• 한국작물학회지
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• 제43권2호
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• pp.89-94
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• 1998

Granule bound starch synthase (GBSS), also known as the '"waxy protein'", is responsible for the synthesis of amylose in the amyloplasts of cereal crops. In hexaploid wheat (Triticum aestivum L.), GBSS is involved in amylose synthesis and rolls as an important factor to determine flour quality and end-use quality in food products. Genes on three Wx loci have been found to encode GBSS in common wheats. We developed techniques for the purification and separation of GBSS in wheat. Three major GBSS isoforms, which were encoded by the genes on three loci, Wx-A1, Wx-B1, and Wx-D1 migrating differently by one dimensional SDS-po-lyacrylamide gel electrophoresis (1D SDS-PAGE), were identified. GBSS from 66 Korean hard and soft winter wheats were purified and determined for their Wx loci and four of them were identified possessing a null allele either at the Wx-A1 and Wx-B1 loci. With help of identification of three GBSS isoforms using 1D SDS-PAGE system, we are able to identify and monitor Wx gene expressions in breeding materials for developing waxy or partial waxy wheats without experiencing consecutive selecting generations.cting generations.

• Journal of Microbiology
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• 제37권2호
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• pp.80-85
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• 1999

The purification system of glucoamylase (glucan 1,4-${\alpha}$-glucosidase, EC 3. 2. 1. 3), some characteristics of the purified enzyme and hydrolysis rate of various raw starch were investigated through several experiments. The enzyme was produced on a solid, uncooked wheat bran medium of Aspergillus oryzae NR 3-6 isolated from traditional Korean Nuruk. The enzyme was homogeneously purified 6.8-fold with an overall yield of 28.3% by the criteria of disc- and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight was estimated to be 48 kDa by SDS-PAGE. The optimum temperature and pH were 55$^{\circ}C$ and 4.0, respectively. The enzyme was stable at a pH range of 3.0∼10.0 and below 45$^{\circ}C$. Enzyme activity was inhibited about 27% by 1mM Hg2+. The hydrolysis rate of raw wheat starch was shown to be 17.5-fold faster than the hydrolysis rate of soluble starch. The purified enzyme was identified as glucoamylase because the product of soluble starch by the purified enzyme was mainly glucose by thin layer chromatography.

• 농업과학연구
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• 제24권2호
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• pp.121-125
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• 1997

베트남으로부터 수집된 총 437 벼 지역종을 사용하여 총 종자 단백질을 분석하기 위하여 SDS-PAGE와 phenol 반응을 수행하였다. 세 가지 다른 형태의 glutelin a subunit이 검출되었다. 60kDa의 분자량인 wx 단백질 수준은 세 그룹으로 분리되었는데, 이는 non-glutelin, intermediate, 그리고 glutelin 전분 유형이다 종자 저장 단백질과 wx 단백질의 변이에 의한 실험결과 지역종은 7그룹으로 구분된다. Glutelin a subunit의 A와 B형의 빈도분포는 벼 지역종이 수집된 위도에 따라서 변하였다. 페놀 반응에 대한 지리학적인 구배가 검출되었다.

• 미생물학회지
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• 제35권4호
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• pp.315-321
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• 1999

핵전이 방법을 이용하여 효모에서 전분분해능이 향상된 새로운 우수 균주를 개발하고자 하였다. Saccharomycopsis fiburigera KCTC 7393과 Saccharomyces cerevisiae KCTC 7049에서 핵을 분리한 후 영양요구 돌연변이주인 S. cerevisiae의 안으로 전달시켜 잡종(MN-16)을 형성하여 전분 분해능이 증가된 잡종을 선별하였다. 세포 배양액으로 조효소 용액을 만든 후 ammonium sulfate 침전, DEE-Sephacel column chromatography, Sephacryl S-200 column chromatography 등의 정제과정을 통해 9.7%의 회수율로 약 10.6배 정제 된 효소를 얻을 수 있었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE 전기영동을 통해 단일 band를 보여 주었으며, SDS-PAGE 와 Sephacryl S-200 column chromatography를 통해서 53kDa으로 나타났다. 정제효소의 최적 활성 온도는 40${\circ}C$이고, 안정성은 40~45${\circ}C$로 나타났다. 최적 활성 pH는 5.5이었고, pH 5.0~7.0 정도에서 pH안정성이 80%정도 유지되었다. 가용성 전분에 대한 $K_{m}$ 값은 2.5㎎/㎖이었다. 또한, 정제 효소의 금속 이온의 효과로 $Ca^{2+}, Co^{2+}, EDTA, Mg^{2+}, Mn^{2+}, Zn^{2+}$ 첨가시 활성이 촉진되었고, $Ca^{2+}$의 경우 가장 높은 반면 $Cu^{2+}, Fe^{2+}, Ni^{2+}$의 경우는 오히려 활성이 감소되었다.

• 한국수산과학회지
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• 제31권6호
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• pp.823-828
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• 1998

명태 actomyosin 용액에 대한 옥수수전분 가수분해물의 동결 보호 효과는 전기영동상 패턴, 용해도 및 $Ca^{2+}$-ATPase 활성 변화로 알아보았다. 먼저 전기영동상 패턴에서 0일차와 저장 30일차를 비교하였을 때, control의 경우 저장온도에 관계없이 각 band들의 변화가 수반되었고, 특히 MHC의 변화가 두드러졌다. Sucrose 첨가구의 경우, 저장온도에 상관없이 band상의 변화가 거의 없는 것으로 나타났다. 전분가수분해물이 첨가된 시료들에서는 온도 의존성이 현저하여 $-5^{\circ}C$에서 저장한 시료들은 MHC band가 나타나지 않았고 반면에 $-20^{\circ}C$에서는 저장 30일 째에도 0일차와 거의 같은 양상을 보였다. 시료들을 $-5^{\circ}C$에서 저장할 때 용해도 변화는 sucrose의 경우 저장 30일 후에도 $90\%$ 이상의 높은 값을 유지한 반면에 나머지 시료들은 저장과 함께 급속히 감소하였다 $-20^{\circ}C$에서는 sucrose, D.E. 10, 15 및 20을 함유한 시료들은 약 $90\%$ 정도를 나타내었다. 잔존 활성 변화에서도 용해도 변화와 거의 유사한 경향을 나타내었다. 이상에서 살펴보았듯이 명태 actomyosin 용액의 동결변성에 대한 옥수수전분가수분해물들의 보호효과는 저장온도에 따라 많은 차이를 나타내었고, 특히 D.E. 10의 경우는 기존의 동결변성 방지제인 sucrose와 비교하여 $-12^{\circ}C$ 이하에서는 거의 같은 효과를 나타내는 것을 알았고, 저감미, 저열량의 동결변성 방지제로서 가능한 것으로 사료된다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제36권6호
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• pp.533-538
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• 1993

아밀로즈는 ${\alpha}-1,4$ 결합으로 이루어진 포도당의 중합체로 곡류에서의 식품학적 기능성을 결정하는 가중 중요한 전분의 구성성분으로, 이의 함량은 단일 우성유전인자인 Wx 유전인자에 의하여 결정된다고 알려지고 있다. 지금까지 Wx 단백질이라고 알려지는 전분 합성 효소(starch-bound starch synthase)는 아밀로즈의 생합성에 관련된 효소로 아밀로즈의 함량을 조절하는 단백질로 알려져 왔다. 따라서 본 연구에서는 아밀로즈의 생합성 기작 연구의 한단계로 Wx 단백질인 아밀로즈 합성 효소를 동정하고 분리하였다. 아밀로즈의 함량이 매우 다양한 변이품종들로부터 전분 결합 단백질을 추출하고 이를 전기영동 분석을 통하여 비교분석하였다. 그 결과 전분과 결합하여 존재하는 66 kDa의 단백질이 전분 중 아밀로즈의 함량과 매우 높은 연관관계를 전기영동상에서 보여주고 있어, 이를 Wx 단백질로 동정하였다. 아울러 이 단백질을 전분으로부터 분리하고, gel filtration 과정을 통하여 순수 분리하는 정제 방법을 확립하였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제40권6호
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• pp.465-471
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• 1997

Bacillus brevis CD162가 생산하는 cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase)를 ammonium sulfate 침전, DEAE-Sephadex CL-6B 및 Sephadex G-150 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 분리정제하였다. 정제된 CGTase는 분자량이 약 74,000, 등전점은 약 6.3인 단백질이었고, 정제된 단백질을 SDS-PAGE한 후 변성된 단백질을 재활성시켜 zymogram을 수행한 결과 cyclodextrin glycosyltransferase임을 확인할 수 있었다. 이 효소의 최적활성 pH와 온도는 각각 8.0과 $55^{\circ}C$이었으며, pH $5.5{\sim}9.0$과 $50^{\circ}C$까지 안정한 활성을 보였다. 또한, CGTase의 $NH_2$-말단 부위의 아미노산서열은 Ser-Val-Thr-Asn-Lys-Val-Asn-Tyr-Ser-Lys-Asp-Val-Ile-Tyr-Gln 이었으며, 전분으로부터 cyclodextrin으로의 전환률을 분석한 결과, ${\alpha}$-cyclodextrin은 1.3%, ${\beta}$-cyclodextrin은 33.9% ${\gamma}$-cyclodextrin은 9.7% 이었다.

• 미생물학회지
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• 제36권2호
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• pp.112-118
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• 2000

Bacillus circulans KCT3004 유래의 호산성 $\alpha$-amylase 유전자가 pUC19을 vector로 하여 대장균 내에서 클로닝 되었다. 클로닝된 5.8kb Pst I DNA절편은 pUC19내에서의 삽입방향과는 무관하게 $\alpha$-amylans보다 약40배 정도의 높은 효소활성을 나타내었다. 본 연구에서 클로닝 및 발현된 효소의 최적 pH와 온도는 각각 pH 3.6 $45^{\circ}C$였으며, $40^{\circ}C$에서 1시간 동안의 사전 열처리에도 활성의 감소를 일으키지 않았다. 이 효소는 SDS-PAG와 zymogram을 통해 분석해 본 결과 분자량은 약 55,000으로 추정되었으며 기질로 starch만을 가수분해하여 maltoriose 이상의 올리고당 분자들을 주로 생산할수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권10호
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• pp.1678-1682
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• 2008

To investigate lactic acid bacterial population in Korean traditional rice wines, biotyping was performed using cell morphology and whole-cell protein pattern analysis by SDS-PAGE, and then the isolates were identified by 16S rRNA sequencing analysis. Based on the morphological characteristics, 103 LAB isolates were detected in wine samples, characterized by whole-cell protein pattern analysis, and they were then divided into 18 patterns. By 16S rRNA gene sequencing, the isolates were identified as Lactobacillus paracasei, Lb. arizonensis, Lb. plantarum, Lb. harbinensis, Lb. parabuchneri, Lb. brevis, and Lb. hilgardii when listed by their frequency of occurrence. It was found that the difference in bacterial diversity between rice and grape wines depends on the raw materials, especially the com position of starch and glucose.

• Mycobiology
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• 제35권4호
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• pp.196-204
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• 2007

The growth and bioconversion potential of selected strains growing on cassava waste substrate during solid state fermentation were assessed. Rhizopus stolonifer showed the highest and the fastest utilization of starch and cellulose in the cassava waste substrate. It showed 70% starch utilization and 81% cellulose utilization within eight days. The release of reducing sugars indicating the substrate saccharification or degradation potential of the organisms reached the highest value of 406.5 mg/g by R. stolonifer on cassava waste during the eighth day of fermentation. The protein content was gradually increased (89.4 mg/g) on the eighth day of fermentation in cassava waste by R. stolonifer. The cellulase and amylase activity is higher in R. stolonifer than A. niger and P. chrysosporium. The molecular mass of purified amylase and cellulase seemed to be 75 KDal, 85 KDal respectively.