T. sergenti 국내 분리주의 면역항원인 33 kDa의 piroplasm surface protein 유전자를 크로닝하였다. 크로닝된 T. sergenti의 33 kDa에 해당하는 유전자의 염기서열을 분석한 결과 총 869 bps의 염기와 283개의 아미노산을 확인하였다. 또 이들 분석결과를 일본주의 염기서열 및 아미노산 조성과 비교 분석하였던 바 각각 99.4. 98.9%의 homology를 나타내었으므로 두 주간의 p33 유전자는 거의 일치하는 것으로 판명되었다.
Bovine piroplasmosis caused by Theileria sergenti results in economic loss in the dairy industry. The majority of calves infected with T. sergenti in Korea harbor mixed populations with Buffeli, Chitose and Ikeda types. The T. sergenti types of the infected calves were examined to evaluate the effects of diminazene aceturate on their infection. To confirm the type of the T. sergenti infection, the allele-specific PCR was performed with the erythrocyte specimen from the 5 naturally infected calves. The dfferent allele-specific genes encoding the p32, p33 and 34, the immunodominant piroplasmin surface proteins, were amplified using the 3 sets of the oligonucleotide primers by PCR. The calves were treated with diminazene aceturate at the dose of 2mg/kg once intravenously and monitored for 12 months at one month intervals by the allele-specific PCR. Diminazene aceturate did not effect the Ikeda type infection. But diminazene aceturate effected the Chitose and Buffeli type infection reducing T. sergenti parasitemia. It is postulated that diminazene aceturate may effect the infection of the Chitose and Buffeli types, but not that of Ikeda type.
The fine structure of the inoculated Theileria sergenti on the splenectomized Korean native cattle was observed to delineate the morphological. characteristics with transmission and scanning electron microscope. The cattle was inoculated with 1.5ml cryopreserved stabilate ($5.63{\times}10^6/{\mu}l$, PE 3%). At peak parasitemia (40%), infected blood was collected, washed and then T sergenti was observed. Scanning electron micrograph of the erythrocytes infected with T sergenti appeared various irregular from involving specific swelling, and abnormal projections like acantocyte, echinocyte and knizocyte. Transmission electron microscopic studies of T sergenti showed that piroplasm possess intracytoplasmic food vacuole, rhoptries and tubule. Merozoite, $0.6{\sim}1.81{\mu}m$ to $0.4{\sim}1.21{\mu}m$ in length, surrounded by 10~15nm thickness of pellicula. which is surrounded by a single unit membrane. Various size of veil which was observed in stroma of erythrocytes infected with T sergenti, located at the proximate part of the merozoite. The merozoite multiplied by means of binary fission so that two and more oval-like merozoites in the stroma of infected erythrocyte could be observed.
The rate of 58 neonatal calves in infection of Theileria sergenti was investigated in random samples on the farms located in Kyunggi, Chonbuk districts of Korea. 1. The criteria used in veryfying infection with T. sergenti included the detection of parasites by giemsa stain and acridine orange stain in the blood smear slides. 2. Further evidence of current or previous exposure to T. sergenti was based on demonstration of T. sergenti specific antibody and antigen by the western immunoblot and the directed immunofluorescent antibody test in the peripherial blood of the calves. 3. The prevalence rates were 35%, 50% in Kyunggi, Chonbuk provinces respectively and the overall prevalence in all the farms was 43.2% by means of acridine orange stain. 4. The parasites that were observed in the peripherial blood of calves was showen surely by the western immunoblot to the characteristic 34KD antigen among the proteins of T. sergenti (Korean isolate). 5. And the antigen of the neonatal calves reacted at the very highest titer(1 : 2, 560) 6. These data highlight the significances of T. sergenti in the neonatal calf disease in Korea.
The life cycle of Theileria sergenti(T sergenti) in cattle, especially Korean native cattle, was not proved clearly. To find schizont stage in the life cycle of T sergenti in Korean cattle, T sergenti schizonts in the cells of parotid lymph nodes from 10 adult Korean cattle were examined. Lymphoid cells which were separated from these lymph nodes were cytocentrifuged to observe the parasites in the cells. T sergenti schizonts were detected in the cells of lymph nodes of 6 cattle out of them by IFA(Indirect Fluorescent Antibody) test and Giemsa stain. By peroxidase stain, the cells which contain schizonts were proved lymphoid cells. T sergenti schizonts identified by IFA test were able to be restained by Giemsa stain. Also, merozoites were observed in peripheral blood of the same 6 cattle that had schizonts, by giemsa stain, but not observed in the 4 cattle that had not been detected schizonts. As a part of life cycle of T sergenti, schizonts were observed in the lymphoid cells of Korean cattle.
A splenectomized 5-month-old calf was inoculated with cryopreserved Theileria sergenti infected blood originated from naturally infected Korean native cattle in Chonbuk district. At peak parasitemia (40.1%), blood was collected, washed, lysed and then the T sergenti merozoite was isolated by differential centrifugation. Antigenic profile of isolated T sergenti organism was analized by SDS-PAGE and western blotting techniques. Coomassie blue stained SDS-PAGE gel revealed at least twelve protein bands of approximately 14Kd, 28Kd, 30Kd, 34Kd, 36Kd, 38Kd, 41Kd, 56Kd, 66Kd, 72Kd, 97Kd and 116Kd in the merozoite homogenate. In western blot, although T sergenti antigen recognized by specific anti-T sergenti antibodies demonstrated 28Kd, 30Kd, 38Kd, 56Kd, 58Kd, 66Kd, 97Kd and 116Kd proteins. False positive reactions were also observed in normal bovine serum with T sergenti and normal erythrocytic antigens. Therefore, predominant proteins of T sergenti merozoite antigen were found to be 28Kd, 30Kd, and 41Kd proteins of molecular weights. On going studies we will analyze the relative importance of those antigens for immunity of T sergenti in Korean native cattle.
A group of benign Theileria species, which are often referred to as T. orientalis/T. buffeli/T. sergenti group, has low pathogenicity in cattle. Herein, we report on Theileria spp. in cattle on a farm from China. Based on phylogenetic analysis of the major piroplasm surface protein gene sequences, we detected 6 genotypes that were categorized as Types 1, 2, 3, 4, and 5 as well as an additional Type 9 genotype. The new epidemiological features of the T. orientalis/T. buffeli/T. sergenti parasites in China indicate a greater diversity in the genetics of these species than had been previously thought.
Jin-ho Park;Seung-ok Lee;Joon-seok Chae;Oh-deog Kwon;Joo-mook Lee
한국임상수의학회지
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제16권2호
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pp.328-331
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1999
Theileriosis에 대한 효율적인 예방대책을 마련하기 위한 일환으로 발현된 T. sergenti 재조합 항원단백질의 면역원성을 조사하였다. 먼저, E. coli 단백질 발현 vector인 pQE 32 plasmid vector를 이용하여 발현된 T. sergenti의 재조합 막표면단백질(KTs-MP)을 4개월령의 유우 송아지에 접종하였다. 그리고 접종된 송아지의 혈액변화상과 T. sergenti에 대한 항체가의 변화상을 분석한 결과, 재조합단백질의 접종에 의하여 항체가가 상승되는 것을 알 수 있었다. 그러나 재조합단백질의 접종만으로는 T. sergenti의 감염을 완전하게 예방하지는 못하였다.
To investigate the development of a subunit vaccine against theileriosis in cattle, the DNA fragments encoding piroplasm surface protein (p33) of Theileria sergenti of a Korean isolate were expressed in baculoviruses. The expressed p33 was characterized by indirect fluorescent antibody (IFA) and western blotting analysis. The expression of p33 was mainly detected on the surface of infected Sf21 cells by IFA. The immunoblotting analysis revealed the presence of a same molecular weight protein band of p33. The antigenicity of expressed polypeptide was further examined through the inoculation of a guinea pig. The sera of guinea pigs immunized with p33 expressed cell Iysate showed similar fluorescent antibody patterns and reacted with the same molecular weight protein of T. sergenti in immunoblotting analysis, thus indicating that this protein can be a promising candidate for a subunit vaccine in the future.
Theileria annulata, a protozoan parasite of cattle and domestic buffaloes, is transmitted by ticks of the genus Hyalomma, and causes a disease named Mediterranean or tropical theileriosis. In this research 50 cattle naturally infected with Theileria annulata were treated with the extract of the plant Peganum harmala. The treatment was continued for 5 days, the dose of the extract being 5 mg/kg per day. After the treatment, 39 cattle responded to the treatment and recovered, but 11 did not respond to the treatment and died. The recovery rate of animals treated with the extract of the plant Peganum harmala was 78%.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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