingtauense Gilg). Biological and serological properties of Li-CMV were characterized, and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis, restriction enzyme profiling of RT-PCR products, and nucleotide sequence analysis of RNA3 of the virus were performed in this study. Remarkable differences in symptoms between Li-CMV and ordinary CMV strains were found in tobacco plants and Datura stramonium. Li-CMV-infected tobacco plants (cv. Xanthi-nc and cv. Samsun) induced chlorotic ringspots on uninoculated upper leaves, and the symptom expression was delayed or faint whereas, ordinary CMV strains induced green mosaic symptoms on the plant. Systemic infections were observed on Nicotiana benthamiana with severe mosaic symptom. Restriction mapping analysis of RT-PCR products using MspI showed that Li-CMV belonged to CMV subgroup I. A full-length CDNA copy of RNA3 for the virus was amplified by RT-PCR, cloned, and its complete nucleotide sequence was determined. The RNA3 of Li-CMV was 2, 232 nucleotides long, and consisted of two open reading frames of 843 and 657 bases encoding 3a protein (movement protein) and coat protein, respectively. Results of this study indicate that Li-CMV is a novel strain and belongs to subgroup I of CMV in the genus Cucumovirus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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