Ginsenoside Rp1 is one of ginseng saponins with chemotherapeutic activity. In this study, we investigated the effects of Rp1 on spleen cells. Spleen is a major immune organ consisted of crucial immune cells, such as T lymphocytes, B lymphocytes, natural killer cells, and some antigen-presenting cells. Although the anti-tumor potential of Rp1 was studied, the effects of Rp1 on immune cells have not investigated yet. A viability assay using 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), flow cytometric analysis, Western blot analysis were used to detect cellular changes on Rp1-treated spleen cells. MTT assay showed that Rp1 decreased the viability of spleen cells. To further investigate the effects of Rp1 on activated spleen cells, we treated lipopolysaccharide (LPS) as a representative inflammatory agent and Rp1 on spleen cells in a combination. The surface expression levels of activation markers for lymphocytes, CD25 and CD69 were measured. Apoptotic analysis revealed the cytotoxic effects of Rp1 on both na$\ddot{i}$ve and activated cells, and the expression pattern of some apoptosis-related proteins was correlated to apoptotic events of cells. Taken together, ginsenoside Rp1 increases the cellular death of spleen cells and also inhibits the LPS-induced activation of spleen cells.
Cell-cell adhesion managed by various adhesion molecules plays an important role in regulating functional activation of cells. This event mediates attachment of inflammatory cells to endothelial cells, interaction of antigen-presenting cells with T cells and metastatic adherence of cancer cells to epithelial tissue cells. Therefore, this cellular response is considered as one of therapeutic target to treat various cancers and inflammatory diseases. To develop proper model for evaluation of functional activation of adhesion molecules, the ability of U937 and Jurkat T cells responsive to various adhesion inducers such as phorbal-12-myristate-13-acetate (PMA), staurosporin and monoclonal antibodies to CD29, CD43 and CD98 was investigated using quantitative cell-cell adhesion assay. U937 cells made more cell-cell clusters by the treatment of antibodies to CD29 and CD43 than Jurkat T cells, while Jurkat T cells exhibited increased cell-cell adhesion ability in CD98 antibody treatment. In agreement, the surface levels of CD29 and CD98 were highly observed in U937 and Jurkat T cells, respectively. Therefore, our data suggest that Jurkat T and U937 cells can be used for model system to evaluate functional activation of adhesion molecules such as CD29 and CD98.
A label-free amperometric immunosensor has been proposed for the detection of myeloperoxidase (MPO) in human serum. To fabricate such an immunosensor, a composite film consisting of N,N-dimethylformamide (DMF), multiwall carbon nanotubes (MWCNTs) and 1-ethyl-3-methyl imidazolium tetrafluoroborate ($EMIMBF_4$) suspension was initially formed on a glassy carbon electrode (GCE). Then cerium dioxide ($CeO_2$) dispersed by chitosan was coated on the GCE. After that, MPO antibodies (anti-MPO) were attached onto the nano$CeO_2$ surface. With a noncompetitive immunoassay format, the antibody-antigen complex formed between the immobilized anti-MPO and MPO in sample solution. The immunosensor was characterized by cyclic voltammetry, transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM). The factors influencing the performance of the immunosensor were studied in detail. Under optimal conditions, the current change before and after the immunoreaction was proportional to MPO concentration in the range of 5 to $300\;ng\;mL^{-1}$ with a detection limit of $0.2\;ng\;mL^{-1}$.
Plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR) pseudomonads have a large number of lipopolysaccharides on the cell surface, which induces immune responses. Cd-resistant PGPR prevalent at the Cd-affected sites under biophytostabilization was monitored. Transmissiom electron microscopy was used to the study the behavior of tolerance of PGPR to cadmium level and its effect on pseudomonad strains (Z9, S2, KNP2, CRPF, and NBRI). An immunosensor was developed by immobilizing antibody (anti-Z9 or anti-S2) against selected PGPR on a piezoelectric quartz crystal microbalance (QCM). Immunosensors were found to supplement the inherent specificity of antigen-antibody reactions with the high sensitivity of a physical transducer. On comparison of the efficiency of detection with ELISA, the spectrophotometric technique, the developed immunosensor was found to be more sensitive, fast, and reliable even after regeneration for several times. Thus, the immunosensor may be used for future detection of PGPR strains after automation of the screening process.
adr 아형 B형 간염바이러스의 preS2염기서열을 베타갈락토시다세 유전자에 연결시켜 클론닝한 후, 융합단백질의 형태로 대장균에서 발현시켰다. 한국인 간염환자로부터 분리된 표면항원으로 유도한 단일 클론항체 H8는 preS2에 특이성을 지니고 있으며, 상기의 융합단백질과 특이적으로결합하였다. 이 단일 클론항체는 adw2아형 preS2 융합단백질과는 단지 낮은 수준의 결합성을 보여주었는데, 이와 같은 단일클론항체 H8의 adr 아형과 adw2아형에 대한 결합성의 차이는 preS2부위의 아미노산 차이에 기인한다고볼 수 있다.
In this report, we describe the high-yield secretory expression of the recombinant human anti-HBsAg Fab fragment from Pichia pastoris that was achieved by co-integration of the genes encoding the heavy and light chains (both under the control of alcohol oxidase promoter) into the genome of the yeast cells. The fed-batch fermentations were carried out in a 5 L scale. Both chains of the Fab were successfully expressed upon methanol induction. The absorbance ($OD_{600}$) of the broth can reach 350~500 at the end of fed-batch phase. After the induction, the expression level of the recombinant Fab (soluble) reached 420~458 mg/L. The recombinant Fab fragment was purified from the crude culture supernatant by ion exchange chromatography and the purity of the recombinant Fab fragment was over 95%. The affinity activities of the crude fermentation supernatant and the purified Fab were analyzed by indirect ELISA, which showed that the purified recombinant Fab fragment had high affinity activity with hepatitis B surface antigen.
MHC-I molecules play a critical role in immune surveillance against viruses by presenting peptides to cytotoxic T lymphocytes. Although the mechanisms by which MHC-I molecules assemble and acquire peptides in the ER are well characterized, how MHC-I molecules traffic to the cell surface remains poorly understood. To identify novel proteins that regulate the intracellular transport of MHC-I molecules, MHC-I-interacting proteins were isolated by affinity purification, and their identity was determined by mass spectrometry. Among the identified MHC-I-associated proteins was Tmp21, the human ortholog of yeast Emp24p, which mediates the ER-Golgi trafficking of a subset of proteins. Here, we show that Tmp21 binds to human classical and non-classical MHC-I molecules. The Tmp21-MHC-I complex lacks ${\beta}_2$-microglobulin, and the number of the complexes is increased when free MHC-I heavy chains are more abundant. Taken together, these results suggest that Tmp21 is a novel protein that preferentially binds to ${\beta}_2$-microglobulin-free MHC-I heavy chains.
This study examined the chemopreventive effect of saponins that were isolated from the roots of Platycodon grandiflorum A. DC (Campanulaceae), Changkil saponins (CKS), against the tobacco-specific carcinogen, 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK), -on lung tumorigenesis in A/J mice. The mice were treated with a single NNK dose (100 mg/kg b.w., i.p.). CKS (0.5, 1, 4 mg/kg body wt.) was administered orally daily for 3 days/week beginning 1 day after the NNK treatment and was maintained throughout the experiment. The administration of CKS suppressed the NNK-induced increase in the level of proliferating cell nuclear antigen, which are a marker of cell proliferation, in the lungs of the mice 4 weeks after the NNK injection. Twenty-five weeks after the NNK treatment, the mice were sacrificed and the number of surface lung tumors was measured. CKS significantly reduced the number of lung tumors induced by NNK in a dose dependent manner. These results suggest that CKS suppresses the development of lung tumors and has a chemopreventive effect against NNK-induced mouse lung tumorigenesis.
Medical personnek are one of several groups that have been reported to have a high incidence of hepatiris B. It is also thought that the occurrence rate of hepatitis B surface antigen(HBsAg), aserologic marker for hepatitis B virus(HBV), is expected to be high in the dental personnel who are frequently exposed to the blood and saliva of the patients. Although many studies have been done to determine the HBsAg status of virus groups, limited investigations have been performed on dental personnel, especially in this country. The main purpose of this study was to identify HBsAg positivity among dental students, interns, and residents who would be expected to be a high risk group of hepatitis B infection. Screening test for HBsAg of a dental school population was performed by indirect hemagglutination(IHA)in 1982. The results were as follows : 1. Thirty four out of a total 362 persons(9.4%)tested in the study had positive response for HBsAg in their serum samples. 2. Twenty seven out of 320 dental students(8.4%)had positive for HBsAg, and in Senior class 12 out of 82 dental students (14.6%)had positive response that was the highest incidence among dental students group. 3. Seven out of 42 interns and residents(16.7%)had positive for HBsAg, and it was the highest incidence in this dental school population.
The author was performed to investigation of current status of prevalence for anti-hepatitis C virus (HCV) among the health-checkup adults in Jeonbuk province. A toal of 1,553 (male 1,046, female 507) serum samples were diagnosed by 3rd generation enzyme immunoassay (EIA) for anti-HCV. Total prevalence of anti-HCV was 0.9%, and prevalence of male and female were 0.8% and 1.2%, respectively. The prevalence of female was higher than male. According to ages group, prevalence of anti-HCV was highest in 60 age group, but it was not found in 20 age group. 14 samples with anti-HCV positive were diagnosed by EIA for hepatitis B virus surface antigen (HBs Ag), by chemiluminescence immunoassay (CLIA) for serum albumin, alanine transaminase (ALT) and asparagine transaminase (AST). Positive for HBs Ag was not found. The mean of serum albumin levels was 4.5 g/dL, and mean of ALT and AST were 34.3 IU and 31.9 IU, respectively. Through this study, I know that the prevalence of anti-HCV among adults in Jeonbuk, and suggest that the positive of anti-HCV persons who have lower serum albumin, normal to mild elevations in serum enzymes are chronic hepatitis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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