• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제33권4호
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• pp.341-348
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• 1995

가시아메바 속(Accnthamoeba spp.)의 DNA 염기 구성 정보와 관계없이 임의의 10개의 엽기로 구성된 프라이머를 사용하여 random amplified polymorphic DNA-polymerase chain reaction(RAPD-PCR)에 의해 게놈 상의 DNA를 무작위로 증폭하여 확인된 표지자로써 한국 분리주 및 외국 분리주와 기존의 알려진 4개 가시아메바 종간의 유전적 근연관계 분석을 통해서 4개 한국 분리주의 분류상의 성상을 규명하였다. 본 연구에서 A. culbertsoni, A. hokchetti, A. triangularis, A. pokphrwc와 한국 분리주인 YM-2 YM-3, YM-4 YM-5 그리고 외국 분리주인 HOV의 게놈 DNA는 18 종류의 프라이머에 의하여 다양한 양상의 증폭산물을 보였으며 그 중 9개 프라이머는 한국 분리쿠간에도 특이성을 보이는 RAPD 표지자를 제공하였다. 총 18개의 프라이머에 대한 증폭 산물을 대상으로 각 시료의 유사도를 조사한 결과, A. culbertsoni는 A. hakhetti, A. triangularis, A. polyphuga와 유사도가 각각 0.300, 0.308, 0.313이었고, A hqkchetti와 A. triangularis간의 유사도는 0.838이었다. 한국 분리주 YM-2, -3, -4 간의 평균 유사도는 0.959이었고, YM-2, -3, -4 와 A. hotchetti, A. triangularis 간의 평균 유사도는 0.832이었다. 한국 분리주 YM-5는 YM-2, -3 -4 간의 비교에서 평균 0.237의 유사도를 보인 반면, A. culbersoni와 유사도 0.857을 보여, 다른 한국 분리주보다 A. culbertsoni와 유전적으로 유사함을 알 수 있었다. UPGMA법에 의한 유전적 근 연관계 분석 결과 phonogram 강에 두개의 분지군이 존재하는데, A. hakchetti, A. triangularis 및 3개 한국 분리주(YM-2, -3 -4)가 하나의 분지군을, A. cuzburtsoni, A. polyphaga HOV주, 및 YM-5가 따른 분지군을 형성하는 것으로 나타났다 게놈 DNA 상의 변이에 근거하여 볼 때, YM-5 주늘 유전적으로 A. culbertsoni와 거의 유사한 분리주이며 한국 분리주는 최소 2종 이상의 가시아메바로 분류할 수 있다고 사료된다.

• 대한수의학회지
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• 제42권3호
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• pp.363-370
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• 2002

For the development of diagnostic polymerase chain reaction (PCR) to fungal infection by dermatophytes Trichophyton and Microsporum, detection of the fungal DNA by PCR and analysis of the DNA pattern were undertaken in the present study. A total of 15 strains were tested and those consisted of 3 reference strains and 12 isolates such as: reference strains of T mentagrophytes (downy type, ATCC 9533), T rubrum (IFO 6204) and M gypseum (ATCC 9083), and each isolate of T mentogrophytes (powdery type), T mentagrophytes (granular type), T mentogrophytes (purple-red type), T rubrum, T raubitschekii, T tonsurans, T equinum, T ajelloi, T verrucosum, M cookei, M nanum and M gypseum. The DNA were purely isolated from all strains of Trichophyton spp. and Microsporum spp. by a simple method partly consisted of disruption of fungal cells by lyophilization and grinding and extraction of fungal DNA without phenol treatment which is a routine procedure in DNA isolation. For the detection of fungal DNAs, optimal condition of PCR was determined as preheating once at $94^{\circ}C$ for 5 min, 35 cycles of denaturation at $94^{\circ}C$ for 1 min, annealing at $38^{\circ}C$ for 1 min and polymerization at $72^{\circ}C$ for 2 min, and 1 cycle of final extension at $72^{\circ}C$ for 5 min. In PCR using arbitrary primers AP-1 (5' ACCCGACCTG3') and AP-2 (5' ACGGGCCAGT3'), DNAs in various numbers and sizes were detected from different species of Trichophyton and Microsporum, while DNAs in similar size were also detected in all strains of Trichophyton spp. and Microsporum spp. There were unique DNAs observed from certain dermatophytes by AP-1 such as 1,900 bases in T rubrum, 950 and 1,100 bases in T raubitscheldi, 2,100 bases in T equinum, 400 bases in T verrucosum and 1,150 bases in M gypseum. The unique DNAs were also observed by AP-2 such as 1,200 bases in T ajelloi, 250 bases in T verrucosum, 1,150 bases in M cookei and 2,000 bases in M nanum. The results indicated that PCR can detect a specific DNA from certain Trychophyton and Microsporum spp, which can be the information for further development of diagoomc PCR to dennatophytes.

• 환경생물
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• 제32권4호
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• pp.382-388
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• 2014

최근 뱀장어 양식장에서 사육 중이던 동남아산 뱀장어에 몸통 근육의 요철현상을 나타내면서 폐사를 일으키는 질병이 발생하였다. 병어의 몸통 근육 내 환부는 흰색 또는 황색으로 변해있었다. 병리조직학적인 변화는 근조직내에 수많은 포자와 크고 작은 시스트들이 변형된 근육근섬유 내에 관찰되었다. 병어의 근육 환부를 취하여 PCR을 실시하여 H. anguillarum이 가지는 특정 유전자인 Small subunit ribosomal RNA (SSU-rRNA)를 증폭하였다. 좀 더 정확한 동정을 위해 PCR product를 Cloning 후 Sequencing하여 서열들을 분석한 결과 H. anguillarum의 Small subunit ribosomal RNA (Gene bank accession number: AB623036) 서열과 일치하게 나타남을 확인할 수 있었다. primer 18F과 1537R의 PCR product는 약 1366 bp 길이가 일치하였으며, V1과 1392R를 이용한 PCR product는 1200 bp가 일치하게 나타났다. 또한 H1과 H2의 PCR product의 경우는 800 bp 정도 일치하였으며 이의 서열은 나머지 2개의 product가 공통적으로 가지고 있는 서열이었다. 이를 토대로 본 연구에서는 동남아산 뱀장어에 감염된 포자충은 H. anguillarum임을 동정할 수 있었다.

• 한국축산식품학회지
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• 제34권6호
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• pp.799-807
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• 2014

Meat source fraud and adulteration scandals have led to consumer demands for accurate meat identification methods. Nucleotide amplification assays have been proposed as an alternative method to protein-based assays for meat identification. In this study, we designed Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assays targeting species-specific mitochondrial DNA to identify and discriminate eight meat species; cattle, pig, horse, goat, sheep, chicken, duck, and turkey. The LAMP primer sets were designed and the target genes were discriminated according to their unique annealing temperature generated by annealing curve analysis. Their unique annealing temperatures were found to be $85.56{\pm}0.07^{\circ}C$ for cattle, $84.96{\pm}0.08^{\circ}C$ for pig, and $85.99{\pm}0.05^{\circ}C$ for horse in the BSE-LAMP set (Bos taurus, Sus scrofa domesticus and Equus caballus); $84.91{\pm}0.11^{\circ}C$ for goat and $83.90{\pm}0.11^{\circ}C$ for sheep in the CO-LAMP set (Capra hircus and Ovis aries); and $86.31{\pm}0.23^{\circ}C$ for chicken, $88.66{\pm}0.12^{\circ}C$ for duck, and $84.49{\pm}0.08^{\circ}C$ for turkey in the GAM-LAMP set (Gallus gallus, Anas platyrhynchos and Meleagris gallopavo). No cross-reactivity was observed in each set. The limits of detection (LODs) of the LAMP assays in raw and cooked meat were determined from $10pg/{\mu}L$ to $100fg/{\mu}L$ levels, and LODs in raw and cooked meat admixtures were determined from 0.01% to 0.0001% levels. The assays were performed within 30 min and showed greater sensitivity than that of the PCR assays. These novel LAMP assays provide a simple, rapid, accurate, and sensitive technology for discrimination of eight meat species.

• 대한본초학회지
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• 제24권3호
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• pp.59-68
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• 2009

Objectives : Bupleuri Radix (Siho) is prescribed as the root of different Bupleurum species on the pharmarcopoeia in Korea and China. Moreover, other species and varieties of the genus Bupleurum have been also distributed on the herbal market as Bupleuri Radix. However, due to the morphological similarity and frequent occurrence of intermediate forms, the correct identification of this radix is very difficult. To develop a reliable method for correct identification and improving the quality standards of official Bupleuri Radix, we analyzed sequences of the ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer (rDNA-ITS) region. Methods : PCR amplification of rDNA-ITS region was performed using ITS1 and ITS4 primer from 6 Bupleurum species and 1 variety, B. falcatum L. (Siho), an improved breed of B. falcatum L. (Samdo-Siho), B. chinense DC. (Buk-Siho), B. scorzonerifolium Willd. (Nam-Siho), B. longiadiatum Turcz. (Gae-Siho), B. euphorbiodes Nakai (Deungdae-Siho) and B. latissimum Nakai (Seom-Siho), and nucleotide sequence was determined after sub-cloning into the pGEM-Teasy vector. Authentic marker nucleotides were estimated by the analysis of ClastalW using entire rDNA-ITS sequence of three samples per species. Results : In comparative analysis of the rDNA-ITS sequences, we found specific nucleotides to distinguish Korean (B. falcatum L. and its variety) and Chinese official species (B. chinense DC. and B. scorzonerifolium Willd.) from others at positions 411 and 447, and positions 89, 101, 415 and 599, respectively. Futhermore, we also found nucleotide indels (insertion and/or deletion) and substitutions to identify each of different Bupleurum species, 2 positions for B. falcatum L. and its variety, 6 positions for B. chinense DC., 49 positions for B. scorzonerifolium Willd., 8 positions for B. euphorbioides Nakai, 7 positions for B. longiradiatum Nakai and 9 positions for B. latissimum Nakai. These sequence differences at corresponding positions are avaliable nucleotide markers to determine the botanical origins of Bupleuri Radix. Moreover, we confirmed the phylogenetic relationship of B. latissimum Nakai, a Korean endemic speices, among Bupleurum species based on the rDNA-ITS sequence. Conclusions : These marker nucleotides would be useful to identify the official herbal medicines by the providing of definitive information that can identify each plant species and distinguish it from unauthentic adulterant Bupleurum species.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제27권4호
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• pp.466-472
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• 2012

식품 중 P. mirifica 원료 함유여부에 대한 판별법 마련을 위하여 식물의 종 동정에 일반적으로 사용되는 ribulose bisphosphate carboxylase (rbcL), RNA polymerase C (rpoC1), intergenic spacer (psbA-trnH) 및 second internal transcribed spacer (ITS2) 유전자부위를 선정하였다. 선정된 유전자부위를 증폭하기 위하여 일반 프라이머를 이용하였으며 각각 719 bp, 520 bp, 348 bp 및 507 bp의 PCR 산물을 확인하였다. 그리고 염기서열을 결정하고 유전자은행에 등록되어있는 염기서열과 유사성에 대한 분석한 결과 rbcL, rpoC1 및 psbA-trnH 부위는 상동성이 매우 높아 프라이머를 설계하기는 어려웠다. 그러나 ITS2의 경우 염기서열의 차이점이 있어 4종류의 프라이머를 설계하였다. 설계된 프라이머를 이용하여 P. mirifica, P. lobata, B. superba에 대한 PCR을 실시한 결과 SFI12-miri-6F/SFI12-miri-7R 및 SFI12-miri-6F/SFI12-miri-8R의 경우 P. lobata 와 B. superba에서 비 특이적 밴드가 없으며 P. mirifica에서 예상크기인 137 bp 및 216 bp를 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구에서 개발된 P. mirifica을 판별할 수 있는 종 특이 프라이머는 식품가능원료 및 가공식품에 대한 적용할 수 있어 인터넷 쇼핑몰 등 시중에 불법적으로 유통되는 제품에 대한 안전관리에 활용도가 매우 클 것으로 기대된다.

• 미생물학회지
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• 제44권2호
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• pp.147-155
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• 2008

한국의 시화호와 중국의 Aha호 저질토에서 서식하는 황산염 환원세균(sulfate reducing bacteria, SRB)의 깊이에 따른 군집구조를 비교하기 위하여, 이화성 아황산염 환원효소(EC 1.8.99.1; dissimilatory sulfite reductase, dsr) 유전자를 대상으로, polymerase chain reaction (PCR), denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) 및 클론 라이브러리를 이용하여 미생물의 군집구조를 분석하였다. DGGE band 양상을 분석한 결과, Aha호 보다는 시화호에서 더 맡은 밴드를 보여 다양성이 높았고, 깊이별 차이는 나타나지 않았다. 두 서식지에서 얻은총68개 클론의 염기서열을 가지고 계통학적 분석을 한 결과 시화호에서는 Deltaproteobacteria 그룹, Firmicutes 그룹에 속해있는 Desulfotomaculum 종과 archaeal thermophilic SRB 그룹에 속해있는 Archaeoglobus 종이, Aha호에서는 Desulfotomaculum 그룹과 유사성이 높았다. 분리된 대부분의 클론들(59%)은 배양된 황산염 환원세균과는 매우 낮은 유사도를 보였고, 환경에서 분리된 클론들과도90% 이하의 유사도를 나타냈다. 총 클론을 88% 유사도를 기준으로 9그룹으로 나뉘었을 때 시하호와 Aha호의 각 클론은 서로 다른 그룹으로 존재하였다. 이러한 결과는 두 서식지의 이화성 아황산염 환원효소를 가지고 있는 미생물의 군집구조는 확연히 다르고 각 서식지에 특이적인 황산염 환원 미생물이 존재함을 시사한다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제32권4호
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• pp.254-261
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• 2017

상업적으로 유통되는 젤라틴 캡슐 제품은 소비자의 건강(예: 광우병) 및 종교적 신념에 대한 우려를 야기시킬 수 있다. 젤라틴은 대부분 소, 돼지 등에서 유래한 원료물질을 가공한 것으로서, 가공 후 그 원료 물질을 분석하는 것은 대단히 어렵다. 따라서 정부 규제기관의 표시사항 준수여부 모니터링 연구가 주기적으로 필요하다. 본 연구에서는 인터넷에 유통되는 건강기능식품(n = 181)을 대상으로 젤라틴 캡슐의 원료 물질을 종 특이 PCR 방법으로 분석했다. 55개 제품의 경우 표시사항에 젤라틴 캡슐원료 물질에 대한 정보를 명시하였으나(예: bovine-, fish-and plant-derived gelatin), 126개 제품의 경우 사용 원료에 대한 정보 없이 "gelatin"으로 표시하였다. 이 126개 제품의 젤라틴 캡슐 분석 결과 51개 제품은 소 유래의 젤라틴을, 31개 제품은 돼지 유래의 젤라틴을, 그리고 44개 제품은 소와 돼지의 원료를 혼합하여 제작한 블렌딩 젤라틴을 사용한 것으로 밝혀졌다. 따라서 소비자의 알 권리, 종교적 신념 및 건강을 보호하기 위해 젤라틴 캡슐에 사용된 원료 물질을 표시사항에 제공하는 것은 매우 중요하다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제21권2호
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• pp.167-176
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• 2008

Galectins are a group of animal lectins consisting of galectin-type carbohydrate recognition domains (CRD) with relatively minor domains. The biological properties of galectins include the regulation of inflammation, intercellular adhesion, cell differentiation and cell death. The diverse kinds of galectin suggest variety in their biological roles. Galectin-1 is released during adipocyte differentiation and is associated with fat which is one of the important factors for meat quality. To verify expression level, a 0.5 kb clone of galectin-1 was obtained from cDNA prepared from back fat tissue of a Sancheong Berkshire pig with good quality meat, and the galectin-1 gene identified. The deduced amino acid sequence of the galectin-1 gene was compared with those obtained from other species. By using RT-PCR and Real time-PCR, an attempt was made to determine the expression level of galectin-1 and to compare with various tissues (tenderloin and back fat) taken from pigs in different groups. Grouping of pigs was based on growth-stage (weighing 60, 80, and 110 kg) and the sub-speciation (Yorkshire and Sancheong Berkshire pigs). We attempted to determine influences of pig species, growth stages and tissue variations on the expression level of the galectin-l gene and it was revealed that the expression pattern of the galectin-1 gene was significantly different (p<0.01 or p<0.05). Galectin-1 genes were expressed more highly in the back fat tissues of pigs weighing 110 kg than in those weighing 60 kg or 80 kg. However, the lowest expression was seen in the tenderloin tissues of pigs weighing 110 kg. Sancheong Berkshire pigs showed higher expression of the galectin-1 gene compared to Yorkshire pigs. Accordingly, it is considered that the expression pattern of the galectin-1 gene influences the growth of back fat tissues and the pig speciation relationship. Previous studies suggested that different expression of galectin-1 genes represents variety among the breeds and is closely related to fat tissue growth, conjugation and catabolism. Further, this study suggests that the expression of galectin-1 at a specific growth stage and tissue contributes significantly to the overall meat quality of Sancheong Berkshire pigs.

• 한국양식학회지
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• 제20권3호
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• pp.199-202
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• 2007

본 연구에서는 넙치(Paralichthys olivaceus) 정소로부터 DMRT-1 partial cDNA를 분리하였다. 넙치 DMRT-1은 317개의 염기로 구성되어 있으며, Atlantic halibut, 감성돔 및 무지개 송어와 각각 94%, 85%, 82%의 높은 상동성을 보였다. RT-PCR을 이용하여 DMRT-1 mRNA 발현은 난소보다 정소에서 높게 나타난 것을 관찰할 수 있었다. 또한, 암컷 넙치에 웅성호르몬인 testosterone 처리시 처리 농도에 따라 난소에서 DMRT-1 mRNA 발현이 증가함을 볼 수 있었다. 따라서, DMRT-1은 수컷에서 특이적으로 발현되는 유전자임을 알 수 있으며, 본 연구의 결과는 넙치의 성 전환 및 유도에 대한 기초자료를 제공할 것이다.