The anti-Ex-A IgG was specifically labeled with stable isotopes, DL-His-2,4-$d_2$, L-Phe-$d_5$, L-Trp-$d_5$, L-Tyr-2,6-$d_2$ and L-[1-$^{13}C$]Trp, by growing hybridoma cell in serum-free medium. By use of NMR spectroscopy with selectively labeled Fab fragment, we applied a paratope mapping on antigen-antibody complex. Assignments of the observed carbonyl carbon resonances have been determined by using $^{13}C$-$^{15}N$ double labeling method in order to assign the Trp resonances. Photo CIDNP was also applied to investigate the antigen-binding site(s) on the surface residues of antibody. We found that Trp 36, which is located at the $V_H$ domain, is an important residue to bind to Ex-A, however, two Tyr on the surface of anti-Ex-A IgG plays no crucial role to bind to antigen. On the basis of these results, we demonstrate that stable isotope-aided NMR strategy can be extended to molecular structural analyses of the complex of an Fab fragment and a protein antigen.
Acquired pigmentary skin diseases such as abnormal melanogenesis, vitiligo, chloasma and inflammatory pigmentation are related to regulate the melanin production, In this study, an ethanol extract of Hovenia dulcis Thunb.(EHD) makedly inhibited melanin biosynthesis and suppressed, the protein expression of tyrosinase, tyrosinase-related protein 1(TRP-1), and tyrosinase-related protein 2(TRP-2) in B16F10 cells. On the other hand, EHD did not inhibit mushroom tyrosinase activity. These results indicate that EHD may contribute to the inhibition of melanin biosynthesis through regulating tyrosinase activity and expression, and serve as a new candidate in the design of new skin-whitening or therapeutic agents.
The purpose of this study was to investigate the mechanism of ethanol extract of Agrimonia pilosa Ledeb. (EAP)-reduced melanogenesis and diphenyl-picryl-hydrazyl (DPPH) radical scavenging activity. Agrimonia pilosa Ledeb., a perennial herbaceous plant, has been used as an antihemorrhagic, anthelminntic, and antiinflammatory agents in Chinese herbal medicine. In the present study, we observed that melanin synthesis and tyrosinase activity of B16F10 cells were significantly decreased by EAP. However, EAP could not suppress tyrosinase activity in the cell-free system, whereas kojic acid directly inhibited tyrosinase activity. Furthermore, EAP decreased the protein expression of tyrosinase, tyrosinase-related prootein 1 (TRP-1), and tyrosinase-related prootein 2 (TRP-2). EAP scavenged DPPH radical up to 41% with 100 ${\mu}g/m{\ell}$ concentration. These results suggest that the hypopigmentary effect of EPA was due to regulation of tyrosinase protein.
Many insects such as mosquitoes cause life-threatening diseases such as malaria, yellow fever and West Nile virus. Malaria alone infects 500 million people annually and causes 1-3 million death per year. Volatile insect repellents, which are detected through the sense of smell, have long been used to protect humans against insect pests. Antifeed-ants are non-volatile aversive compounds that are detected through the sense of taste and prevent insects from feeding on plants. The molecular targets and signaling path-ways required for sensing insect repellents and antifeedants are poorly understood. Transient Receptor Potential (TRP) Ca2+-permeable cation channels exist in organisms ranging from C. elegans to D. melanogaster and Homo sapiens. Drosophila has 13 family members, which mainly function in sensory physiology such as vision, thermotaxis and chemotaxis. G protein-coupled receptors (GPCRs) initiate olfactory signaling cascades in mammals and in nematodes C.elegans. However, the mechanisms of G protein signaling cascades in insect chemosensation are controversial. In this review, I will discuss the putative roles of G protein-coupled receptors (GPCRs) and Transient Receptor Potential (TRP) channels as targets for insect repellents.
The regulation of 3 ammonia assimilatory enzymes GDH(glutamate dehydrogenase), GS(glutamine synthetase) and GOGAT (glutamate synthase), have been examined in C. glutamicum for the biosynthesis of glutamate and glutmine. The cell free extracts of 3 kinds of arg, his and trp auxotrophs were investigated the activities of -ketoglutarate dehydrogenase, GDH, GS, and GOGAT on the media cultured with nitrogen excess and limiting conditions. Trp and his howed higher level of glutamate and glutamine than that of parental strain. The inhibition of GS activities by ADP suggested that GS is regulated by energy charge in C. glutamicum. The results with his, trp, glyc, ala, ser, and GMP implied that a system of feedback inhibition were effective. Three enzyme biosynthesis is repressed by nitrogen sources such as trp, pro, glyc, ala, ser and tyrosine.
모발의 색은 melanin의 종류와 양에 의해 결정 된다. Melanocyte는 주로 자외선 자극에 의하여 L-tyrosine으로부터 멜라닌을 합성한다. 활성산소종은 백발의 진행과정에 중요한 역할을 하고 있다. 적하수오는 백발화되는 노화과정을 억제한다고 보고되고 있다. 본 연구의 목적은 흑모발생과 연관된 melanin 합성에 대한 적하수오 에탄올 추출물(PMEE)의 효능을 조사한 것이다. 항산화 실험에서 PMEE는 DPPH radical을 감소시켰고 환원력을 증가시켜 PMEE는 백발과정에 관여하는 활성산소종을 소거할 수 있다고 볼 수 있다. PMEE는 농도 의존적으로 세포생존능을 감소시켰다. 더욱이 melanin의 생성에 대한 PMEE의 효과는 DOPA assay와 tyrosinase 활성측정에 의하여 결정되었다. PMEE는 tyrosinase 활성을 증가시켰으며 melanin 합성을 촉진시켰다. 뿐만 아니라 Western blot 분석을 이용하여 tyrosinase, TRP-1, TRP-2 및 MITF 뿐만 아니라 SOD-3와 catalase와 같은 항산화 효소의 단백질 발현을 조사하였다. PMEE의 항산화 활성의 증가로 인하여 SOD-3와 catalase의 발현 수준은 감소된 것으로 나타났다. 특히, PMEE는 tyrosinase와 TRP-2의 발현 수준은 증가시켰다. 이러한 결과들은 PMEE가 백발화 된 모발에서 흑발로 변하는 것과 관련된 melanin 합성을 촉진할 수 있다는 것을 암시하고 있다.
식품의 안전성 평가를 위한 기초자료를 얻기 위하여, 식품의 가공, 저장 및 조리중에 식품성분간의 상호반응인 Maillard 반응을 이용하여 당의 분해로 생성되는 각종 카르보닐화합물을 강력한 돌연변이원성물질로 알려진 Trp-P-1, Trp-P-2, Glu-P-1, Glu-P-2 및 IQ에 각각 작용시켜서 이들 물질의 돌연변이성 억제효과를 연구 검토하였다. 그 결과, 카르보닐화합물에 의하여 돌연변이원성물질의 돌연변이원 활성이 크게 억제되었다. 사용한 카르보닐화합물중 ${\alpha}$-hydroxycarbonyl 화합물의 경우, glyceraldehyde, glycolaldehyde 및 dihydroxyacetone에서 돌연변이원성 억제효과가 크게 나타났다. ${\alpha}$-dicarbonyl 화합물의 경우, diacetyl에서 그 억제효과가 우수한 것으로 나타서, 전반적으로 ${\alpha}$-dicarbonyl 화합물이 ${\alpha}$-hydroxycarbonyl 화합물보다 돌연변이성 억제효과가 높게 나타났다. 한편, 공시한 카르보닐화합물 단독으로는 돌연변이 성을 나타내었으나, Trp-P-1등의 돌연변이원성물질과의 상호반응로 이들 두 물질의 돌연변이성이 동시에 소실되는 것이 입증되었다.
멜라닌 생합성을 활성화하여 자연스러운 모발의 흑화를 촉진할 수 있는 소재를 개발하기 위하여 음양곽 메탄올 추출물의 멜라닌 생성에 연관된 생리 활성을 분석하였다. 음양곽 추출물은 $100\;{\mu}g/mL$ 이하에서 세포 독성이 없는 것으로 확인 되었으며 $50\;{\mu}g/mL$ 농도에서 B16 melanoma 세포 내 멜라닌 생합성을 104 % 증가시켰고 tyrosinase의 활성을 95 % 촉진하는 것으로 나타났다. Western blot을 이용한 실험에서는 음양곽 추출물이 농도 의존적으로 TRP-2의 발현을 증가시키는 경향을 관찰할 수 있었다. 또한 C3H/Hej 마우스를 이용한 동물 실험에서 음양곽 추출물을 도포한 등 부위 털의 멜라닌 생합성이 5 % (w/v) 도포 시 25 % 증가되는 경향을 관찰할 수 있었다. 위의 결과를 통해 음양곽 메탄올 추출물이 멜라닌 생합성 기전에 관여하는 것으로 알려진 tyrosinase의 활성 촉진, 멜라닌 생합성 기전과 melanocyte 생존에 관여하는 것으로 알려진 TRP-2의 발현 증가를 통해 멜라닌 합성 촉진을 유도하는 것으로 추측해 볼 수 있었다. 이러한 음양곽 추출물의 효능을 이용해 모발의 흑화 촉진 효과를 나타내는 화장품 소재 개발이 가능할 것으로 보인다.
Purpose: This study was performed to elucidate the inhibitory effect of Yukmijihwangtanghapyijihwangagambang (YM) on melanin synthesis in B16F10 melanoma cells. Methods: To demonstrate the inhibitory effects of YM on melanin synthesis, we measured the amount of released and produced melanin in B16F10 melanoma call. Also, we evaluated tyrosinase-activity in vitro as well as in B16F10 melanoma call. And to investigate the action mechanism, we assessed the gene expression of tyrosinase, TRP-1, TRP-2, PKA, $PKC{\beta}$, ERK-1 ERK-2, AKT-1 and MITF in B16F10 melanoma call. Results: 1. YM decreased the release and production of melanin in B16F10 melanoma cells. 2. YM decreased tyrosinase activity in vitro and in B16F10 melanoma cells. 3. YM decreased the expression of tyrosinase, TRP-1, TRP-2 in B16F10 melanoma cells. 4. YM decreased the expression of PKA, $PKC{\beta}$ in B16F10 melanoma cells. 5. YM increased the expression of ERK-1, ERK-2 and AKT-1 in B16F10 melanoma cells. 6. YM decreased the expression of MITF in B16F10 melanoma cells. Conclusion: From these results, it may be concluded that YM has antimelanogenetic effects.
멜라닌세포는 신경능에서 기원한 세포로서 멜라닌을 생성하여 피부를 자외선으로부터 보호하는 중요한 기능을 수행하고 있다. 멜라닌세포는 수지상 돌기를 갖는 등 신경세포와 형태학적으로 유사하며 많은 신호 전달 물질, 성장 인자 등에 대한 수용체를 공통적으로 갖고 있어 발생학적 기원이 신경 세포와 같음을 보여주는 많은 특징들이 있다. 멜라닌세포는 자외선, 염증 등의 외부조건, alpha-MSH 등의 호르몬, IL-1, TNF-alpha, GM-CSF 등 의 싸이토카인, leukotriene 등 여러 가지 인자의 영향을 받고 있다. 또한 멜라닌세포로부터 멜라닌이 생성되기 위해서는 tyrosinase, TRP-1, TRP-2 등 여러 가지 유전자와 그에 해당하는 효소들의 작용, 또한 멜라닌이 각질형성세포로 이동하는 과정에 역시 여러 종류 의 유전자가 관여하고 있어 피부의 색소형성 과정을 이해하기 위해서는 이러한 과정을 복합적으로 이해하여야 한다(그림 1). 그러나 아직까지 멜라닌세포의 멜라닌 형성 과정과 증식, 사망 과정이 정확히 어떻게 진행되는지에 대한 연구가 부족한 실정이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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