• 미생물학회지
• /
• 제40권3호
• /
• pp.211-216
• /
• 2004

세포외 phospholipase D (PLD)를 과량 생산하는 균주 JE-11을 토양으로부터 분리하였다. 16S rDNA에 의한 분석과 형태적, 생리적 특성을 조사한 결과 이 균은 Streptomyces somaliensis로 동정되었다. 선발한 S. somaliensis로 부터 PLD를 암호화하는 유전자(sspld) 분리하고 염기서열을 조사하였다. Open reading frame을 분석한 결과 33개의 아미노산으로 이루어진 분비 signal peptide와 505개의 아미노산으로 구성된 PLD단백질을 암호화하는 것으로 예상되었다. 또한, sspld의 염기 서열로부터 유추된 단백질 서열은 기존에 보고된 다른 Streptomyces PLD들과 70-88％의 서열 유사성을 보였다. 이 PLD는 96-98％(㏖/㏖)의 수율로서, Phosphatidylcholine을 glycerol과 serine을 기질로 하여 각각 phosphatidylglycerol 과phosphatidylserine으로 전환을 하였으나, 알코올 공여체인 inositol과 ethanolamine과는 반응하지 않았다.

• 미생물학회지
• /
• 제42권4호
• /
• pp.294-298
• /
• 2006

Streptomyces somaliensis가 생산하는 phospholipase D (PLD)를 정제하기 위하여 펩티드 항체 결합 면역 친화 크로마토그래피용 칼럼을 개발하였다. 단백질 구조 예측 프로그램과 Streptomyces PLD X-선 결정구조를 참조하여, S. somaliensis PLD의 1차 구조로부터 항원특성이 높고. 표면에 위치하는 것으로 예상된 5종류의 펩티드들을 epitope로 선정한 뒤, 이에 대한 항체로 면역친화 크로마토그래피용 칼럼을 제작하였다. 배양 농축액을 칼럼에 통과시켜 정제한 활성 분획을 SDS-PAGE 및 Western blot 결과, 칼럼 종류에 따라 순수한 PLD또는 35 kDa의 단백질 불순물만을 포함하는 PLD 정제 분획을 보여 면역친화 칼럼의 높은 항원결합 특이성을 보여주었다. 그러나 수용액상에서 PLD 자체의 구조적 불안정성 때문에 정제 후 PLD의 특이적 활성 및 정제 수율은 낮았다.