Most of the commercial devices for vitrification are directly immersed into the warming solution (WS) for increasing of warming rate. However, the previous modified cut standard straw (MCS) which has reported is difficult to immerse into the WS. The aim of this study was to investigate whether the long cut straw (LCS) could be useful as a stable tool for vitrified-warmed human blastocysts. A total of 138 vitrified-warmed cycles were performed between November 2013 and November 2014 (exclusion criteria: women ${\geq}38$ years old, poor responder, surgical retrieval sperm, and severe male factor). The artificial shrinkage was conducted using 29-gauge needles. Ethylene glycol and dimethyl sulfoxide (7.5% and 15% (v/v)) were used as cryoprotectants. Freezing and warming were conducted using the LCS tool. The cap of LCS was removed using the forceps in the liquid nitrogen ($LN_2$) and then directly immersed into the first WS for 1 min at $37^{\circ}C$ (1 M sucrose). Only re-expanded blastocysts were transferred after it was cultured in sequential media for 18-20 h. A total of 294 blastocysts were warmed, and all were recovered (100%). Two hundred eighty-five embryos were survived (96.9%). The vitrified-warmed blastocysts of all patients were transferred without any cancellation. We were able to achieve a reasonable implantation (24.2%), following by clinical pregnancy (36.2%), which then continued to ongoing pregnancy (36.2%), and live birth (31.2%). Using LCS is achieved the acceptable rates of survival, pregnancy and live birth. Therefore, the LCS could be considered as a stable and simple tool for human embryo vitrificaton.
Ma, Lei;Jung, Dae-Jin;Jung, Eun-Ju;Lee, Woo-Jin;Hwang, Ju-Mi;Bae, Jeong-Won;Kim, Dae-Hyun;Yi, Jun Koo;Lee, Sang Moo;Ha, Jae Jung;Kwon, Woo-Sung
한국동물생명공학회지
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제36권2호
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pp.106-115
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2021
Sperm cryopreservation is an important method of assisted reproductive techniques and storing genetic resources. It plays a vital role in genetic improvement, livestock industrial preservation of endangered species, and clinical practice. Consequently, the cryopreservation technique is well organized through various studies, especially on Korean native cattle (Hanwoo). However, the cryopreservation technique of Korean native brindled cattle, which is one of the native cattle species in Korea, is not well organized. Therefore, it is necessary to develop a Supplementary Table technique for the cryopreservation of Korean native brindled cattle. For this purpose, it is important to first evaluate the quality of the currently produced cryopreserved sperm of Korean native brindled cattle. In this study, we randomly selected 72 individual Korean native brindled cattle semen samples collected from 8 different region research centers and used them to evaluate sperm functions. We focused on the quality evaluation of cryopreserved Korean native brindled cattle semen following the measurement of motion kinematics, capacitation status, intracellular ATP level, sperm motility, and cell viability. Then, the values of each of the eight groups were derived from various sperm parameters of nine individual samples, including sperm motility, kinematics, cellular motility, and intracellular ATP levels, which were used to compare and evaluate sperm function. Overall, differences in various sperm parameters were observed between most of the research centers. Particularly, the deviations of motility and motion kinematics were high according to the sample. Therefore, we suggest that it is necessary to develop a standard method for the cryopreservation of Korean native brindled cattle semen. We also suggest the need for sperm quality evaluation of the cryopreserved semen of Korean native brindled cattle before using artificial insemination to attain a high fertility rate.
한우의 고환둘레와 정액 생산 및 번식과의 관계를 구명하기 위하여, 농협중앙회 가축개량사업소 보유 종모우 63두의 고환둘레와, 이들의 19,742번의 정액 생산기록(정액량, 농도/ml 및 총정자수) 및 이중 16두가 생산한 1,289두의 자손기록을 이용하였다. 정액량, 정액 농도와 총 정자수 모두 정액채취년도, 정액채취월, 정액 채취 순서에 따라 영향을 받았다(P<0.001). 고환 둘레의 평균은 41.2$\pm$4.54cm 이었고, 1회 평균 사정량은 5.47$\pm$0.89ml 이었으며, 정액 농도는 16.2$\pm$2.78(${\times}10^8$/ml), 사정당 총정자수는88.47$\pm$15.24(${\times}10^8$)이었다. 고환둘레와 정액량 및 총 정자수 간에는 0.14 및 0.15의 정의 상관을 나타내었으며, 임신율과는 0.39, 출산율과는 0.26의 상관을 나타내었다.
Semen was collected from Taiwan commercial local chickens, the diluted sperm suspension were placed in the Gene Pulser cuvette for electroporation. The motility, mortality and abnormality of spermatozoa were evaluated. The fertility and hatchability were also investigated. The results showed that smaller motility and greater mortality or abnormality than the control were found when the capacitances were increased either for spermatozoa treated with small capacitances(0.25, 1, 3 and $25{\mu}$ FD) or treated with high capacitances (125, 250, 500 and $960{\mu}$ FD). In general, greater field strengths also resulted in smaller motility and greater mortality or abnormality of spermatozoa. Although the electroporation decrease the fertility there were no effect on the hatchability.
The threat posed by increased surface temperatures worldwide has attracted the attention of researchers to the reaction of animals to heat stress. Spermatogenesis in animals such as stallions is a temperature-dependent process, ideally occurring at temperatures slightly below the core body temperature. Thus, proper thermoregulation is essential, especially because stallion spermatogenesis and the resulting spermatozoa are negatively affected by increased testicular temperature. Consequently, the failure of thermoregulation resulting in heat stress may diminish sperm quality and increase the likelihood of stallion infertility. In this review, we emphasize upon the impact of heat stress on spermatogenesis and the somatic and germ cells and describe the subsequent testicular alterations. In addition, we explore the functions and molecular responses of heat shock proteins, including HSP60, HSP70, HSP90, and HSP105, in heat-induced stress conditions. Finally, we discuss the use of various therapies to alleviate heat stress-induced reproductive harm by modulating distinct signaling pathways.
Cryopreservation is an option for the preservation of pre- or post-pubertal female or male fertility. This technique not only is beneficial for human clinical applications, but also plays a crucial role in the breeding of livestock and endangered species. Unfortunately, frozen germ cells, including oocytes, sperm, embryos, and spermatogonial stem cells, are subject to cryoinjury. As a result, various cryoprotective agents and freezing techniques have been developed to mitigate this damage. Despite extensive research aimed at reducing apoptotic cell death during freezing, a low survival rate and impaired cell function are still observed after freeze-thawing. In recent decades, several cell death pathways other than apoptosis have been identified. However, the relationship between these pathways and cryoinjury is not yet fully understood, although necroptosis and autophagy appear to be linked to cryoinjury. Therefore, gaining a deeper understanding of the molecular mechanisms of cryoinjury could aid in the development of new strategies to enhance the effectiveness of the freezing of reproductive tissues. In this review, we focus on the pathways through which cryoinjury leads to cell death and propose novel approaches to enhance freezing efficacy based on signaling molecules.
The aim of this study was to report a successful pregnancy using completely immotile frozen-thawed spermatozoa selected by laser. A single laser shot was used to detect the presence of viable immotile spermatozoa in fresh and frozen-thawed testicular spermatozoa. The viability rate was 55.8% after the laser detection, and cryopreservation was carried out immediately. The thawing test was performed on the day of oocyte pick-up, and no motile sperm were observed after extending the culture for another 4 hours, while a survival rate of 39.8% was detected using the laser. In all, five mature oocytes were injected, resulting in four cases of normal fertilization (80%) on day 1. Further, two high-quality day 3 embryos were transferred, which resulted in a singleton pregnancy. Our study demonstrates that completely immotile spermatozoa are worth cryopreserving for further intracytoplasmic sperm injection, which provides a new insight into male fertility preservation in cases of completely immotile spermatozoa.
To study the effect of induced hypothyroidism on fertility status of male Black Bengal goats, 10 adult healthy mature males were divided into control and treated groups. Hypothyroidism was induced successfully by injecting thiourea subcutaneously initially for 15 days at the rate of 100 mg/kg body weight, followed by 66.7 mg/kg body weight for the subse quent 15 days. This resulted in a decrease (p < 0.01) in plasma tri-iodothyronine, thyroxine and testosterone levels, with increasing duration of thiourea treatment. It also adversely affected semen quality, ejaculate volume, sperm concentration, motility and viability. Live percentage declined to 75% for treated and control remained at 90%. Artificial insemination fo female goats with semen of thiourea-treated goats, resulted in failure of conception. However, females inseminated with semen of male goats of control group showed 100% conception. These observations indicate that, thyroid hormones play a key role in maintaining the normal reproductive processes of male goats.
Faramarzi, Azita;Khalili, Mohammad Ali;Mangoli, Esmat
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제46권3호
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pp.119-124
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2019
Objective: It is widely accepted that aging decreases women's fertility capacity. The aim of this study was to assess correlations between maternal age and the morphokinetic parameters and cleavage pattern of embryos. Methods: The morphokinetics of embryos derived from women < 30, 30-35, 36-40, and > 40 years of age were compared retrospectively in terms of time of second polar body extrusion, time of pronuclei appearance, time of pronuclei fading, and time of two to eight discrete cells (t2-t8). Furthermore, abnormal cleavage patterns such as uneven blastomeres at the two-cell stage, cell fusion (Fu), and trichotomous mitoses (TM) were assessed. Results: Only t5 occurred later in women aged 36-40 and > 40 years when compared with those aged < 30 and 30-35 years (p< 0.001). Other morphokinetic timing parameters, as well the presence of uneven blastomeres, were comparable between the groups (p> 0.05). However, Fu and TM were more common in women aged > 40 years than in younger women (p< 0.001). Conclusion: Maternal age was correlated with the cleavage pattern of embryos. Therefore, evaluating embryo morphokinetics may contribute to optimal embryo selection, thereby increasing fertility in patients with advanced maternal age.
Objective: This study was conducted to assess the efficacy of subcutaneous granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) for treating thin endometrium. Methods: Data from 88 infertile women with thin endometrium (<7 mm) aged 23 to 40 years were evaluated retrospectively over a period of 1 year. In group 1, subcutaneous infusion of G-CSF (300 ㎍/mL) was administered to 44 women along with other supplemental treatments. If the lining did not exceed 7 mm within 72 hours, a second infusion was administered. In group 2, which also had 44 women, only estradiol valerate and sildenafil were administered, while subcutaneous G-CSF infusion was not. Embryo transfers were performed once the lining exceeded 7.5 mm. The efficacy of G-CSF was evaluated by assessing the thickness of the endometrium before embryo transfer, pregnancy rates, and clinical pregnancy rates. Results: There were no differences between the groups regarding demographic variables, egg reserves, sperm parameters, the number of embryos transferred, and embryo quality. The pregnancy rate was significantly higher in group 1 (60%, 24 of 40 cases) than in group 2 (31%, 9 of 29 cases) (p<0.001). The clinical pregnancy rate was also significantly higher in group 1 (55%) than in group 2 (24%) (p<0.001). Conclusion: Subcutaneous G-CSF infusion improved the thickness of the endometrium when it was thin. To the best of our knowledge, this is the first documented study to clearly demonstrate the benefits of subcutaneous G-CSF infusion for treating thin endometrium.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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