We investigated the effect of protein extract of Asterina pectinifera on the activity of 4 enzymes that may playa role in adenocarcinoma of the colon: quinone reductase (QR), glutathione Stransferase (GST), ornithine decarboxylase (ODC), and cyclooxygenase (COX)-2. QR and GST activity increased in HT-29 human colon adenocarcinoma cells increased that had been exposed to 4 concentrations of the protein extract (80, 160, 200, and $240{\mu}g/mL$). Additionally, 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)-induced ODC activity decreased significantly in cells exposed to the extract in concentrations of $160{\mu}g/mL$ (p<0.05), $200{\mu}g/mL$ (p<0.005), and $240{\mu}g/mL$ (p<0.005). TPA-induced COX-2 activity also decreased in cells exposed to extract concentrations of 10, 20, 40, and $60{\mu}g/mL$. COX-2 expression was also inhibited in cells exposed to this extract. These results suggest that this protein extract of A pectinifera has chemopreventive activity in HT-29 human colon adenocarcinoma cells, and therefore, may have the potential to function as a chemopreventive agent in human colorectal cancer.
Thermococcus pacificus P-4의 유전체 서열 분석을 통하여 예측되는 GH1 ${\beta}$-glucosidase를 암호화하는 유전자를 동정하였다. 그 유전자는 487 아미노산들을 암호화하는 1,464 bp 나타내었으며, 그 아미노산 서열은 Pyrococcus furiosus ${\beta}$-glucosidase와 77% 상동성을 나타내었다. 그 유전자는 Escherichia coli 시스템 내에서 복제 및 발현하였다. 재조합 된 단백질은 금속 친화크로마토그래피를 통하여 정제하고 특성을 분석하였다. 정제된 단백질(Tpa-Glu)은 pH 7.5와 $75^{\circ}C$에서 최적활성을 나타내었으며, 열안정성은 $90^{\circ}C$에서 약 6시간의 반감기를 보였다. Tpa-Glu는 pNP-${\beta}$-glucopyranoside, pNP-${\beta}$-galactopyranoside, pNP-${\beta}$-mannopyranoside, 그리고 pNP-${\beta}$-xylopyranoside 순으로 우수한 $k_{cat}/K_m$ 값을 나타내었다. 또한, Tpa-Glu는 ${\beta}$-1,3-linked polysaccharide (laminarin) 그리고 ${\beta}$-1,3-와 ${\beta}$-1,4-linked oligosaccharides에 대하여 exo-hydrolyzing 활성을 보였다. 본 연구는 초고온 고세균으로터 ${\beta}$-glucosidase가 exohydrolyzing 활성을 처음 확인한 것으로 이 효소는 laminarin의 당화공정에 ${\beta}$-1,3-endoglucanase와 함께 적용할 수 있을 것으로 기대된다.
Kim, Tae-Yung;Kim, Cheol-Ho;Lee, Sang-Gil;Kang, Chung-Boo
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제18권6호
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pp.892-897
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2005
Macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) is a growth factor required for growth and differentiation of mononuclear phagocyte lineage. Total and 16 poly (A) mRNA of bovine M-CSF were isolated from healthy bovine peripheral mononuclear cells stimulated by phobol 12-myristste 13-acetate (TPA). The more compatible cultured mononuclear cells were 5${\times}$10/ml for RNA isolation. TPA-activated mononuclear cells increased the level of M-CSF-mRNA more than concanavalin A (Con A) and lipopolysaccharide (LPS). The optimal analysis of reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) for14 Macrophage colonystimulating factor (M-CSF) as a growth factor required for bovine M-CSF was denaturation at 94$^{\circ}C$ for 1 minute, annealing at 57$^{\circ}C$ for 1 minute, extension at 72$^{\circ}C$ for 1 minute for 30 cycles. The size of cDNA of bovine M-CSF by RT-PCR was 774 base pairs. A 774 base pairs cDNA encoding bovine M-CSF was synthesized by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Ligated cDNA was transformed to competent cells and then plasmid isolation and digestion was performed. Molecular cloning and sequencing were performed for cDNA of bovine M-CSF. The size of cloned cDNA of bovine M-CSF was 774base pairs. The homology of base sequence and amino acid sequence was 88% and 86% compared with known human M-CSF, respectively. From a high degree of sequence similarity, the obtained cDNA of bovine M-CSF is thought be a specific gene of bovine M-CSF.
The aim of this study was to investigate the effect of resveratrol on the oxidative stress-induced inhibition of gap junctional intercellular communication in HaCaT keratinocytes. Anti-oxidative activity of resveratrol was measured by $\alpha,\alpha$-diphenyl-$\beta$-picrylhydrazyl assay and dichlorodihydrofluorescein diacetate oxidation assay. Gap junctional intercellular communication in HaCaT keratinocytes was assessed using the scrape loading/dye transfer technique. Western blots and reverse transcription-polymerase chain reaction were also analyzed for connexin 43 protein and mRNA expression, respectively. Resveratrol scavenged directly the stable $\alpha,\alpha$-diphenyl-$\beta$-picrylhydrazyl radical over a concentration range of 4 mg/ml ($78.2{\pm}2.7$% of control) to 500 mg/ml ($29.9{\pm}4.2$% of control) and decreased the intracellular reactive oxygen species induced by ultraviolet A (UVA) irradiation ($89.3{\pm}1.1$% of UVA group), ultraviolet B (UVB) irradiation ($70.9{\pm}1.7$% of UVB group) and 12-0-tet-radecanoylphorbol-13-acetate (TPA, $48.3{\pm}1.1$% of TPA group), respectively. UVA irradiation and TPA markedly reduced gap junctional intercellular communication, which was restored by resveratrol. There were no significant differences in the level of connexin 43 protein and mRNA expression among any of the experimental groups. Our data suggests that resveratrol has the protective effect on the oxidative stress-induced inhibition of gap junctional intercellular communication in HaCaT keratinocytes, and this protection is likely due to the scavenging of reactive oxygen species.
$TiO_2$ 광촉매 산화 공정의 효율은 수산기 라디칼의 생성량에 따라 크게 의존한다. 따라서 생성되는 수산기 라디칼의 정확한 정량이 공정을 평가하는데 필수적이다. 하지만 아직까지 이러한 수산기 라디칼 정량법이 마련되지 못했다. 이에 본 연구는 $TiO_2$ 광촉매 산화 반응에서 생성되는 수산기 라디칼을 정량화하기 위한 기존 분석법들을 비교하고, 기존 분석법들의 단점을 극복할 수 있는 새로운 방법을 제안하고자 수행되었다. $TiO_2$ 광촉매 산화 반응을 모사하기 위하여, 표준 $TiO_2$ 광촉매로서 널리 이용되고 있는 Degussa P25를 사용하였으며, 투여량은 0.05 g/L이었다. 그리고 UVC 수은 저압램프(11 W, $2,975mW/cm^2$)를 광원으로 이용하였다. 연구결과, 기존에 많이 활용되고 있는 요오드화칼륨(KI)/UV-vis 분광분석법과 테레프탈산(TPA)/형광 분광분석법은 각각 요오드이온(I-)과 테레프탈산을 공정 중 생성된 수산기 라디칼과 반응시켜 발생하는 삼중요오드이온($I_3{^-}$)과 2-하이드록시 테레프탈산을 검출하여 수산기 라디칼의 생성여부만을 확인할 수 있는 정성적인 분석법들이었다. 하지만 본 연구에서 테레프탈산 방법을 고성능 액체 크로마토그래프(HPLC) 분석법과 연계하였을 때 수산기 라디칼의 정량화가 가능하였다. 이렇게 새롭게 개발된 TPA/HPLC 분석법을 이용하여 측정한 결과, 본 연구의 실험 조건에서 8시간의 광촉매 산화 공정에 의해서 0.013 M의 수산기 라디칼이 생성되는 것을 확인하였다. 본 연구에서 제안하는 수산기 라디칼 정량법은 광촉매 산화 공정의 성능을 평가하는데 기여할 것으로 기대된다.
The membrane electrode assembly(MEA) was prepared by a nonequilibrium impregnation- reduction (I-R) method. Nafion 117 and covalently cross-linked sulfonated polyetherether with tungsto- phosphoric acid (CL-SPEEK/TPA30) prepared by our laboratory, were chosen as polymer electrolyte membrane(PEM). $Pt(NH_3)_4Cl_2$, $RuCl_3$ and reducing agent $(NaBH_4)$ were used as electrocatalytic materials. Electrochemical activity surface area(ESA) and specific surface area(SSA) of Pt cathodic electrode with Nafion 117 were $22.48m^2/g$ and $23.50m^2/g$ respectively under the condition of 0.8 M $NaBH_4$. But Pt electrode prepared by CL-SPEEK/TPA30 membrane exhibited higher ESA $23.46m^2/g$ than that of Nafion 117. In case of Pt-Ru anodic electrode, the higher concentration of Ru was, the lower potential of oxygen reduction and region of hydrogen desorption was, and Pt-Ru electrode using 10 mM $RuCl_3$ showed best properties of SSA $34.09m^2/g$ with Nafion 117. In water electrolysis performance, the cell voltage of Pt/PEM/Pt-Ru MEA with Nafion 117 showed cell property of 1.75 V at $1A/cm^2$ and $80{\circ}C$. On the same condition, the cell voltage with CL-SPEEK/TPA30 was the best of 1.73 V at $1A/cm^2$.
수입산 밀가루(ASW+AH)와 쌀가루(오대)를 첨가한 혼합된에 transglutaminase를 첨가하여 반죽 물성 및 가공적 싶을 조사한 결과는 다음과 같다. Mixograph의 결과에서, 수입산 밀가루(ASW+AH)에 transglutaminase를 첨가한 mixograph 특성은 transglutaminase를 첨가할수록 각각 stability가 증가하다가 5,000 ppm 이상에서 감소하는 것으로 나타났다. 수입산 밀가루에 쌀가루(오대)를 첨가할수록 mixograph 패턴은 매우 불규칙하고 불안정한 패턴을 보여주고 있으며, stability, midline peak time, midline peak height, width at peak등의 파라메터 측정치와 특정한 관련성을 보이지 않았다. 그러나 수입산 밀가루(ASW+AH)와 쌀가루(오대)의 혼합분에 transglutaminase를 첨가함에 따라 이러한 불규칙성이 감소하였다. Farinograph의 결과에서, 수입산 밀가루(ASW+AH)에 첨가한 쌀가루(오대) 함량이 증가할수록 stability와 valormeter value는 급격히 감소하고 weakness는 크게 증가하여 매우 약하고 안정성이 낮은 반죽을 형성하였다. 그러나 transglutaminase를 첨가함에 따라 수입산 밀가루(ASW+AH)에 쌀가루(오대)를 첨가한 복합분의 stability와 valormeter value는 증가하였고, weakness는 감소하였다. 수분 흡수량은 대조군인 수입산 밀가루(ASW+AH)의 반죽에 비하여 쌀가루(오대) 혼합비율이 커질수록 증가하였으며, transglutaminase를 첨가함에 따라 수분 흡수량이 감소하는 경향을 가졌다. Peak time은 수입산 밀가루(ASW+AH)와 쌀가루(오대)를 첨가할수록 짧은 경 향을 나타내었으며, 두 반죽 모두 ttansglutaminase 를 첨가할수록 길어지는 경향을 나타내었다 조리면의 기계적 조직감을 Texture profile analysis(TPA)로 측정한 결과, 쌀가루(오대)를 첨가하여 제조한 혼합분(10, 30, $50\%$)에 transglutaminase(3000, 1000, 7000 ppm)를 첨가함에 따라 검성, 씹힘성, 견고성 등 TPA 파라메터 값이 증가하였고, 10,000 ppm 첨가시에는 비슷한 수치를 나타내거나 감소하였다. 관능평가 결과에서는 쌀가루를 $30\%$ 첨가한 혼합분으로 제조한 조리면의 조직감(씹힘성, 견고성)은 수입산 밀가루에 비해서 낮게 평가되었으나, transglutaminase를 7,000 ppm 첨가한 쌀 혼합분 조리면의 씹힘성이 향상되었다.
당근 현탁배양세포에서 세포벽 합성 효소인 GSII의 활성에 다가양이온의 작용기작을 조사하였다. 다가양이온의 특성을 가진 poly-L-Iysine과 poly-L-ornithine은 GSII의 활성을 40~50% 정도 촉진 시켰으며, ATP도 NaF도 이와 비슷한 결과를 나타냈다. 한편 poly-L-Iysine과 poly-L-ornithine은 막투과성에는 영향을 미치지 못하였으며, protein kinase의 활성제인 TPA는 GSII의 활성을 대조구에 비해 35%정도 증가시켰고 억제제인 H-7은 30%정도 감소시켰다, 이러한 결과들은 다가양이온이 인산화 과정을 통해 GSII의 활성을 증가시켜 세포벽의 합성을 증진시키리라 사료된다.
온화한 조건($80{\sim}110^{\circ}C$, 대기압)하에서 비누화반응에 의해 폐 PBT의 입자를 해중합하여다. PBT의 해중합은 KOH 보다 NaOH가 보다 효과적이었으며, 반응온도가 증가하고 입자의 크기가 작을수록 해중합은 증가하였다. 해중합속도는 표면반응이 율속단계로서 PBT 입자표면에 생성물이 형성되지 않은 미반응핵 모델에 의해 표현할수 있었다. 겉보기활성화에너지는 98.1KJ/mol 이었으며, 85.1, $105{\mu}m$인 PBT 입자를 6시간 동안 해중합하였을때 TPA의 회수율은 약 95%정도였다.
본 연구는 현대인들의 건강기능성 식품에 관심이 높아지고 있는 가운데 감귤과피 분말의 첨가량에 따른 식빵의 품질 특성을 알아보고자 하였다. Mixograph를 이용한 mixogram 결과 대조구와 감귤과피 분말을 3% 첨가한 반죽이 제빵적성에 적합하였으며, 반죽의 stickiness는 감귤과피 분말의 첨가량이 증가할수록 점착성이 감소하는 것으로 나타났다. 발효율은 대조구에 비해 감귤과피 분말의 첨가량이 증가할수록 감소하였으며, 반죽과 식빵의 pH는 감귤과피 분말의 첨가량이 증가할수록 유의적으로 감소하였다. TPA분석에서 감귤과피 분말의 첨가량이 증가할수록 단단해졌으며, 부착성은 높아졌고, 탄력성, 응집성, 씹힘성은 감소하였다. 감귤과피 분말의 첨가량이 증가할수록 crumbScan의 기공의 조밀도가 높아졌고, 식빵의 부피와 비용적은 작아졌다. 기호도 검사 결과에서 속질색, 조직감, 향, 맛에 있어서 M3이 가장 높았으며, 전체적인 기호도 역시 M3이 가장 좋았다. 이상의 결과로 M3이 전체적인 기호도와 맛, 조직감 등에서 가장 좋음을 나타내므로 M3이 감귤과피 분말의 최적 첨가량으로 보아진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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