국내 부존자원인 inulin을 이용하여 fructose syrup 또는 oligosacharide를 생산한는 효소를 발굴하기 위하여 전국적으로 토양 등 시료를 채취하여 inulinase 생성 미생물을 분리하였으며 inulinase 활성이 높은 96-1 균주를 동정한 결과 그람 양성균인 Arthrobacter protophormiae/ramosus인 것으로 잠정 동정되었다 Inulinase 생산을 위한 최적 배지는 무기염류 기초배지에 각 1%(w/v)의 inulin tryptone. $NH_4Cl$이 함유된 배지였으며 퇴적 발효조건은 $35^{\circ}C$초기 pH 7.5 통기량 1vvm 교반속도 200rpm이었다.
Wang, Liang;Liu, Qinghua;Du, Yangguang;Tang, Daoquan;Wise, Michael J.
한국미생물·생명공학회지
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제46권3호
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pp.194-200
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2018
Glycogen plays important roles in bacteria. Its structure and storage capability have received more attention recently because of the potential correlations with environmental durability and pathogenicity. However, the low level of intracellular glycogen makes extraction and structure characterization difficult, inhibiting functional studies. Bacteria grown in regular media such as lysogeny broth and tryptic soy broth do no accumulate large amounts of glycogen. Comparative analyses of bacterial media reported in literature for glycogen-related studies revealed that there was no consistency in the recipes reported. Escherichia coli $DH5{\alpha}$ is a convenient model organism for gene manipulation studies with respect to glycogen. Additionally, M9 minimal salts medium is widely used to improve glycogen accumulation, although its composition varies. In this study, we optimized the M9 medium by adjusting the concentrations of itrogen source, tryptone, carbon source, and glucose, in order to achieve a balance between the growth rate and glycogen accumulation. Our result showed that $1{\times}M9$ minimal salts medium containing 0.4% tryptone and 0.8% glucose was a well-balanced nutrient source for enhancing the growth and glycogen storage in bacteria. This result will help future investigations related to bacterial physiology in terms of glycogen function.
Ferulic acid esterase (FAE) and acetyl esterase (AE) cleave feruloyl groups substituted at the 5'-OH group of arabinosyl residues and acetyl groups substituted at O-2/O-3 of the xylan backbone, respectively, of arabinoxylans in the cell wall of grasses. In this study, the enzyme profiles of FAE, AE and polysaccharide hydrolases of the anaerobic rumen fungus Neocallimastix sp. YQ1 grown on Chinese wildrye grass hay (CW) or alfalfa hay (AH) were investigated by two $2{\times}4$ factorial experiments, each in 10-day pure cultures. The treatments consisted of two glucose levels ($G^+$: glucose at 1.0 g/L, $G^-$: no glucose) and four N sources (N1: 1.0 g/L yeast extract, 1.0 g/L tryptone and 0.5 g/L $(NH_4)_2SO_4$; N2: 2.8 g/L yeast extract and 0.5 g/L $(NH_4)_2SO_4$; N3: 1.6 g/L tryptone and 0.5 g/L $(NH_4)_2SO_4$; N4: 1.4 g/L tryptone and 1.7 g/L yeast extract) in defined media. The optimal combinations of glucose level and N source for the fungus on CW, instead of AH, were $G^-N4$ and $G^-N3$ for maximum production of FAE and AE, respectively. Xylanase activity peaked on day 4 and day 6 for the fungus grown on CW and AH, respectively. The activities of esterases were positively correlated with those of xylanase and carboxymethyl cellulase. The fungus grown on CW exhibited a greater volatile fatty acid production than on AH with a greater release of ferulic acid from plant cell wall.
Bacillus subtilis WB700에서 P43 프로모터를 사용하여 staphylokinase를 생산하기 위하여 배지 최적화 및 회분식 배양과 유가식 배양 두가지 시스템을 비교하였다. 여러 가지 질소윈 중에서는 tryptone이 가장 좋은 질소원 이었으며, MSR 배지를 사용한 경우 tryptone 15 g/L일 경우에 최적조건임을 알아내었다. MSR 배지에시 포도당을 제한 기질로 사용할 경우는 5 g/L일 때가 SAK의 발현에 최적 조건이었다. MSR 배지를 기본으로 이용하여 포도당 공급을 조절함으로서 발효조 내의 DO를 30%로 유지한 결과 오히려 MSR 배지를 이용하여 회분식 발효를 한 경우보다 좋지 못한 결과를 얻었으며, 이는 B. subtilis 숙주의 영양요구적 특이성과 P43 promoter의 stress 발생시 주 발현되는 특성 등에 기인한 것이라고 사료된다. MSR 배지를 이용하여 회분식 발효를 하였을 때 SAK 활성은 2880 unit이었고, 이때 배지 내로 분비된 SAK 농도는 455 mg/L이었다.
Coenzyme $Q_{10}$ 고역가 변이주인 Agrobacterium tumefaciens KPU-11-03의 다양한 유기 질소원에 대한 coenzyme $Q_{10}$ 생산량과 coenzyme $Q_{10}$의 구성비율 등을 비교한 결과, CSP 첨가 시 coenzyme $Q_{10}$ 생산량은 212.7 mg/l, 구성비율은 94%로 다른 유기질소원에 비해 매우 높게 나타났다. 특히 Bacto tryptone, Bacto peptone, soybean meal, casamino acid 등의 유기 질소원 첨가 시에는 극히 낮은 coenzyme $Q_{10}$ 역가를 나타내어 균체내의 coenzyme $Q_{10}$의 축적은 유기 질소원의 종류 즉 아미노산의 종류 및 량과 상관성이 있음을 추정할 수 있었다. 또한 무기질소원에 대하여 실험한 결과, $(NH_4)_2SO_4$ 첨가 시에 coenzyme $Q_{10}$역가가 약 2배 증가하였고 다른 무기질소원에 사용 시에는 오히려 감소하였다. Coenzyme $Q_{10}$ 역가와 관련된 아미노산을 확인하기 위해 유기질소원으로 Bacto tryptone을 첨가한 배지에 9가지의 아미노산을 첨가하여 실혐한 결과, 방향족 아미노산인 tyrosine 첨가 시의 coenzyme $Q_{10}$ 생산량은 99.5 mg/l로 비첨가구보다 약 8.2배 증가하였으나 phenylalanine과 tryptophan등의 다른 방향족 아미노산의 첨가 시에는 coenzyme $Q_{10}$ 생산량이 오히려 감소하는 것으로 나타나 tyrosine의 첨가가 coenzyme $Q_{10}$ 역가에 매우 중요함을 확인하였다.
순창군에서 제조된 전통 장류로부터 612종의 다양한 미생물을 분리하였고, 612종의 미생물 중에서 생리활성 분석 및 biogenic amine 생성여부를 조사하여 최종적으로 Bacillus subtilis SCJ4를 선별하였다. 최종 선별한 균주 SCJ4의 생화학적 특성과 16S rRNA 염기서열 분석에 의해 B. subtilis SCJ4로 명명하였으며, B. subtilis SCJ4의 산업적으로 사용이 적합한 최적배지조성을 확립하기 위하여 통계학적 방법인 반응표면 분석법을 사용하였다. 실험계획법은 배지조성을 예측하기 위해 Plackett-Burman design을 사용하여 모델을 설정하였다. 실험 모델을 통하여 선별된 배지 조성으로는 tryptone, peptone, $MgSO_4$로 예측되었으며, 배지조성에 대한 농도를 설정하기 위해 중심합성계획법을 사용하여 최적화를 수행하였다. 최종 예측된 배지 조성의 농도는 tryptone 15.35 g/L, peptone 12.235 g/L, $MgSO_4$ 3.5 g/L로 예측되었다. 이때 최대 균체량은 1.07497 g/L로 예측되었으며, 모델의 검증실험을 통하여 예측된 모델과 실제 결과가 동일함을 확인하였으며, 기본배양배지와 비교하였을 때 균체량이 0.8767 g/L에서 1.1222 g/L으로 약 28%증가하였다.
차나무 겹퉁근무늬병을 일으키는 Pestalotiopsis longiseta에 대하여 강력한 길항능력을 나타내는 Bacillus subtilis BD0310 균주의 대량배양을 위한 배양조건과 P. longiseta에 대한 항균활성을 증대시킬 수 있는 탄소원과 질소원을 선발하였다. B. subtilis BD0310 균주를 대량배양하기 위한 최적온도 및 시간은 $30^{\circ}C$, 24 시간인 것으로 확인되었으며, 초기 최적 pH 는 7 로 확인되었다. B. subtilis BD03l0 균주를 대량으로 배양할 경우 P. longiseta에 대한 항균활성을 가장 높게 증가시키는 탄소원을 선발하기 위하여 fructose, galactose, glucose, glycerol, inositol, lactose, maltose, sorbitol, starch 등 9 가지 탄소원을 사용하여 조사한 결과 maltose와 inositol이 가장 효율적인 탄소원으로 선발되었으며, casein, tryptone, malt extract, yeast extract, $(NH_4)_2SO_4$등 5 가지 질소원 중에서 yeast extract와 tryptone이 가장 효율적인 질소원으로 선발되었다. 이러 한 결과들은 길항세균 B. subtilis BD0310를 차나무 겹둥근무늬병 방제용 미생물제제로 개발하기 위한 대량배양생산 공정을 확립하는데 기여할 것으로 전망된다.
Bacillus subtilis의 생육 억제에 미치는 보존료의 병용효과 및 식염과의 상승효과를 조사하기 위하여 tryptone glucose-yeast extract 액체배지에 potassium sorbate와 sodiun bnzoate를 각각 최고허용농도의 1/2인 0.1%, 0.03%로 처리하고 이에 미생물의 내염성 기준도인 2% 식염을 첨가하여 진탕배양(4시간) 또는 정치배양 (4일)하면서 생육 상태를 조사한 결과, 두 보존료의 상승효과가 정치 및 진탕배양에서 모두 나타나지 않았으나 potassium sorbate와 식염의 병용처리구에서는 상승효과가 현저하게 나타났다.
Production of the antioxidant substances by Bacillus polyfermenticus SCD was investigated using shake-flask fermentation. The one-factor-at-a-time method was first employed to determine the key ingredients for optimal medium composition, then further investigation of the medium composition was performed using response surface methodology (RSM). The antioxidant activity was measured using 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl-hydrate (DPPH) assays. After screening various elements, fructose, tryptone, and $MgSO_4\;7H_2O$ were chosen as the main factors for study in the statistical experimental design. Central composite design (CCD) was then used to determine the optimal concentrations of these 3 components. Under the proposed optimized medium containing 2.8% fructose, 1.34% tryptone, 0.015% $MgSO_4\;7H_2O$), 0.5% NaCl, and 0.25% $K_2HPO_4$, the model predicted an antioxidant activity of 80.5% ($R^2=0.9421$. The actual experimental results were in agreement with the prediction.
Streptomyces tuberaidicus 의 원형질체 생성, 생성된 원형질체의 정상 균사체료의 환원 그리고 원형질체 융합에 대하여 조 사하였다. 또한 균사체로부터 원형질체가 생성되는 과정을 주사전자현미경을 사용하여 관찰하였다. 원형칠체는 슐샤의 끝부위 에서 뿐만 아니라 균샤 말단의 부풀어오른 부위 그리고 균사의 중간 부위에서도 생성이되는 세 종류의 원형질체 생성양을 보였다. 원형질체의 정상균사체로의 환원률은 tryptone-yeast extract-sodium acetate-$MgCl_2-CaCl_2$-sucrose로 조성된 배 지에서 대략 17%이었으며, 이때 $Ca^{++},\;Mg^{++}$ soccrose의 농도가 각각 50mM, 5mM, 0.4-0.SM일때 최척의 환원률을 보였다. S. tµberaidicµs의 histidine과 adenine을 요구하는 두 균주의 원형질서l간의 융합에서 30% 이상의 융합빈도플 얻
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[게시일 2004년 10월 1일]
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