Pigments and thylakoid membrane proteins were investigated in wild type and PS I- mutants from Synechocystis sp. PCC6803 Comparing morphological features, B2 was less fluorescent than the other strains. The contents of chlorophyll a were propotional to the FNR activity in thylakoid membrane. The FNR activity of mutants was lower than that of wild type. In the result of pigments analysis, mutants had smaller cholophyll a than that of wild type. The major carotenoid was found to he $\beta$-caroene, but aeaxanthin was barely detected in thylakoid membrane of mutants. The polypeptide, 14.8kD was detected by electrophoresis in mutants. It was considered to be the modification of 15.4kD in wild type. Membrane polypeptides of 17.6 and 19.7kD were not detected in mutants. In the result of western blotting, subunit I was detected in all strains, but subunit II was barely detected in mutants. Subunit II was not detected in B2 at all. In view of the results so far achieved, the changes of contents of chlorophyll and zeaxanthin were affected by the defficiency or modification of functional domain in subunit I. Also the modification in subunit I affected the subunit II- binding site in PS I. As the result, efficiency of photosynthesis was decreased. Key words: Synechoystis sp. PCC6803, PS I - mutant, Photosynthetic efficiency, Pigment,Thylakoid membrane proteins, Subunit I, II.
담배(Nicotiana tabacum)와 까마중(Solanum migrum)의 솩간 원형질체 융합으로 유도된 켈러스를 재료로하여 캘러스의 전체 단백젤과 틸라코이드막 단백질의 양태변화를 중심으로 식물생장 조절물질과 단색광의 생리적 상호효과를 조사하였다. 여러 단색 광선을 캘러스에 조사하였을때, 적색 및 청색광이 캘러스의 전체 단백질과 킬라코이드막 단백질의 합성을 촉진하였으며 , NAA+$ extrm{GA}_3$ 와 NAA+BA의 조합구에서 캘러스의 전체 단백질과 틸라코이드막 댄백질의 축척이 활발히 일어났으며, NAA+$ extrm{GA}_3$처리구에서 더욱 효과적 이였다. NAA+$ extrm{GA}_3$ 처리구에 청색광, 적색광 및 근적외광을 제각각 처리하였을때 캘러스의 전체 단백질과 킬라코이드막 단백질의 합성은 적색광에 의하여 가장 촉진되었다. 따라서 적색광과 NAA+$ extrm{GA}_3$구의 동시처리가 캘러스의 전체 단백질 및 킬라코이드막 단백질의 합성을 상승적으로 촉진함을 보였다.
Environmental Sciences Bulletin of The Korean Environmental Sciences Society
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제4권2호
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pp.85-94
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2000
The effects of ozone on chloroplast development in barley seedlings during greening was investigated based on ultrastructural changes in the chloroplasts and band pattern changes in the chloroplast thylakoid membrane proteins. In this analysis of the chloroplast thylakoid membrane thylakoid protein band pattern by SDS-PAGE, none of the 24-hour greening bands included were clearer than the control. This means that the ozone treatment produced a dealy in chloroplast development and decreased the amount of thylakoid membrane proteins. LHC II chloroplast band of developing barley seedlings treated with 0.5 and 1.0 ppm ozone during the last 4 hours of the 24-hour greening period was weaker than the other bands. This result indicates that ozone affects the LHC II protein complex of the chloroplast thylakoid membrane. When investigating the ultastructural changes in ozone-treated chloroplast, the main site affected by 0.5 ppm ozone was the chloroplast grana, thereby explaining the delayed chloroplast development during the early phase of greening. In addition, there was also a structural change in the stromal grana of the ozone treated chloroplast during the middle phase of greening. The effects of ozone on the chloroplast of barley seedlings during the last phase of 48-hour greening were more functionally inhibiting than structural changes.
The response of Spirulina (Arthrospira) platensis to high salt stress was investigated by incubating the cells in light of moderate intensity in the presence of 0.8 M NaCl. NaCl caused a decrease in photosystem II (PSII) mediated oxygen evolution activity and increase in photosystem I (PSI) activity and the amount of P700. Similarly maximal efficiency of PSII (Fv/Fm) and variable fluorescence (Fv/Fo) were also declined in salt-stressed cells. Western blot analysis reveal that the inhibition in PSII activity is due to a 40% loss of a thylakoid membrane protein, known as D1, which is located in PSII reaction center. NaCl treatment of cells also resulted in the alterations of other thylakoid membrane proteins: most prominently, a dramatic diminishment of the 47-kDa chlorophyll protein (CP) and 94-kDa protein, and accumulation of a 17-kDa protein band were observed in SDS-PAGE. The changes in 47-kDa and 94-kDa proteins lead to the decreased energy transfer from light harvesting antenna to PSII, which was accompanied by alterations in the chlorophyll fluorescence emission spectra of whole cells and isolated thylakoids. Therefore we conclude that salt stress has various effects on photosynthetic electron transport activities due to the marked alterations in the composition of thylakoid membrane proteins.
Ultrastructural changes in Panax ginseng C. A. Meyer mesophyll chloroplasts and variation of thylakoid membrane protein in responce to the light intensity were studied in leaves of two-y-old plants exposed to two different light intensities under field coditions. The leaves were allowed to function for three months after emergence under two contrasting light conditions. The ginseng chloroplasts of 5% light were filled with highly stacked grana of condensely arrayed thylakoids, so that the stroma space was hardly observed. In contrast, chloroplasts from leaves at 100% sunlight had fewer thylakoid membranes and smaller grana stacks. The number of osmiophilic globules increased. Total Chl content and Chl b content were lower at 100% sunlight than 5% sunlight. The thylakoid membrane proteins in the leaves grown at 100% sunlight showed lower CPIa, LHCII and CP29 than those with 5% sunlight. This effect was most obvious for LHCII. Polypeptides showed major bands at 90, 64, 29-30, 22 and 14 kD, and minor bands at 59, 58, 54, 52, 49, 46, 44, 35, 23, 21 and 18-19 kD. All these bands were lower in intensity in the leaves exposed to 100% sunlight. Moreover, the bands at 58-59, 46-47 and 23 kD disappeared.
The formation of thylakoid membrane proteins and changes in the chloroplast ultrastructure of ginseng leaf were investigated as a function of time following the leaf emergence. The leaf chloroplast obtained just after the leaf emergence showed short rod-like thylakoids which were connected and arranged in 3~4 layers along the longitudinal axis of the chloroplast. The 10 DAE (days after emergence) chloroplast started to form grana structure. The typical grana structure was observed 17 DAE, and the grana was fully developed 28 DAE. The membrane proteins obtained from just after emerging leaf were separated into many minor bands indicating no CP-complex formation yet. LHC II was detected after 10 days. CP 47 and CP 43 were detected after 17 days. After 28 days, the PS I and PS II proteins were distinctly separated into CP 1, LHC II, CP 47, CP 43, CP 29, CP 27+24. Thus, the appearance of the light harvesting protein, LHC II, which was concentrated in grana stacks, was consis tent in time with the formation of grana stacks 17 DAE. Key words Chloroplast ultrastructure, grana, CP-complex, LHC II.
Spermine이 녹화중인 녹두자엽의 엽록소-단백질 복합체(CPs) 및 틸라코이드막 단백질의 변화에 미치는 효과를 조사하였다. 녹화가 진행됨에 따라 Cps형성이 촉진되었으며, 특히 광계의 엽록소-단백질(CP I)이 다량 추척되었다. 광수화 엽록소 단백질(LHCP)은 48시간의 초기 녹화과정에서 중요한 단백질로 나타났다.Spermine처리는 초기녹화과정에서 틸라코이드막의 CPs 축척에 효과적이었다. 색소체막 단백질은 녹화과정에서 많은 변화를 나타내었는데, 56kD단백질은 전 엽록체체서 다량 관찰되었꼬 24kD 단백질은 전 처리구에서 뚜렷한 증가를 보여주었다.Spermine처리에 의해 틸라코이드막 단백질 형성은 대조구에 비해 다소 증가되었다. 이러한 결과들로부터 spermine은 녹화과정에서 색소체의 발달과 색소체막의 안정화에 중요한 작용을 하는 것으로 생각된다.
Spermine이 녹화중인 녹두자엽의 엽록소-단백질 복합체(CPs) 및 틸라코이드막 단백질의 변화에 미치는 효과를 조사하였다. 녹화가 진행됨에 따라 Cps형성이 촉진되었으며, 특히 광계의 엽록소-단백질(CP I)이 다량 추척되었다. 광수화 엽록소 단백질(LHCP)은 48시간의 초기 녹화과정에서 중요한 단백질로 나타났다.Spermine처리는 초기녹화과정에서 틸라코이드막의 CPs 축척에 효과적이었다. 색소체막 단백질은 녹화과정에서 많은 변화를 나타내었는데, 56kD단백질은 전 엽록체체서 다량 관찰되었꼬 24kD 단백질은 전 처리구에서 뚜렷한 증가를 보여주었다.Spermine처리에 의해 틸라코이드막 단백질 형성은 대조구에 비해 다소 증가되었다. 이러한 결과들로부터 spermine은 녹화과정에서 색소체의 발달과 색소체막의 안정화에 중요한 작용을 하는 것으로 생각된다.
암배양을 통한 노쇠중인 밀 제1엽에서 지질의 과산화반응과 불용성 잎단백질의조성 및 엽록체 틸라코이드 막단백질 조성의 변화에 대한 BA의 효과가 조사되었다. 성숙한 밀 제1엽을 잘라내어 4일간의 암배양을 통한 노쇠유도실험에서 $10^{-5}\;M$ Benzyladenine(BA)은 노쇠중인 밀잎에서 엽록소 함량 및 수용성과 불용성 단백질 함량의 감소를 크게 억제시켰다. 특히, 단배질 함량 감소에 대한 BA의 억제효과는 수용성 보다는 불용성 단백질에 있어서 더욱 현저하였다. 또한, BA로 처리된 잎에서 지질의 과산화물인 MDA 함량의 증가가 억제되었다. 불용성 단백질에 대한 SDS-전기영동 결과 양적으로 현저한 57, 26 및 12 KD 단백질이 다른 소량의 단백질 무리와 함께 분리되었다. 대조구 잎에서의 불용성단백질 조성의 변화는 72시간의 암배양동안 57 KD와 12 KD 단백질이 현저하게 분해 소실되었으나 26 KD 단백질은 비교적 분해가 덜 일어났으며 BA 처리시 이들 단백질의 소실이 크게 억제되었다. 엽록체 틸라코이드막 단백질 조성의 경우, 각각 CF의 $\alpha,\;\beta$ subunits인 59 KD 단백질과 57 KD 단백질 및 LHCP 단백질인 26 KD 단백질을 포함하는 20개 정도의 단백질이 SDS-전기영동상에서 분리되었다. 72시간의 암배양 동안 대조구 엽록체에서 이들 단백질들이 급속히 분해 소실되었으나 BA로 처리된 엽록체의 경우 이들 단백질의 분해가 정량적으로 크게 억제되었다. 위의 결과들은 BA가 노쇠중인 밀잎에서 막지질의 과산화반응 억제를 통해 막단백질의 손실을 지연시키며 그로 인하여 엽록체 틸라코이드막을 포함한 세포막이 유지될 수 있음을 나타내었다.
Plastid proteomics are essential organelles present in virtually all cells in plants and green algae. Plastids are responsible for the synthesis and storage of key molecules required for the basic architecture and functions of plant cells. The proteome of plastid, and in particular of chloroplast, have received significant amounts of attention in recent years. Various fractionation and mass spectrometry (MS) techniques have been applied to catalogue the chloroplast proteome and its sub-organelles compartments. To better understanding the function of the lumenal sub-organelles within the thylakoid network, we have carried out a systematical analysis and identification of the lumenal proteins in the thylakoid of wheat by using Tricine-SDS-PAGE, and LTQ-ESI-FTICR mass spectrometry followed by SWISS-PROT database searching. We isolation and fractionation these membrane from fully developed wheat leaves using a combination of differential and gradient centrifugation couple to high speed ultra-centrifuge. After collecting all proteins to eliminate possible same proteins, we estimated that there are 407 different proteins including chloroplast, chloroplast stroma, lumenal, and thylakoid membrane proteins excluding 20 proteins, which were identified in nucleus, cytoplasm and mitochondria. A combination of these three programs (PSORT, TargetP, TMHMM, and TOPPRED) was found to provide a useful tool for evaluating chloroplast localization, transit peptide, transmembranes, and also could reveal possible alternative processing sites and dual targeting. Finally, we report also sub-cellular location specific protein interaction network using Cytoscape software, which provides further insight into the biochemical pathways of photosynthesis. The present work helps understanding photosynthesis process in wheat at the molecular level and provides a new overview of the biochemical machinery of the thylakoid in wheat.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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