Park, Seung-Won;Goo, Tae-Won;Kim, Seong-Ryul;Choi, Gwang-Ho
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제25권1호
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pp.111-114
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2012
In previous studies we have shown that a sw17255 gene was expressed in hemocyte-specific tissues of the silkworm, Bombyx mori L. (Lepidoptera: Bombycidae). It was verified that the sw17255 core promoter region contains elements that regulate the expression of this gene in hemocyte tissue; the selected promoter region spans nucleotides -1 to -2,112 upstream of the start codon. Each of the luciferase reporter gene expression vectors under the control of 4 different kinds of promoter candidates, (-2,112/-1), (-1,640/-1), (-1,169/-1) and (-579/-1), and the control reporter plasmid DNA, were introduced into B. mori larval coelom by direct injection using a syringe. The promoter candidate [E] (-579/-1) showed more than 1.67 fold transcriptional activity compared to control promoter activity. Higher productivity of an expressed gene in the transgenic silkworm by this promoter combination could be achieved in the near future. The foreign recombinant protein could be easily harvested from the blood of the transgenic silkworm.
The optimal conditions and substrate specificity of whole body esterase (EST) activity, effects of inhibitors (Eserine, Paraoxon, p-HMB, DDVP, DFP) on the enzyme, and ontogenv of the isozymes were determined in Lucilio ilfustris Meisen. The optimal temperature was $45^{\circ}C$ regardless of kind of reacted substrate, $\alpha-naphthyl$ acetate $(\alpha-Nal,$ a.naphthvl butylate $(\alpha-N),$ and Pnaphthyl acetate $(\beta-Na),$ but the optimal pH showed some regioselectivitv to naphthvl group of the esters; PH 7.0 for Iform, pH 7.5 for a-form. The maximum reaction rate was recorded at about 2.5 $\times$ 10's M of PNa and etNa, but 1.0 $\times$ 10'S M of $\alpha-Nb.$ Among the five EST inhibitors tested, DDVP was the most powerful. However, distinction of the relative specificity of inhibitors between three body parts, head, thorax, and abdomen, was shouts, representing differences in the distribution and activity of isozvmes. Of 12 carboxyl-esterases (CE), 8 cholinesterases (ChE) and 2 arvlesterases (ArE) identified based on their inhibitor specificity throughout the development, two larval and prepupal stage specific ChEs, no pupal specific, and 2 CEs.2ChEs. and one ArE adult specific isozvmes were confirmed.
A fixed biofilm reactor system composed of anaerobic, anoxic(1), anoxic(2), aerobic(1) and aerobic(2) reactor was packed with synthetic activated ceramic (SAC) media and adopted to reduce the inhibition effect of low temperature on nitrification activities. The changes of nitrification activity at different wastewater temperature were investigated through the evaluation of temperature coefficient, volatile attached solid (VAS), specific nitrification rate and alkalinity consumption. Operating temperature was varied from 20 to $5^{\circ}C$. In this biofilm system, the specific nitrification rates of $15^{\circ}C$, $10^{\circ}C$ and $5^{\circ}C$ were 0.972, 0.859 and 0.613 when the specific nitrification rate of $20^{\circ}C$ was assumed to 1.00. Moreover the nitrification activity was also observed at $5^{\circ}C$ which is lower temperature than the critical temperature condition for the microorganism of activated sludge system. The specific amount of volatile attached solid (VAS) on media was maintained the range of 13.6-12.5 mg VAS/g media at $20{\sim}10^{\circ}C$. As the temperature was downed to $5^{\circ}C$, VAS was rapidly decreased to 10.9 mg VAS/g media and effluent suspended solids was increased from 3.2 mg/L to 12.0 mg/L due to the detachment of microorganism from SAC media. And alkalinity consumption was lower than theoretical value with 5.23 mg as $CaCO_3$/mg ${NH_4}^+$-N removal at $20^{\circ}C$. Temperature coefficient (${\Theta}$) of nitrification rate ($20^{\circ}C{\sim}5^{\circ}C$) was 1.033. Therefore, this fixed film nitrogen removal process showed superior stability for low temperature condition than conventional suspended growth process.
Background: Carcinoembryonic antigen (CEA) is well-known soluble tumor marker frequently detectable in peripheral blood of carcinoma patients and considered as good target for antigen-specific immunotherapy. However, it is known that the induction of immune response to CEA is very difficult because CEA is a self-antigen expressed in fetal cells and weakly expressed in normal colorectal epithelial cells. To enhance anti-tumor immunity specific for CEA, recombinant CEA protein was modified using listeriolysin O (LLO) for endosomal lysis and trans activator of transcription (Tat) domain for transducing extracellular proteins into cytoplasm. Methods: After immunization using dendritic cells pulsed with Tat-CEA, both Tat-CEA and LLO, and both Tat-CEA and Tat-LLO, antibody titer to CEA and LLO, cytotoxic T lymphocyte activity and the frequency of IFN-${\gamma}$ producing T lymphocytes were measured. Results: Immunization using DC pulsed with both Tat-CEA and Tat-LLO protein showed the increasement of production of CEA-specific antibody in serum, cytotoxic T lymphocyte activity, the frequency of IFN-${\gamma}$ secreting T cells, compared with DC pulsed with both Tat-CEA and LLO. Furthermore the ratio of CD8+T cell to $CD4^+$ cell among CEA-specific T cells was increased in group pulsed with both Tat-CEA and Tat-LLO. Conclusion: These results suggested that DC vaccine using Tat-LLO could be used for the development of effective immunotherapy for the treatment of tumor.
Park, Young-Hee;Kim, Sung-Chun;Kwon, Byung-Su;Jung, Heung-Su;Kim, Kuchan;Lee, Seong-Wook
Genomics & Informatics
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제2권1호
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pp.45-52
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2004
The self-splicing group I intron from Tetrahymena thermophila has been demonstrated to perform splicing reaction with its substrate RNA in the trans configuration. In this study, we explored the potential use of the trans-splicing group I ribozymes to replace a specific RNA with a new RNA that exerts any new function we want to introduce. We have chosen thymidine phosphorylase (TP) RNA as a target RNA that is known as a valid cancer prognostic factor. Cancer-specific expression of TP RNA was first evaluated with RT-PCR analysis of RNA from patients with gastric cancer. We determined next which regions of the TP RNA are accessible to ribozymes by employing an RNA mapping strategy, and found that the leader sequences upstream of the AUG start codon appeared to be particularly accessible. A specific ribozyme recognizing the most accessible sequence in the TP RNA with firefly luciferase transcript as a 3' exon was then developed. The specific trans-splicing ribozyme transferred an intended 3' exon tag sequence onto the targeted TP transcripts, resulting in a more than two fold induction of the reporter activity in the presence of TP RNA in mammalian cells, compared to the absence of the target RNA. These results suggest that the Tetrahymena ribozyme can be a potent anti-cancer agent to modify TP RNAs in tumors with a new RNA harboring anti-cancer activity.
This paper deals with the influence of chemical oxygen demand to nitrogen ratio ((COD/N) ratio) on the performance of an membrane bioreactor. We aim at establishing relations between COD/N ratio, organisms' distribution and sludge properties (specific resistance to filtration (SRF) and membrane fouling). It is also essential to define new criteria to characterize the autotrophic microorganisms, as the measurements of apparent removal rates of ammonium seem irrelevant to characterize their specific activity. Two experiments (A and B) have been carried on a 30 L lab scale membrane bioreactor with low COD/N ratio (2.3 and 1.5). The obtained results clearly indicate the role of the COD/N ratio on the biomass distribution and performance of the membrane bioreactor. New specific criteria for characterising the autotrophic microorganisms activity, is also defined as the ratio of maximum ammonium rate to the specific oxygen uptake rate in the endogenous state for autotrophic bacteria which seem to be constant whatever the operating conditions are. They are about 24.5 to 23.8 $gN-NH_4{^+}/gO_2$, for run A and B, respectively. Moreover, the filterability of the biological suspension appear significantly lower, specific resistance to filtration and membrane fouling rate are less than $10^{14}m^{-2}$ and $0.07\;10^{12}m^{-1}.d^{-1}$ respectively, than in conventional MBR confirming the adv < antage of the membrane bioreactor functioning under low COD/N ratio.
Bacillus thuringiensis was isolated as a pathogen of the sotto disease of silkmoth larvae about a hundred years ago. Since then, this bacterium has attracted attentions of not only insect pathologists but also many other scientists who are interested in its strong and specific insecticidal activity. This has led to the recent worldwide development of B. thuringiensis-based microbial insecticides and insect-resistant transgenic plants, as well as a landmark discovery of par asp orin, a cancer cell-specific cytotoxin produced by B. thuringiensis. In this review, we describe examination of interaction between inclusion proteins of B. thuringiensis and brush border membrane of insects using a surface plasmon resonance-based biosensor, identification and characterization of parasporin-4, the latest parasporin produced by the B. thuringiensis A1470 strain, and an effective method for preparing the parasporin-4 from inclusion bodies expressed in the recombinant Escherichia coli cells.
For $CO_2-free$ hydrogen production and better utilization of the produced carbon, catalytic decomposition of methane over rubber-grade carbon blacks manufactured from coal tar was carried out. The catalytic activities of several domestic carbon blacks were compared. A pelletized carbon black exhibited considerably lower activity and activation energy than the fluffy( loose) carbon black of the same grade. This difference is considered due to the binder that was added during pelletization. For pelletized carbon blacks, a tendency was observed that the activity per unit mass of catalyst increased with the specific surface area of the carbon black. Another tendency was also observed that the activation energy increased with the primary particle size or decrease of the specific surface area.
A mammalian DNA repair enzyme, UV endonuclease III which also functions as a ribosomal protein S3 (rpS3), was purified from mouse cells and characterized. UV endonuclease III was previously cloned and known to yield a peptide of 32 kDa upon expression in E. coli [Kim et al., (1995) J. Bioi. Chem. 270, 13620-13629]. However, biochemically purified UV endonuclease III, which has a sedimentation coefficient of 3.25, appears to have an additional peptide of 28 kDa. It appears that two bands were derived from one complex, judging from the comparison of the nuclease activity on the native and SDS-gel electrophoreses. UV endonuclease III becomes non-specific upon purification and this phenomenon is more significant in the case of pure fractions of the enzyme. Non-specific activity was not influenced by pH or any salt conditions.
Three clones containing mouse CD4 gene were prepared using AKR genomic cosmid library. The role of 6, 500 bp 5' flanking region of the first exon of the AKR CD4 gene in tissue or developmental stage specific expression of CD4 has been studied. The deletion constructs containing various amounts of CD4 5' flanking sequences were prepared, and they were transfected into the cell lines representing different cell types or developmental stages of CD4 expression. Study of the reporter gene expression revealed that at least 1, 700 bp of 5' flanking region did retain promoter activity for CD4 expression. This area did not seem to contain enhancer activity for a full expression of CD4. However, the putative promoter interacted with other tissue specific enhancer sequence and showed the tissue specificity of the enhancer element.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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