토양으로부터 세포외로 $\alpha$-galactosidase를 분비 생산하는 방선균 YB-4가 분리되었으며, 분리균의 배양ㆍ형태ㆍ생리적 특성을 조사한 결과 Streptomyces 속 균주로 확인되었다. 분리균의 배양상등액으로부터 부분정제된 $\alpha$-galactosidase를 조효소액으로 사용하였을 때 para-nitrophenyl-$\alpha$-D-galacto-pyranoside는 pH 6.0과 6$0^{\circ}C$의 반응조건에서 가장 잘 분해되었으며, 조효소액을 pH 4.0에서 pH 10.0범위에서 1시간 이상 방치한 후에도 약 90% 이상의 $\alpha$-galactosidase 활성을 유지하였다. 또한 분리균이 생산하는 $\alpha$-galactosidase는 melibiose, raffinose와 stachyose와 같은 저당류를 가수분해 할 수 있으며 분해산물로 galactose를 방출하는 것으로 보아 $\alpha$-1,6 결합을 분해한 것으로 확인되었다.
Culture broth of a streptomycete isolate, Streptomyces sp. CS684 showed antibacterial activity on methicilin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and vancomycin resistant enterococci (VRE). Among purified substances from the organism, CSU-1, which is active against MRSA and VRE, is a $C_{37}H_{62}O_{12}Na\;(M^+,721.3875)$, and identified as laidlomycin. The anti-MRSA and anti-VRE activity of CSU-1 was stronger than oxacillin and vancomycin. Phylogenetic analysis showed that strain CS684 is very similar to Streptomyces ardus NRRL $2817^T$, whereas the ability of Streptomyces sp. CS684 to produce laidlomycin was shown to be unique.
Streptomyces sp. No.8, which produced glucose isomerase was isolated from soil samples. The isolated strain, No.8, was identified as belonging to the Genus Streptomyces. A mutant strain, SM 805, showed the greatest ability to produce glucose isomerase. It was developed from the strain, No.8, by mutagenesis induced by NTG and UV treatment. The mutant strain, SM 805, produced about 7 times more glucose isomerase than the parental strain, No.8. This enzyme catalyzed the isomerization of D-xylose, D-glucose and D-ribose. It was inactive in the absence of metal ions, but was activated by the addition of $Mg^{2+}$ or $Co^{2+}$. The optimum temperature and pH for enzyme activity were $80^\circ{C}$ and pH 8.5, respectively. The enzyme was stable in a pH range of 6.0 to 10.0, and it was highly thermostable. There was no activity loss below $80^\circ{C}$, and even above $90^\circ{C}$ about 45% of its activity was retained. The reaction equilibrium was reached when about 53% fructose was present in the reaction mixture. Whole cells containing glucose isomerase from Streptomyces sp. SM 805 were immobilized by glutaraldehyde treatment. The resultant immobilized enzyme pellets showed a relatively long stability during the isomerizing reaction. The half-life of the immobilized enzyme during the operating was 45 days in the presence of 10mM $Mg^{2+}$.
성장속도가 빠르고포지형성이 우수한 방사균 일주를 토양에서 분리한 뒤 분리균의 특성을 조사한 결과 세포외 단백질 분해 효소가 중성과 알카리성의 두 종류가 생성되었으며 $\beta$-lactamase도 생성함을 알았다. 이 균주를 acriflarin 또는 NTG로서 처리하여 얻은 변이주는 포자의 형성, $\beta$-lactamase의 생성 및 protease의 생합성 능력이 소실 또는 크게 저하되었다. 일단계의 변이주 취득에서 동시에 형질의 변화가 다양하게 나타난 원인을 규명한 결과 호알카리성 protease의 생합성이 크게 저하되었음을 알았다. 따라서 방선균에서 포자형성과 호알카리성 protease의 활성이 일정한 연관성이 있을 것으로 판단되었다.
조릿대 근권토양으로부터 분리한 방선균 50균주를 대상으로 고추 세균성 점무늬병원균(Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria)의 항균활성 12균주를 선발하였다. 이들 항균활성 12균주의 계통학적 위치를 검토한 결과, 모두 Streptomyces 속의 Cluster II에 속하는 특징을 나타내었다. JR-24 균주는 최소저해 농도(MIC) 10 ${\mu}l$/disc를 나타내었으며, 배양액 5 ${\mu}l$/ml를 처리 하여 12시간 배양한 결과 Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria에 강한 생육저해효과를 나타내어 최우수 균주로 선발되었다. 항균활성 균주 JR-24의 16S rRNA 유전자 염기서열을 검토한 결과, Streptomyces galbus $DSM40089^T$ (X79852)와 98.1%, Streptomyces longwoodensis $LMG20096^T$ (AJ781356)와 98% 그리고 Streptomyces capoamus $JCM4734^T$ (AB045877)와 97.8%의 상동성을 나타내었다. API 20NE와 API 50CHE를 이용하여 JR-24 균주의 생리 생화학적 특성을 확인한 결과, L-arabinose, D-fructose, D-glucose, D-galactose을 이용하며 gelatin, protein, starch에 대하여 분해능이 있는 것으로 확인되었다. 주요지방산으로는 iso-$C_{14:0}$ (25.93%), iso-$C_{15:0}$ (10.13%), anteiso-$C_{15:0}$ (19.29%) 그리고 iso-$C_{16:0}$ (20.35%) 등을 함유하였으며, 퀴논종은 MK-9 ($H_4$) 4.37%, MK-9 ($H_6$) 51.22% 그리고 MK-9 ($H_8$) 49.47%로 동정되었다. Streptomyces sp. JR-24 균주의 계통학적 특성을 근연종인 Streptomyces galbus $DSM40089^T$와 비교한 결과, 다수의 표현형적 및 계통학적 차이를 나타내었다. 본 연구에서 분리된 Streptomyces sp. JR-24는 친환경 미생물제제 개발을 위한 유전자원 확보에 있어서 매우 큰의의가 있을 것으로 사료 된다.
Pantothenate kinase (PanK) catalyzes the first step in the biosynthesis of the essential and ubiquitous cofactor coenzyme A (CoA) in all organisms. Here, we report the identification, cloning, and characterization of panK-sp from Streptomyces peucetius ATCC 27952. The gene encoded a protein of 332 amino acids with a calculated molecular mass of 36.8 kDa and high homology with PanK from S. avermitilis and S. coelicolor A3(2). To elucidate the putative function of PanK-sp, it was cloned into pET32a(+) to construct pPKSP32, and the PanK-sp was then expressed in E. coli BL21(DE3) as a His-tag fusion protein and purified by immobilized metal affinity chromatography. The enzyme assay of PanK-sp was carried out as a coupling assay. The gradual decrease in NADH concentration with time clearly indicated the phosphorylating activity of PanK-sp. Furthermore, the ca. 1.4-fold increase of DXR and the ca. 1.5-fold increase of actinorhodin by in vivo overexpression of panK-sp, constructed in pIBR25 under the control of a strong $ermE^*$ promoter, established its positive role in secondary metabolite production from S. peucetius and S. coelicolor, respectively.
한국의 인삼(Panax ginseng)은 다양한 생리학적, 약리학적 활성을 지닌 것으로 입증되어 왔다. 인삼 잘록병은 Rhizoctonia solani와 Pythium sp.과 같은 식물 병원균에 의해 발생하며 인삼 종자에 치명적이다. 잘록병은 일반적으로 화학농약을 이용하여 방제하고 있다. 또한 생물학적 방제는 인삼 잘록병을 방제하는데 효과적이며 환경친화적인 방법으로 알려져 있다. 본 연구진은 인삼 잘록병 방제를 위한 생물 방제제로서 잠재성을 지닌 토양 세균을 탐색하였으며, 그 결과 항균물질 guanidylfungin과 methylguanidylfungin을 생산하는 방선균 A3265 균주를 선발하였다. 본 연구는 방선균 A3265 균주의 인삼 잘록병 방제 활성을 포장에서 조사한 것이다. 그 결과 인삼종자를 방선균 A3265 균주의 배양액에 침지한 후 파종하였을 때 잘록병의 발병률이 유의적으로 감소함을 확인하였다. 이는 방선균 A3265 균주가 잘록병 방제에 효과적으로 활용될 수 있음을 나타낸다.
Xylose를 효소 유도물질로한 배지에서 glucose isomerase를 생산하는 균주를 분리하기 위하여 전국각지의 토양시료 150점에서 약 280주의 Streptomyces속 균주를 분리하여 그 중에서 효소 활성능이 높은 5주를 분리하였다. 이들 균주의 성질을 조사한 결과, 서로 다른 균종임을 확인하고 분류가 완성될 때까지 Streptomyces(st) spp. K-14, K-53, K-71, K-77 및 K-733 이라 부르기로 하였다. 특히 K-77과 K-733균주는 포자 표면이 침상형임으로 다른 균종과 완전히 구별되었다. 이들 균주 중에서 K-14균주는 효소 활성능이 가장 양호하였다.
Cloning of the gene encoding extracellular .betha.-lactamase from Streptomyces sp. SMF13 in a plasmid pIJ702 and expression of the gene in Streptomyces invidans were carried out. Optimal conditions for the formation of protoplasts of S.lividans and the regeneration of the protoplasts were evaluated. Streptomyces sp. SMF-13 was selected as a donor strain of .betha.-lactamase gene and totla DNA of the strain was partially digested with Sau3A I. DNA fragments ranged from 4kb to 10 kb were ligated to pIJ702 AT Bgl II site and then the ligated DNAs were transformed to the protoplasts of S, livivans. The transformation efficiency was $2 *10^{3}$ .$\mu$g DNA for the ligated DNA mixture. One colony among a thousand colonies regenerated showed extracellular .betha.-lactamase and the size of the inserted DNA fragment was estimated to be 3.94 kb. The .betha.-lactamase activity in the culture broth of the recombinant strain was maximum at 3 days culture to be 1.0 unit/ml.
토양에서 분리, 선별한 Streptomyces 속의 한 균주가 생산하는 Penicillinase의 최적생산조건을 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 탄소원으로서는 glucose, 실소원으로는 L-as-paragine이 가장 우수했으며 금속감중에서 Mn C $l_2$를 첨가했을때 효소생성을 37% 증가시켰다. Amino 산중에서 L-leucine이 본 효소생산을 약간 증가시켰으며 L-histidine L-methionine은 크게 저하시켰다. Riboflavine, i-inositol, hesperidine, niacinamide, biotin, DL-$\alpha$- lipoic acid, folic acid가 효소생산을 증가시켰으며 항생물질중에서 cephradine, cephalexin, ampicillin, cloxacillin의 첨가가 효소생성을 크게 증가시켰다. 본 효소생산의 최고 pH는 7.0이며 최적온도는 28$^{\circ}C$였다. 또 500$m\ell$ Erlenmeyer flask에서 175$m\ell$의 배지를 가하여 3 일간 배양했을 때 효소생성이 최고에 도달했다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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