• 한국임상수의학회지
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• 제37권2호
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• pp.61-66
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• 2020

Nickel is a nutritionally essential trace element that plays an important role in the immune system of several animal species. The aim of this study was to examine the effect of nickel chloride on chemotactic activity of peripheral blood polymorphonuclear cells (PMNs) and whether this effect is associated with interleukin (IL)-8 and a nuclear factor-kappa B (NF-κB)-dependent pathway. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and PMNs were isolated by Percoll solution (Specific gravity; 1.080) and 1.5% dextran treatment, respectively. A modified Boyden chamber assay was used to measure the chemotactic activity of PMNs. The level of IL-8 in culture supernatant from PBMCs was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Both of PBMCs and PMNs exhibited a low viability when cultured with concentration of greater than 1,000 μM of nickel chloride for 24 h. Thus, nickel chloride was used at concentration of 500 μM, which preserved cell viability. Treatment with nickel did not directly affect the chemotactic activity of PMNs. However, the chemotactic activity of PMNs was remarkably increased by culture supernatant from PBMCs treated with nickel chloride (500 μM) for 24 h. Recombinant porcine IL-8 polyclonal antibody (pAb) neutralized the enhancing effect on the chemotactic activity of PMNs by culture supernatant from PBMCs treated with nickel and this culture supernatant had higher IL-8 levels than the culture supernatant from untreated PBMCs. In addition, n-tosyll-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK), a NF-κB inhibitor, antagonized the enhancing effect on the chemotactic activity of PMNs by the culture supernatant from PBMCs treated with nickel. These results suggested that nickel stimulates porcine PBMCs to produce IL-8, which increases the chemotaxis of PMNs via NF-κB-dependent pathway.

• BMB Reports
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• 제37권2호
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• pp.199-205
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• 2004

The six lumbrokinase fractions (F1 to F6) with fibrinolytic activities were purified from earthworm Lumbricus rubellus lysates using the procedures of autolysis, ammonium sulfate fractionation, and column chromatography. The proteolytic activities on the casein substrate of the six iso-enzymes ranged from 11.3 to 167.5 unit/mg with the rank activity orders of F2 > F1 > F5 > F6 > F3 > F4. The fibrinolytic activities of the six fractions on the fibrin plates ranged from 20.8 to 207.2 unit/mg with rank orders of F6 > F2 > F5 > F3 > F1 > F4. The molecular weights of each iso-enzyme, as estimated by SDS-PAGE, were 24.6 (F1), 26.8 (F2), 28.2 (F3), 25.4 (F4), 33.1 (F5), and 33.0 kDa (F6), respectively. The plasminogen was activated into plasmin by the enzymes. The optimal temperature of the six iso-enzymes was $50^{\circ}C$, and the optimal pH ranged from pH 4-12. The four iso-enzymes (F1-F4) were completely inhibited by PMSF. The two enzymes (F5 and F6) were completely inhibited by aprotinin, TLCK, TPCK, SBTI, LBTI, and leupeptin. The N-terminal amino acid (aa) sequences of the first 20 to 22 residues of each fraction had high homology. All six isoenzymes had identical aa residues 2-3 and 13-15. The N-terminal 21-22 aa sequences of the F2, F3, and F4 isoenzymes were almost the same. The N-terminal aa sequences of F5 and F6 were identical.

• 한국식품과학회지
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• 제26권1호
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• pp.81-87
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• 1994

하늘타리박의 뿌리인 괄루근에서 분리 정제한 trypsin inhibitor는 TRTI-1과 TRTI-2 두 종류였으며 gel-filtration과 SDS-PAGE 전기영동에서 얻은 결과로부터 TRTI-1은 $4,000{\sim}5,000\;Da$의 분자량을 가진 monomer이며 TRTI-2는 $20,000{\sim}24,000\;Da$의 분자량을 가친 homodimer임을 알 수 있었다. 온도의 안정성에 있어서는 TRTI-1은 $100^{\circ}C$에서 2시간 이상 안정하였으며, TRTI-2는 $0{\sim}70^{\circ}C$의 온도에서는 안정하였으나 $80^{\circ}C$에서부터는 안정성이 떨어지면서 $100^{\circ}C$에서는 저해능이 완전히 소실되었다. Trypsin 활성에 대해서 TRTI-1, TRTI-2 및 상품화된 soybean BBI의 농도에 따른 저해능을 보면 TRTI-1, TRTI-2 및 soybean BBI의 각각의 농도가 $0.8{\mu}M,\;6{\mu}M,\;4{\mu}M$일 때 1mg/ml의 trypsin을 50% 저해하였으며, trypsin의 반응속도에 대한 TRTI의 저해 실험에서 TRTI-1와 TRTI-2 모두 trypsin의 가수분해를 경쟁적으로 저해하였으며 $K_{m}$값은 저해제가 없는 경우 $0.37\;{\mu}M$에 대해 각각 0.97, $0.63\;{\mu}M$이었다. 여러 protease에 대한 TRTI-1과 TRTI-2의 저해능 실험 결과 elastase, pepsin, Nagarase, papain, thermolysin, chymotrypsin, thrombin 및 collagenase 등은 저해하지 못하였고 trypsin만을 특이하게 저해하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제36권4호
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• pp.261-268
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• 1998

질편모충의 시스테인 단백분해효소가 숙주-기생충 관계에서 어떤 역할을 하는지 알아보기 위해 질편모충을 대량배양하여 초음파분쇄한 후 초원심분리하여 조추출물을 얻었고, activated Thiol-Sepharose 4B, Bacitracin Sepharose affinity chromatography, Sephacryl S-200 HR gel filtration 등을 이용하여 단백분해효소를 정제하였다. SDS-PAGE로 정제도를 확인하여 이들 효소의 생화학적 특성, 그리고 인체 면역글로불린 및 헤모글로빈 분해능을 관찰하였다. 정제된 단백분해효소는 0.1 M sodium phosphate (pH 6.0)에서 최적 활성을 나타내었으며, SDS-PAGE에서 분자량은 60 kDa이었고 gel filtration에서 native 분자량은 62 kDa이었다. 정제된 단백분해효소는 시스테인 계열 억제제인 E-64, IAA, NEM에 의해서 활성이 억제되었으며, 메탈로, 세린, 아스파틱 계열 억제제에 의해서는 활성이 억제되지 않았다. $Hg^{2+}$ 이온에 의해 활성이 억제되었고 시스테인 계열 활성제인 DTT에 의해서는 2배 이상의 활성을 보여 정제된 단백분해효소가 시스테인 계열임을 알 수 있었다. 정제된 단백분해효소와 serum IgG, serum IgA, secretory IgA를 반응시켰을 때 면역글로불린이 분해되었고 헤모글로빈과 반응시켰을 때도 헤모글로빈을 분해하였다. 이상의 결과로 보아 질편모충에서 정제한 60 kDa acidic 시스테인 단백분해효소는 인체의 IgG, IgA 및 헤모글로빈 등을 분해하여 숙주의 면역기작을 회피하며 영양대사에 이용할 것으로 생각된다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제36권3호
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• pp.579-590
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• 2006

1. 연구배경 교원질 분해작용을 하는 호중구의 세포질 효소인 기질금속단백분해효소-8은 치주질환, 류마티스 관절염, 그리고 궤양결장염과 같은 염증성 질환에서 농도가 증가한다고 알려져 있다. 최근에는 A. actinomycetemcomitans의 leukotoxin이 사람호중구에서 기질금속단백분해효소-8의 분비를 유도하는 것이 보고되었다. 이 연구의 목적은 선천면역 체계에서 세포표면 항원무리14, Toll-like 수용기, 그리고 $NF-{\kappa}$ B경로를 통하여 A. actinomycetemcomitans의 지질다당질로 유도된 기질금속단백분해효소-8의 분비 여부와 세포기전을 알아보고자 하였다. 2. 연구재료 및 방법 건강한 개인 제공자(남자 13명, 여자 3명)로부터 얻은 개개인의 20ml 말초혈액을 제조사의 지침에 따라 호중구를 추출한 후 항세포표면 항원무리14와 함께 $4^{\circ}C$에서 30분간 전배양 한 후, $37^{\circ}C$에서 9시간 동안 배양시켰다. 추출한 호중구에 Toll-like 수용기 억제제 또는 $NF-{\kappa}$ B억제제인 TPCK를 첨가한 후 $37^{\circ}C$에서 1시간 동안 전배양하고 $37^{\circ}C$에서 9시간 동안 배양시켰다. 호중구에 세포뼈대 억제제인 cholchicine, nocodazole, demecolcine, 그리고 cytochalasin B를 A. actinomycetemcomitans의 지질다당질과 함께 $37^{\circ}C$에서 9시간 동안 배양시켰다. 기질금속단백분해효소-8 분비량은 효소면역측정법을 통해 결정하였다. 통계처리는 일원배치 분산분석법을 이용하였다(p<0.05). 3. 결과 A. actinomycetemcomitans 지질다당질은 기질금속단백분해효소-8의 분비를 증가시켰다. 기질금속단백분해효소-8의 분비는 항세포표면 항원무리14에 의해서 억제되었지만, 항 Toll-like 수용기2, 항 Toll-like 수용기4 항체는 억제시키지 못했다. $NF-{\kappa}$ B 억제제는 A. actinomycetemcomitans의 지질다당질로 유도된 $NF-{\kappa}$ B 결합 활성도와 기질금속단백분해효소-8 분비를 억제하였다. 미세섬유 중합반응 억제제는 A. actinomycetemcomitans의 지질다당질로 유도된 기질금속단백분해효소-8의 분비를 억제시켰으나, 미세관 중합반응억제제는 억제시키지 못했다. 4. 결론 위의 연구결과를 종합하여 볼 때, 기질금속단백분해효소-8은 A. actinomycetemcomitans의 지질다당질로 유도되며, 세포표면 항원무리-$NF-{\kappa}$ B 경로를 통하여 분비되고, 이 분비 과정은 미세섬유 계통이 관여하는 것으로 보인다.