As a bioreactor, bird has proved to be most efficient system for producing useful therapeutic proteins. More than half of the egg white protein content derives from the ovalbumin gene with four other proteins(lysozyme, ovomucoid, ovomucin and conalbumin) present at levels of 50 milligrams or greater. And the naturally sterile egg also contains egg white protein at high concentration allowing for a long shelf life of recombinant protein without loss in activity. In spite of these advantages, transgenic procedures for the bird have lagged far behind because of its complex process of fertilized egg and developmental differences. Recently, a system to transplant mouse testis cells from a fertile donor male to the seminiferous tubules of an infertile recipient male has been developed. Spermatogenesis is generated from transplanted cells, and recipients are capable of transmitting the donor haplotype to progeny. After transplantation, primitive donor spermatogonia migrate to the basement membrane of recipient seminiferous tubules and begin proliferating. Eventually, these cells establish stable colonies with a characteristic appearance, which expands and produces differentiating germ cells, including mature spermatozoa. Thus, the transplanted cells self-renew and produce progeny that differentiate into fully functional spermatozoa. In this study, to develop an alternative system of germline chimera production that operates via the testes rather than through developing embryos, the spermatogonial stem cell techniques were applied. This system consisted of isolation and in vitro-culture of chicken testicular cells, transfer of in vitro-maintained cells into heterologous testes, production of germline chimeras and confirmation of germline transmission for evaluating production of heterologous, functional spermatozoa.
Glucocorticoids play a physiologic role in the adult male reproductive functions, modulating gonadal steroid synthesis and spermatogenesis, through the glucocorticoid receptor (GR). The expression of GR has been described in several key testicular cell types, including somatic cells and early germ cell populations. Nothing is known on GR in human spermatozoa. Herein, we explored the GR expression and its possible role in normal and testicular varicocele semen samples from volunteer donors. After semen parameter evaluation by macro- and microscopic analysis, samples were centrifuged; then spermatozoa and culture media were recovered for further investigations. By western blotting and immunofluorescence analyses we evidenced for the first time in spermatozoa the presence of GR-D3 isoform which was reduced in sperm from varicocele patients. By treating sperm with the synthetic glucocorticoid dexamethasone (DEXA), we found that survival, motility, capacitation, and acrosome reaction were increased in both healthy and varicocele samples. GR involvement in mediating DEXA effects, was confirmed by using the GR inhibitor mifepristone (M2F). Worthy, we also discovered that sperm secretes different cortisol amounts depending on its physio-pathological status, suggesting a defence mechanism to escape the immune system attach in the female genital tract thus maintaining the immune-privilege as in the testis. Collectively, our data suggests a role for glucocorticoids in determining semen quality and function, as well as in participating on sperm immune defensive mechanisms. The novelty of this study may be beneficial and needs to take into account in artificial insemination/drug discovery aimed to enhancing sperm quality.
Objective: The aim of this study was to investigate the morphological aspects of testicular tissue before and after freezing-thawing by light and transmission electron microscopy. Methods: Tissue biopsies were carried out on mouse testis for freezing. Samples in medium containing 20% glycerol were frozen by computer-controlled freezing program. The effect of freezing-thawing on the structural change of testicular tissues were examined by light and electron microscopy. Results: The freezing-thawing procedure had no significant effect on tubular diameter. However, it caused folding of the lamina propria, and notable damage to Sertoli cells, spermatogonia and spermatocytes. The cells were detached, desquamated from the basal lamina and had increased vacuolization. Round spermatids, elongated spermatids and spermatozoa were less affected, and most of them maintained their normal structure. Conclusions: The structure of spermatogonia, spermatocyte and basal compartments in seminiferous epithelium was significantly altered by freezing-thawing procedure of mouse testicular tissues. Thus, we need to develop a more reliable method for the cryopreservation of testicular tissues.
Objective: The purpose of this study was to evaluate outcome of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) using epididymal and testicular sperm in patients with azoospermia. Methods: From March, 1993 to May, 1999, a retrospective clinical analysis was done of a total of 140 cycles in 112 patients who underwent ICSI. Subjects were divided into three groups: ejaculated-ICSI group included 42 cycles in 34 patients with ejaculated sperm who underwent ICSI due to severe oligospermia and past history of failed or poor fertilization in the previous in vitro fertilization and embryo tranfer (IVF-ET) cycles, microsurgical epididymal sperm aspiration and intracytoplasmic sperm injection (MESA-ICSI) group included 50 cycles in 42 patients with congenital absence of the vas deferens (CAVD) or unreconstructable obstructive azoospermia and testicular sperm extraction and intracytoplasmic sperm injection (TESE-ICSI) group included 48 cycles in 36 patients with no spermatozoa which can be retrieved from epididymis or non-obstructive azoospermia. Results: Normal two-pronuclear fertilization rates were similar in three groups: 64.4% for ejaculated-ICSI group, 59.4% for MESA-ICSI group and 60.4% for TESE-ICSI group. The pregnancy rates were 26.2%, 26.0% and 25.0% respectively. There were no significant differences in the fertilization, cleavage, and clinical pregnancy rates among ICSI cycles using ejaculated, epididymal and testicular sperm. Conclusion: Epididymal and testicular sperm obtained in azoospermic patients can fertilize oocyte successfully and may lead to be similar fertilization rates and clinical pregnancy rates to ejaculated sperm.
Purpose : These studies were undertaken to evaluate the effects of Allii tuberosi Semen (ATS) on the spermatogenic abilities such as concentration, motility and morphological normality of sperm from the testis and the activities of sperm hyaluronidase, testicular peroxidase and testicular catalase. Materials and Methods : We used the 8-week-old mice and administered the 0.2 ml extract solution of ATS in the different concentration (0.1 mg/ml, 1 mg/ml, 10 mg/ml and 100 mg/ml) once a day for 60 days. The control group was administered the distilled water in the same way. After the administration of each extract solution, we examined the number of total, motile and normal sperm, the activities of sperm hyaluronidase, testicular peroxidase and testicular catalase. Also we observed the histological changes of isolated testis. And we compared to the testicular tissue especially seminiferous tubules between control and treated group by histochemical methods. Results : The concentration of total sperm, the motility and normality of spermatozoa were significantly increased in ATS groups, especially in 1 and 10 mg/ml groups, compared to control group. In the histological analysis of the testicular tissues, the enlargement of testicular lobe diameter and apparent vasculogenesis between testicular lobes were observed in the ATS groups compared to the control group, respectively. Also, the activity of hyaluronidase was significantly increased in the ATS groups compared to the control group. In the antioxidant activity analysis, the activity of testicular peroxidase was significantly increased in the ATS groups compared to the control group, especially in 1 mg/ ml group. The activity of testicular catalase was increased in ATS groups. Conclusion : This study shows that ATS has the beneficial effect on the concentration, morphology and motility of sperm, the activities of sperm hyaluronidase and testicular peroxidase. We can suggest that ATS extract solution be useful for the treatment of male sexual dysfunctions and infertility.
Purpose : These studies were undertaken to evaluate the effects of the administration of different concentrated Morindae officinalis Radix extract solution on the spermatogenic abilities such as concentration, motility and morphological normality of sperm from the testis and the activities of sperm hyaluronidase, testicular peroxidase and testicular catalase. Methods : We used the 2-month-old mice and administered the extract solution of Morindae officinalis Radix in the different concentration once a day for 60 days. The control group was administered the normal saline in the same way and duration. We examined the number of total, motile and normal sperm from the cauda epididymis, the activities of sperm hyaluronidase, testicular peroxidase and testicular catalase. Also we observed changes of isolated testis before and after administration of Morindae officinalis Radix extract solutions the mice. And we compared to the testicular tissue especially seminiferous tubules between control and treated group by histochemical methods. Results : The significant dose-dependent differences were observed in the concentration of total sperm, the motility and normality of spermatozoa of Morindae officinalis Radix extract solution administered groups compared to the control group, respectively. In the histological analysis of the testicular tissues, the enlargement of testicular lobe diameter and apparent vasculogenesis between testicular lobes were observed in the Morindae officinalis Radix extract solution administered groups compared to the control group, respectively. Also, the activity of hyaluronidase was significantly increased in the Morindae officinalis Radix extract solution administered groups compared to the control group. In the antioxidant activity analysis, the activity of testicular peroxidase was significantly increased in the Morindae officinalis Radix extract solution administered groups compared to the control group, respectively. Conclusion : This study shows that Morindae officinalis Radix has the beneficial effect on the concentration, morphology and motility of sperm, the activities of sperm hyaluronidase and testicular peroxidase. We can suggest that Morindae officinalis Radix extract solution be useful for the treatment of male sexual dysfunctions and infertility.
Objective: These studies were undertaken to evaluate the effects of the different administration duration of Morindae Radix extract solution on spermatogenic abilities such as concentration, motility and morphological normality of sperm from the testes and the activities of sperm hyaluronidase. Materials and Method: We used 8-week-old ICR mice and administered 0.3mg/g extract solution of Morindae Radix once a day for 30, 60, 90 and 120 days. The control group was administered normal saline in the same way and duration. We examined the number of total, motile and normal sperm from the cauda epididymis. We also compared the testicular tissue, especially seminiferous tubules, between the control and treated groups by histochemical methods. Finally, we observed the difference of sperm hyaluronidase activities between the control and treated groups. Results: Significant administration duration-dependent differences were observed in the concentration of total sperm, motility and normality of spermatozoa of the Morindae Radix extract solution administered groups compared to the control group. In the histological analysis of the testicular tissues, the enlargement of testicular lobe diameter and apparent vasculogenesis between testicular lobes were observed in the Morindae Radix extract solution administered groups compared to the control group. Also, the activity of hyaluronidase was significantly increased in the Morindae Radix extract solution administered groups compared to the control group. Conclusions: This study shows that the beneficial effect of Morindae Radix extract solution on the concentration, motility and morphology of sperm, the testicular tissues and the activities of sperm hyaluronidase increased the greater the duration the mice were administered it. We suggest that Morindae Radix may be useful for the treatment of male sexual dysfunction and infertility.
저서성 어류인 Cobitis striata의 정소는 좌우 한쌍의 가늘고 긴 촛대모양으로서 체벽에 매달려 있다. 또한 미성숙한 정소는 규칙적인 배열을 하는 많은 정소엽으로 구성되어 있으나 성숙된 정소에서 는 복잡한 망상구조(network)를 보였다. C. striata의 정자는 첨체가 없어 수중으로 배정되는 무첨체 수중형(anacrosomal aquasperm)이며, 구형의 핵을 갖는다. 중편은 길이가 약 $0.8{\mu}m$으로서 아주 짧았으며, ring모양의 미토콘드리아가 5~8개 존재하였다. 편모는 하나로서 전형적인 9+2구조를 보이며 돌기물(fin)이 없는 특징을 보였다.
Unstable changes in environmental temperature (during the dry season there are several times of rain) can damage the fish reproductive cycle, leading to inhibition of spawning activity. Low temperatures cause slow fish gonad maturation, while high temperatures cause delays in the spermatogenesis process of male fish. The ideal temperature range can increase fish testosterone (T) levels needed to maintain spermatogenesis and GH expression levels during sperm cell proliferation. The effect of temperature on the presence of exogenous GH (CgGH) in G5 transgenic mutiara catfish formed through broodstock breeding GH-transgenesis technology in previous research needs to be evaluated for testicular fertility, especially T levels and spermatozoa (Spz) density during fish gonad maturation. The results showed that the ideal temperature that increases T levels, Spz density and CgGH expression levels in G5 transgenic mutiara catfish is 24℃. Temperatures of 28℃ and 32℃ tended to reduce T levels and Spz density in both transgenic and nontransgenic catfish. Besides that, the sperm maturation stage (formation of Spz) was more dominantly induced by 24℃ compared to other temperature treatments. This indication shows that the maximum enzyme activity involved in T production to drive the spermatogenesis process is regulated at 24℃. As a consequence, the use of transgenic male fish broodstock (transgenesis-GH) and temperature regulation for male fish gonad maturation is more profitable in the range of 24℃-28℃.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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