The number of colonies often decreased more than would be expected in a dilution from 1:50 to 1:100; however, a lack of agreement between the dilution series and the number of colonies obtained also occurred at higher dilutions. In the experiments with each soil subsample, there was sometimes poor agreement between the number of colonies obtained at the same dilution from the A and B subsamples. However, repeated 1:50 dilutions of soil suspensions of subsamples A and B yielded similar numbers of colonies. In the second experiment series conducted with a second composite soil sample, the number of colonies obtained from each soil subsample decreased following air drying. The results suggest that it was difficult to obtain a uniform distribution of Pythium propagules in the two sugarcane field soils tested. The high number of propagules detected at the 1:50 dilution could have been due to hyphal fragments or connected hyphal swellings that separated during the final mixing or during plating.
Alachlor, 2-chloro-2, '6'-diethyl-N-(methoxymethyl) acetanilide, which had been incubated in the flooded paddy soils yielded 1-formyl-2,3-dihydro-7-ethylindole, 2,6-diethylaniline, 2,6-diethylacetanilide, 2,6-diethyl-N-(methoxymethyl) acetanilide, 2-hydroxy-2, '6'-diethyl-N-(methoxymethyl) acetanilide, and three unidentifiable compounds as its degradation products. The water-soluble products of Alachlor in soil suspensions increased with incubation periods and similar results were obtained from the incubation of Rhizoctonia solani, as verified by use of the ring $-^{14}C-$labeled Alachlor. Streptomyces lavendulae Ru 3340-8 produced 2-hydroxy-2, '6'-diethyl-N-(methoxymethyl) acetanilide as the major degradation product as much as 25%, whereas Bacillus brevis IFO 3331, Bacillus cruciviae, and Pseudomonas putida did not produce it.
Proceedings of the Korean Society of Plant Pathology Conference
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2003.10a
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pp.106-107
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2003
The effect of biological control agent Bacillus sp. (BAC03-3-1, BAC03-3-2, BAC02-4) on pre- and postemergence Sclerotinia rot of perilla (Perilla frutescens var. japonica) caused by Sclerotinia sclerotiorum was determined from greenhouse field trials. The ability of this antagonist to reduce germination of sclerotia of S. sclerotiorum was also evaluated. In the greenhouse, suspension of BAC03-3-1 application as root drench of perilla, which provided as little as 10$\^$7/ cells/ $m\ell$ per gram of soil, significantly increased plant stand in pathogen-infested soil over that in the untreated control. All three isolates reduced the germination of sclerotia of S. sclerotiorum in loamy sand soils in the greenhouse. In loamy sand amended with rice bran the sclerotial germination was inversely correlated (r = -0.79) with perilla stand in the greenhouse. However, a higher rate of bacterial suspension with rice bran(Ig dwt./100g soil) than that applied with bacterial suspensions only was necessary to achieve a comparable reduction in sclerotial germination. In field study, all three isolates added to soil to provide 10$\^$7/ cells/$m\ell$ per gram significantly prevented Sclerotinia rot (73-85%) after 35 days of growth. The isolate BAC02-4, BAC03-3-1 and BAC03-3-2 gave final stands of 65 to 75, 60 to 70, and 55 to 60%, respectively. The addition of rice bran(1 %) to loamy sand in the field resulted in a 10-fold increase in propagule numbers of the three isolates within 10 days of application.
An efficient somatic embryogenesis and plant regeneration protocol was developed for Schisandra chinensis Baill, using embryogenic cell suspensions and optimized media conditions. Friable embryogenic callus was induced from cotyledonary leaf and hypocotyl explants of 7 days old seedlings on MS agar medium supplemented with 1.0 to $4.0\;mg\;l^{-1}$ of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). Fast growing and well dispersed embryogenic cell suspensions were developed within two months when embryogenic calli were transferred to MS liquid medium containing $1.0\;mg\;l^{-1}\;2,4-D$. One third strength of MS medium was the best for both overall growth and development of somatic embryos in liquid culture. Over 3400 viable somatic embryos were produced from each 150 ml flask with an initial cell density of 30 mg in 30 ml medium. Germinated somatic embryos developed in liquid medium converted into plantlets after transferred to half-strength MS semi-solid medium. Approximately 90% of the converted plantlets were successfully transplanted to soil and grew into fertile plants.
Biological amendments consisting of suspensions of selected microorganisms are often used in conjunction with various organic materials for amending soils to improve soil quality and plant growth. The effects of the biological amendment on chemical and biological properties of soil were investigated for a biological amendmentalone and when combined with different organic materials includingmunicipal compost (MC), poultry litter (PL), and cover crops (red clover (RC) and spring oats). A liquid preparation of a biological amendment called Effective Microorganisms was sprayed on the tested plots three times over a two-year period. Effective Microorganisms alone did not influence pH, K, or organic matter content in soil. However, increases in P in PL-treated soils in fall of both years andCa in MC-treated soil in fall 2001, and decreases in Ca, Mg, and cation exchange capacity (CEC) in RC-planted soil were associated with EM. Increased dehydrogenase(DH) activitiesassociated with Effective Microorganismswere only detected in July (P=0.0222) and October (P=0.0834) for RC-planted soils in the first year. Fluorescein diacetate (FDA) hydrolysisappeared to be enhanced by Effective Microorganisms in soils untreated or treated with MC and oatsbut only sporadically during the sampling period. FDA hydrolysis in both PL- and RC-treated soils as well as DH activity in PL-treated soils decreased with Effective Microorganisms treatment. Effective Microorganisms did not influence substrate utilization patterns expressed by the BIOLOG assay. We conclude that Effective Microorganisms effects on soil chemical and biological properties varied depending on the added organic materials. Effective Microorganisms periodically increased soil DH activity and FDA hydrolysis with RC and with MC plus oats, respectively.
Since July 2005, survey of chestnut ink disease was carried out in chestnut stands located at southern parts of Korea. Dead chestnut trees showing inky ooze on necrotic trunks were found in two different locations. In order to isolate and identify the causal fungus, infected tissues and soil samples around dead or dying trees were collected and placed on Phytophthora-selective medium. Rhododendron and chestnut tree leaves were used as a bait to isolate the fungus from soil samples by attracting zoospores in soil suspensions. On V-8 culture medium, the isolates produced homothallic oogonia with protuberances ($34.0-46.2{\times}21.9-26.7{\mu}m$) abundantly, but did not produced sporangia. Mass production of sporangia was possible by immersing agar plugs with actively growing mycelium in the creek water at $18^{\circ}C$ for 3 days. Sporangia were papillate, and ovoid to obpyriform ($17.0-38.9{\times}14.6-29.2{\mu}m$) in shape. Comparison of the ITS sequences revealed that the isolates had 100% identity to the P. katsurae isolates from Japan and New Zealand and 99.6% identity to other P. katsurae isolates. All of the examined isolates from Korea were completely identical to each other in ITS sequence. Numerous sporangia were formed in filtered as well as unfiltered creek water, but no sporangia formed in sterilized distilled water. Light induced sporangia formation, but has no influence on oospore formation. Amendments of ${\beta}$-sitosterol in culture media have no significant effect on mycelial growth but significantly stimulate oospore and sporangia formation.
We evaluated cultivation methods to obtain pure cultures of previously uncultivated bacteria from soil. Soil bacteria (suspensions) were inoculated onto various oligotrophic media with one of the following additives: 1) soil extract; 2) anthraquinone disulfonate (humic acid analogue); 3) acyl homoserine lactones (quorum-signaling compounds); 4) catalase (for the protection of bacteria from exogenous peroxides). After the relatively long period (60 days) of incubation with elevated concentrations of $CO_2$ (5%, v/v), the media containing catalase showed the highest colony count. We purified 147 randomly selected colonies from the media and the isolates were subjected to the phylogenetic analyses of their 16S rRNA gene sequences. Phylogenetic analysis revealed that approximately 30% of the isolates might belong to novel species or novel family, suggesting that the media and incubation conditions used could be useful for the cultivation of as-yet-uncultured bacteria. Especially, bacteria belonging to the phylum Acidobacteria, ubiquitous bacterial taxon known as an uncultured bacterial group (at least difficult to culture from environmental samples), were successfully cultured in this study.
A laboratory experiment was conducted to study the induction of constricting rings and test predation of Dactylaria brochopaga isolates against second stage juveniles (J2s) of Meloidogyne graminicola. Among the five fungal isolates, isolate D showed the greatest number of predatory rings and, consequently, trapped the maximum number of M. graminicola J2s in dual cultures. Another pot experiment was conducted to study the effect of D. brochopaga (isolate D) on the management of wheat root-knot disease. Applying a mass culture (10 g/pot) and a spore suspension of the fungus with and without cow dung manure to soil infested with 2,000 M. graminicola juveniles significantly improved plant height, root length, weights of shoots, roots, panicles and grains per hill compared to those in the control. Moreover, the fungus significantly reduced the number of root-knots, the number of egg masses, juveniles, and females per hill compared to those in the control. Bio-efficacy of the fungus was heightened when the mass culture and a spore suspensions were used in combination with cow dung manure to improve the plant growth parameters and reduce the number of root-knot and reproductive factors. Further investigations should be conducted to identify the impact of this fungus in the field.
Although, microbial arsenic mobilization by dissimilatory arsenate-reducing bacteria (DARB) and the practical use to the removal technology of arsenic from contaminated soil are expected, most previous research mainly has been focused on the geochemical circulation of arsenic. Therefore, in this review we summarized the previously reported DARB to grasp the characteristic for bioremediation of arsenic. Evidence of microbial growth on arsenate is presented based on isolate analyses, after which a summary of the physiology of the following arsenate-respiring bacteria is provided: Chrysiogenes arsenatis strain BAL-$1^T$, Sulfurospirillum barnesii, Desulfotomaculum strain Ben-RB, Desulfotomaculum auripigmentum strains OREX-4, GFAJ-1, Bacillus sp., Desulfitobacterium hafniense DCB-$2^T$, strain SES-3, Citrobacter sp. (TSA-1 and NC-1), Sulfurospirillum arsenophilum sp. nov., Shewanella sp., Chrysiogenes arsenatis BAL-$1^T$, Deferribacter desulfuricans. Among the DARB, Citrobacter sp. NC-1 is superior to other dissimilatory arsenate-reducing bacteria with respect to arsenate reduction, particularly at high concentrations as high as 60 mM. A gram-negative anaerobic bacterium, Citrobacter sp. NC-1, which was isolated from arsenic contaminated soil, can grow on glucose as an electron donor and arsenate as an electron acceptor. Strain NC-1 rapidly reduced arsenate at 5 mM to arsenite with concomitant cell growth, indicating that arsenate can act as the terminal electron acceptor for anaerobic respiration (dissimilatory arsenate reduction). To characterize the reductase systems in strain NC-1, arsenate and nitrate reduction activities were investigated with washed-cell suspensions and crude cell extracts from cells grown on arsenate or nitrate. These reductase activities were induced individually by the two electron acceptors. Tungstate, which is a typical inhibitory antagonist of molybdenum containing dissimilatory reductases, strongly inhibited the reduction of arsenate and nitrate in anaerobic growth cultures. These results suggest that strain NC-1 catalyzes the reduction of arsenate and nitrate by distinct terminal reductases containing a molybdenum cofactor. This may be advantageous during bioremediation processes where both contaminants are present. Moreover, a brief explanation of arsenic extraction from a model soil artificially contaminated with As (V) using a novel DARB (Citrobacter sp. NC-1) is given in this article. We conclude with a discussion of the importance of microbial arsenate reduction in the environment. The successful application and use of DARB should facilitate the effective bioremediation of arsenic contaminated sites.
Significant reduction in disease severity of bacterial wilt (Pseudomonas solanacearum) on the susceptible tobacco cultivar BY 4 was observed until mid-July in a naturally infested field when bacterial suspensions of avirulent isolate were applied to tobacco root zones at one day before and fourty days after transplanting into the field. However, rapid increase in disease severity after mid-July resulted in the same severity $(70\%)$ as on cultivar BY 4 without the application of the avirulent bacterial suspension at the end of the season. Yield increase in cultivar BY 4 was $35\%$ due to the treatment, resulting in $10\%$ price increase. The suppression me chanism did not appear to be dependent upon the inhibition of the virulent bacterial multiplication by the avirulent bacteria in tobacco rhizosphere soil because of no significant difference in the density of the patho genic bacteria between treated and untreated plant root zones. However. penetration of the virulent bacteria into the root systems and their multiplication in tobacco stem were inhibited remarkably by preinoculation with avirulent one, suggesting that those are related to the suppression of disease incidence.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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