Purpose: To investigate the effects of simultaneous soft and hard tissue augmentation and the addition of polydeoxyribonucleotide (PDRN) on regenerative outcomes. Materials and Methods: In five mongrel dogs, chronic ridge defects were established in both mandibles. Six implants were placed in the mandible, producing buccal dehiscence defects. The implants were randomly allocated to one of the following groups: 1) control: no treatment; 2) GBR: guided bone regeneration (GBR) only; 3) GBR/PDRN: GBR+PDRN application to bone substitute particles; 4) GBR/CTG: GBR+connective tissue grafting (CTG); 5) GBR/VCMX: GBR+soft tissue augmentation using volume stable collagen matrix (VCMX); and 6) group GBR/VCMX/PDRN: GBR+VCMX soaked with PDRN. The healing abutments were connected to the implants to provide additional room for tissue regeneration. Submerged healing was achieved. The animals were euthanized after four months. Histological and histomorphometric analyses were then performed. Results: Healing abutments were gradually exposed during the healing period. Histologically, minimal new bone formation was observed in the dehiscence defects. No specific differences were found between the groups regarding collagen fiber orientation and density in the augmented area. No traces of CTG or VCMX were detected. Histomorphometrically, the mean tissue thickness was greater in the control group than in the other groups above the implant shoulder (IS). Below the IS level, the CTG and PDRN groups exhibited more favorable tissue thickness than the other groups. Conclusion: Failure of submerged healing after tissue augmentation deteriorated the tissue contour. PDRN appears to have a positive effect on soft tissues.
Water transport in highly-permeable membranes is facilitated by some specialized pathways, which are called aquaporins (AQP). AQP1 (AQP-CHIP) is the first recognized aquaporin identified from red cells and renal proximal tubules. Up until now 4 other aquaporin homologs have been reported. Each aquaporin has its unique tissue distribution and regulatory mechanims. To elucidate molecular mechanisms for their transcription regulation and tissue-specific expression isolation of aquaporin genes is required. To clone promoters of the AQP family mouse genomic library was screened by the 1st exon-specific probe of AQP4, and 5 different plaques were positively hybridized. Phage DNAs were purified and characterized by restriction mapping and sequencing. One of them is the mouse AQP-CD gene. The gene was consisted of 4 exons and the exon-intron boundaries of mouse AQP-CD gene were identified at identical positions in other related genes. The 5'-flanking region of AQP-CD gene contains one classic TATA box, a GATA consensus sequence, an E-box and a cyclic AMP-responsive element. The cloning of the mouse AQP-CD gene, of which product is expressed in the collecting duct and is responsible for antidiuresis by vasopressin, will contribute to understand the molecular mechanisms of tissue-specific expression and regulation of AQP-CD gene under various conditions.
Changes in the activity of alkaline phosphatase (ALP) isoenzymes and isoforms in human serum have a major diagnostic value, therefore the regulation of ALP activities is a valuable target for therapeutic interventions. To assess the pharmacological activity of retinoids, i.e., all-trans retinoic acid and 13-cis retinoic acid, their tissue-specific inhibitory effect on human serum ALP activity was elucidated by chemical inhibition methods, heat-sensitive inactivation, and wheat-germ lectin precipitation test. Retinoids showed significant inhibition of the total ALP activity in human serum at a concentration of 5 mM. All-trans retinoic acid (5 mM) and 13-cis retinoic acid (5 mM) inhibited ALP activities by up to 12% and 15%, respectively, compared to that by guanidine hydrochloride (200 mM). L-phenylalanine (100 mM) and urea (30 mM) had no further inhibitory effect on ALP activities in human serum pretreated with retinoids (5 mM). Retinoids significantly inhibited ALP activities by up to 20% compared with that of tetramisole (30 mM). The ALP activities in retinoid-pretreated serum remained unchanged after the heat inactivation process. These results suggest that retinoids are inhibitors of the intestinal ALP isoenzyme. Remarkably, retinoids revealed potent inhibitory activities against ALP in wheat-germ lectin precipitant serum, indicating that they also function as inhibitors of the bone ALP isoform. The results show that retinoids inhibit the specific tissue-derived human serum ALP activities, moreover, the inhibitory effect of retinoids against bone ALP activity suggests their clinical utility as monitoring and prevention of metastasis of bone cancer.
As a member of a subclass of immunophilins, it is controversial that FKBP38 acts an upstream regulator of mTOR signaling pathway, which control the process of cell-growth, proliferation and differentiation. In order to explore the relationship between FKBP38 and mTOR in the Cashmere goat (Capra hircus) cells, a full-length cDNA was cloned (GenBank accession number JF714970) and expression pattern was analyzed. The cloned FKBP38 gene is 1,248 bp in length, containing an open reading frame (ORF) from nucleotide 13 to 1,248 which encodes 411 amino acids, and 12 nucleotides in front of the initiation codon. The full cDNA sequence shares 98% identity with cattle, 94% with horse and 90% with human. The putative amino acid sequence shows the higher homology which is 98%, 97% and 94%, correspondingly. The bioinformatics analysis showed that FKBP38 contained a FKBP_C domain, two TPR domains and a TM domain. Psite analysis suggested that the ORF encoding protein contained a leucine-zipper pattern and a Prenyl group binding site (CAAX box). Tissue-specific expression analysis was performed by semi-quantitative RT-PCR and showed that the FKBP38 expression was detected in all the tested tissues and the highest level of mRNA accumulation was detected in testis, suggesting that FKBP38 plays an important role in goat cells.
Secondary prevention via earlier detection would afford the greatest chance for a cure in premalignant lesions. We investigated the exomic profiles of non-malignant and malignant changes in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) and the genomic blueprint of human papillomavirus (HPV)-driven carcinogenesis in oropharyngeal squamous cell carcinoma (OPSCC). Whole-exome (WES) and whole-genome (WGS) sequencing were performed on peripheral blood and adjacent non-tumor and tumor specimens obtained from eight Korean HNSCC patients from 2013 to 2015. Next-generation sequencing yielded an average coverage of $94.3{\times}$ for WES and $35.3{\times}$ for WGS. In comparative genomic analysis of non-tumor and tumor tissue pairs, we were unable to identify common cancer-associated early mutations and copy number alterations (CNA) except in one pair. Interestingly, in this case, we observed that non-tumor tonsillar crypts adjacent to HPV-positive OPSCC appeared normal under a microscope; however, this tissue also showed weak p16 expression. WGS revealed the infection and integration of high-risk type HPV16 in this tissue as well as in the matched tumor. Furthermore, WES identified shared and tumor-specific genomic alterations for this pair. Clonal analysis enabled us to infer the process by which this transitional crypt epithelium (TrCE) evolved into a tumor; this evolution was accompanied by the subsequent accumulation of genomic alterations, including an ERBB3 mutation and large-scale CNAs, such as 3q27-qter amplification and 9p deletion. We suggest that HPV16-driven OPSCC carcinogenesis is a stepwise evolutionary process that is consistent with a multistep carcinogenesis model. Our results highlight the carcinogenic changes driven by HPV16 infection and provide a basis for the secondary prevention of OPSCC.
One cervical cancer cell line, C9, carrying human papillomavirus type 18 (HPV18) genes that is one of the major etiologic concoviruses for cervical cancer was characterized. This cell line was further characterized for its capacity related to the epithelial cell proliferation, stratification and differentiation in reconstituted artificial epithelial tissue. The in vitro construction of three dimensional artificial cervical opithelial tissue has been engineered using C9 epithelial cancer cells, human foreskin fibroblasts and a matrix made of type I collagen by organotypic culture of epithelial cells. The morphology of paraffin embedded artificial tissue was examined by histochemical staining. The artificial epithelial tissues were well developed having multilayer. However, the tissue morphology was similar to the cervical tissus having displasia induced by HPV infection. The characteristics of the artificial tissues were examined by determinining the expression of specific marker proteins. In the C9 derived artificial tissues, the expression of EGF receptor, as epithelial proliferation marker proteins for stratum basale was observed up to the stratum spinosum. Another epithelial proliferation marker for stratum spinosum, cytokerations 5/6/18, were observed well over the stratum spinosum. For the differentiation markers, the expression of involucrin and filaggrin were observed while the terminal differentiation marker, cytokeratins 10/13 was not detected at all. Therefore the reconstituted artificial epithelial tissues expressed the same types of differentiation marker proteins that are expressed in normal human cervical epithelial tissues but lacked the final differentiation capacity representing characteristics of C9 cell line as a cancer tissue devived cell line. Expression of HPV18 E6 oncoprotein was also observed in this artifical cervical opithelial tissue though the intensity of the staining was weak. Thus this artificial epithelial tissue could be used as a useful model system to examine the relationship between HPV-induced cervical oncogenesis and epithelial cell differentiation.
Dentin, a major component of teeth, is formed by odontoblasts which produce the dentin matrix beneath the dental epithelium and induce the mineralization of dentin. To date, the biochemical properties of dentin matrix proteins have been well characterized, but upstream regulators of these proteins are not yet well known. Recently in this regard, several transcription factors have been identified as potential regulators of matrix proteins. Most transcription factors are generally involved in diverse biological processes and it is essential to identify those that are odontoblast-specific transactivators to further understand the process of dentin formation. We thus analyzed the expression pattern of dentin matrix proteins and the activities of established transactivators containing a Cre-locus. Expression analyses using in situ hybridization showed that dentin matrix proteins are sequentially expressed in differentiating odontoblasts, including type-I collagen, Dmp-1 and Dspp. The activities of the transactivators were evaluated using ${\beta}$-galactosidase following the generation of double transgenic mice with each transactivator and the ROSA26R reporter line. The ${\beta}$-galactosidase activity of each transactivator paralled the expression of the matrix proteins. These results thus showed that these transactivators could be utilized for odontoblastspecific conditional gene targeting. In addition, time- and tissue-specific conditional gene targeting might also be achieved using a combination of these transactivators. Odontoblast-specific conditional gene targeting with these transactivators will likely also provide new insights into the molecular mechanisms underlying dentin formation.
The brain is an organ that consists of various cell types. As our knowledge of the structure and function of the brain progresses, cell type-specific research is gaining importance. Together with advances in sequencing technology and bioinformatics, cell type-specific transcriptome studies are providing important insights into brain cell function. In this review, we discuss 3 different cell type-specific transcriptome analyses i.e., Laser Capture Microdissection (LCM), Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP)/RiboTag, and single cell RNA-Seq, that are widely used in the field of neuroscience. [BMB Reports 2015; 48(7): 388-394]
Argon laser used in this case report, is special in having two wavelength of 488, 514nm blue-green visible light spectrum. Blue light is used for composite resin polymerization and caries detection. Green light is used for soft tissue surgery and coagulation. Maximum absorption of this laser light occurs in red pigmentation such as hemoglobin. The argon laser may be well-suited for selective destruction of blood clots and hemangioma with minimal damage to adjacent tissues. Argon laser light penetrates tissue to the 1 mm depth, so its thermal intensity is lower than $CO_2$ laser light. Also, due to its short wavelength it can be focused in a small spot and even single gene can be excised by this laser and microscopy. After applicating argon laser to 4 patient for surgical procedure and to 1 patient for curing the composite resin, following results were obtained. 1. Improved visibility were gained due to hemostasis and no specific technique were needed according to easy recontouring of the tissue. 2. Ability to use by contact mode, tactile sense was superior but tissue dragability and accumulation of tissue on the tip needed sweeping motion. 3. Additive local anesthetic procedure was needed. 4. No suture and less curing time reduced chair time, this made argon laser available in pediatric dentistry.
Most orchids are propagated by tissue culture. To survey the viral infection of tissue cultured Orchids, total RNA was extracted from in vitro Cymbridium and Phalaenopsis spp. collected from companies producing tissue-cultured orchids, and RT-PCR analysis was conducted with primer pairs specific to Cymbidium mosaic virus (CymMV) and Odontoglossum ring spot virus(ORSV), which are infecting wide range of orchid genera. The bulb size of Cymbidium infected with CymMV and ORSV was compared with healthy one at 10 months after planting in vitro orchids in the glasshouse. The CymMV or ORSV infection in 97 Cymbidium and 55 Phalaenopsis plants was 84.5 and 89.1 %, respectively. Mixed infection was found in 52.6 and 47.3% of Cymbidium and Phalaenopsis tested, whereas virus-free orchids were 15.5 and 10.9%, respectively. The CymMV and ORSV reduced the bulb size by 2.7-50% depending on the cultivars of Cymbidium. The both viruses caused yellowing, mottle and mosaic with or without necrosis in 4 Cymbidium cultivars.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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