• IMMUNE NETWORK
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• 제6권3호
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• pp.117-122
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• 2006

Background: Caveolin, a family of integral membrane proteins are a principal component of caveolae membranes. In this study, we investigated the effect of p38 kinase on differentiation and on inflammatory responses in sodium nitroprusside (SNP)-treated chondrocytes. Methods: Rabbit articular chondrocytes were prepared from cartilage slices of 2-week-old New Zealand white rabbits by enzymatic digestion. SNP was used as a nitric oxide (NO) donor. In this experiments measuring SNP dose response, primary chondrocytes were treated with various concentrations of SNP for 24h. The time course of the SNP response was determined by incubating cells with 1mM SNP for the indicated time period $(0{\sim}24h)$. The cyclooxygenase-2 (COX-2) and type II collagen expression levels were determined by immunoblot analysis, and prostaglandin $E_2\;(PGE_2)$ assay was used to measure the COX-2 activity. The tyrosine phosphorylation of caveolin-1 was determined by immunoblot analysis and immunostaining. Results: SNP treatment stimulated tyrosine phosphorylation of caveolin-1 and activation of p38 kinase. SNP additionally caused dedifferentiation and inflammatory response. We showed previously that SNP treatment stimulated activation of p38 kinase and ERK-1/-2. Inhibition of p38 kinase with SB203580 reduced caveolin-1 tyrosine phosphorylation and COX-2 expression but enhanced dedifferentiation, whereas inhibition of ERK with PD98059 did not affect caveolin-1 tyrosine phosphorylation levels, suggesting that ERK at least is not related to dedifferentiation and COX-2 expression through caveolin-1 tyrosine phosphorylation. Conclusion: Our results indicate that SNP in articular chondrocytes stimulates dedifferentiation and inflammatory response via p38 kinase signaling in association with caveolin-1 phosphorylation.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제26권2호
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• pp.203-211
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• 1999

목적: 일산화질소 (nitric oxide; NO)는 생식계를 비롯한 여러 생체내 기관에서 다양하고도 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 있으며, 복강액은 난관내강과 연결되어 복강액 내의 세포 성분의 변화는 난관의 미세환경을 변화시켜 수정과 초기 배아 발생에 영향을 줄 수 있다. 본 연구는 배아 발생에 있어서 일산화질소의 역할을 이해하고 복강액 내의 NO농도 변화가 배아 발생에 미치는 역할을 조사하기 위해 수행되었다. 방법: 과배란시킨 1세대 잡종 암컷 생쥐 (C57BL${\times}$CBA/Ca)로부터 1세포기 배아를 얻어 10% synthetic serum substitute가 첨가된 modified human tubal fluid 배양액에서 4일 동안 체외배양하였다(대조군). 실험을 위해 이러한 배양조건에 sodium nitroprusside (SNP)를 $0{\sim}1mM$의 다양한 농도로 배양초기부터 첨가하거나, $200{\mu}M$ SNP를 2-, 4-, 8-세포기의 각기 다른 배아시기에 첨가하였으며, 복강경수술을 받는 42명의 여성으로부터 채취한 복강액을 SSS대신 단백질원으로 사용하여 포배아까지의 배아 발달율을 관찰하였으며, 복강액 내의 NO농도를 Griess방법에 의해 측정하였다. 배아의 apoptotic body는 H33342 염색법으로 조사하였으며 배아 발달율은 3회 이상 반복 실험한 결과의 mean${\pm}$SEM으로 나타내었다. 결과: SNP는 농도에 의존적으로 배발생을 억제하였으나 배아 단계에 대한 특이성은 관찰할 수 없었으며, 특히 $100{\mu}M$ 이상의 고농도의 SNP는 2-세포기 단계에서 배아 발생을 정지시켰다. 또한 단백질원으로 복강액 이용시 배 발생율은 복강액 내의 NO 농도에 따라 현저한 차이가 발견되었으며, $2.5{\mu}M$이상의 NO를 함유한 복강액에서 배양한 배아의 발생율은 현저하게 감소하였다. cGMP analogue인 8-bromo-cGMP를 배양액에 첨가시 배아 발생에는 변화가 없었으며, SNP에 의해 배발생이 정지된 2-세포기 배아에서 apoptotic body를 발견할 수 없었다. 결론: 이상의 결과로 보아 NO는 고농도에서 배아 발생을 저해하며, 복강액 내의 NO와 같은 성분의 변화는 배아 발생에 유해한 효과를 유발할 것으로 사료된다. 이러한 NO의 배아 발생 억제효과는 cGMP로 중재되는 경로나 apoptosis유발과는 관계가 없는 것 같다.

• Animal cells and systems
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• 제4권2호
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• pp.151-155
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• 2000

Nitric oxide (NO) is a reactive free radical which plays important roles in animal physiology. To investigate involvement of NO in acrosome reaction (AR), effects of drugs which modulate the intracellular NO level were examined in mouse spermatozoa. N (G)-nitro-L-arginine (L-NA), a potent inhibitor of NO synthesis, decreased AR in a reversible manner, On the other hand, sodium nitroprusside (SNP), an NO generating agent, increased spontaneous AR. Preincubation of sperm in the presence of L-NA potentiated AR after sperm transfer into plain- or SNP-media. Methylene blue, a NO scavenging agent, decreased spontaneous AR. Taken together, it is concluded that NO positively controls AR.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제24권9호
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• pp.1204-1210
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• 2011

Objective of this study was to examine the effect of sodium nitroprusside (SNP), a nitric oxide (NO) donor on steroid synthesis, growth and apoptosis of buffalo granulosa cells (GCs) in vitro. Follicular fluid of antral follicles (3-5 mm diameter) was aspirated and GCs were cultured in 0 (control), $10^{-3}$, $10^{-5}$, $10^{-7}$, $10^{-9}\;M$ of SNP for 48 h. To evaluate whether this effect was reversible, GCs were cultured in presence of $10^{-5}\;M$ SNP+1.0 mM $N^{\omega}$-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) a NO synthase (NOS) inhibitor or hemoglobin (Hb, $1.0{\mu}g$) as NO scavenger. Nitrate/nitrite concentration was evaluated by Griess method, progesterone and estradiol concentrations by RIA and apoptosis by TUNEL assay. SNP ($10^{-3}$, $10^{-5}$, $10^{-7}\;M$) significantly (p<0.05) inhibited estradiol and progesterone synthesis, growth, disorganized GCs aggregates and induced apoptosis in a dose dependent manner. However, $10^{-9}\;M$ SNP induced the progesterone synthesis and stimulated GCs to develop into a uniform monolayer. Combination of SNP $10^{-5}$ M+L-NAME strengthened the inhibitory effect while, SNP+Hb together reversed these inhibitory effects. In conclusion, SNP at greater concentrations ($10^{-3}$, $10^{-5}$ and $10^{-7}\;M$) has a cytotoxic effect and it may lead to cell death whereas, at a lower concentration ($10^{-9}\;M$) induced progesterone synthesis and growth of GCs. These findings have important implications that NOS derived NO are involved at physiological level during growth and development of buffalo GCs which regulates the steroidogenesis, growth and apoptosis.

• Journal of Acupuncture Research
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• 제21권5호
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• pp.179-190
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• 2004

Objectives : The purpose of this study was to investigate the effect of Bee Venom and Melittin acupuncture solution on the lipopolysaccharide and sodium nitroprusside- induced expression of cytosolic phospholipase $A_2$, tumor necrosis factor-${\alpha}$ and calcium concentration in RAW 264.7 cells, a murine macrophage cell line. Methods : The expression of cytosolic phospholipase $A_2$ and tumor necrosis factor-${\alpha}$ was determined by western blotting with corresponding antibodies, and the generation of intracellular calcium concentration was investigated by delta scan system in RAW 264.7 cells. Results : 1. Compared with control, expressions of lipopolysaccharide-induced cytosolic phospholipase $A_2$ were decreased significantly by $5{\mu}g/mL$ of bee venom and 5, $10{\mu}g/mL$ of melittin acupuncture solution and decreased by 0.5, $1{\mu}g/mL$ of bee venom. 2. Compared with control, expressions of sodium nitroprusside-induced phospholipase $A_2$ were decreased significantly by 0.5, 1, $5{\mu}g/mL$ of bee venom and by 5, $10{\mu}g/mL$ of melittin acupuncture solution. 3. Compared with control, expressions of lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor-${\alpha}$ were decreased significantly by $10{\mu}g/mL$ of melittin acupuncture solution and were not changed significantly by 0.5, 1, $5{\mu}g/mL$ of bee venom and $5{\mu}g/mL$ of melittin acupuncture solution. 4. Compared with control, expressions of sodium nitroprusside-induced tumor necrosis factor-${\alpha}$ were decreased significantly by 1, $5{\mu}g/mL$ of bee venom and 5, $10{\mu}g/mL$ of melittin acupuncture solution and decreased by $0.5{\mu}g/mL$ of bee venom 5. Compared with control, lipopolysaccharide-induced intracellular calcium concentrations were decreased by 0.5, 1, $5{\mu}g/mL$ of bee venom and $10{\mu}g/mL$ of melittin acupuncture solution and increased by $5{\mu}g/mL$ of melittin acupuncture solution. 6. Compared with control, sodium nitroprusside-induced intracellular calcium concentrations were decreased by 0.5, 1, $5{\mu}g/mL$ of bee venom and 5, $10{\mu}g/mL$ of melittin acupuncture solution.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제4권2호
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• pp.203-213
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• 2000

본 연구에서는 반응성 산소족이 수정능력획득, 칩체반응에 미치는 영향을 알아보고자 반응성 산소족으로 superoxide anion은 xanthine (X) -xanthine oxidase (XO) system을, hydroperoxide는 $H_2O$$_2$를 농도별로 처 리하였으며, nitric oxide (NO)는 NO donor인 sodium nitroprusside (SNP)를 처리하였다 또한 남성불임요인의 하나로 알려진 leukocytospermia에 대한 영향을 알아보기 위해 lymphocyte를 농도별로 처리하였고, 일반적인 배양기내 산소농도인 20% $O_2$농도를 생체내 농도와 유사한 5% $O_2$ 농도로 낮추었을 때 의 결과를 알아보고자 하였다. 수정능력 획득 정도와 첨체반응률을 알아보기 위해 chlortetracycline (CTC) 염색방법을 이용하였다. 지질과산화 정도는 정자내 malondialdehyde (MDA)의 생성량을 흡광기를 이용하여 정량하였다. $H_2O$$_2$, X-XO, SNP와 lymphocyte 처리군은 1시간 배양시에 수정능력획득률이 유의하게 증가하였으나, 저산소처리군에서는 차이가 없었다. 저 농도의 $H_2O$$_2$를 처리한 경우에는 지질과산화 정도가 감소하였으나, 고 농도에서는 대조군에 비해 유의하게 증가하였다. 고 농도의 Iymphocyte를 처리한 경우에는 1시간 처리시에 지질과산화가 유의하게 증가하였으나, 처리된 산소농도에 따른 지질과산화의 차이는 없었다. 첨체반응률의 경우, 처리한 모든 반응성 산소족에서 대조군에 비해 높은 첨체반응률을 확인하였다. X(100 $\mu$M)-XO(100mIU)의 경우가 가장 높은 첨체반응률을 나타내었다. 이러한 결과들은 반응성 산소족이 수정능력획득, 지질과산화 그리고 첨체반응에 영향을 미치는 것을 확인하여 주었다. 또한 반응성 산소족이 생성된 경우에 수정능력획득이 보다 빠르게 진행되어지는 것은 반응성 산소족이 정자의 과운동성과 수정능력획득의 중요한 조절자임을 시사한다고 사료된다.

• 미생물학회지
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• 제52권1호
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• pp.1-9
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• 2016

치오레독신 환원효소(TrxR)를 encoding하는 Schizosaccharomyces pombe의 유일한 $TrxR^+$ 유전자는 스트레스 반응 전사인자인 Pap1의 매개에 의하여 스트레스 유발 인자들에 의하여 양성적으로 조절됨이 발견되었다. 본 연구에서는, TrxR 과잉 발현 재조합 플라스미드 pHSM10을 사용하여 S. pombe TrxR의 방어적 역할들이 평가되었다. 과산화수소($H_2O_2$)와 superoxide anion을 생성하는 menadione (MD)의 존재 하에서, S. pombe TrxR은 세포성장과 총 글루타치온 (GSH) 수준을 증강시키나, 세포 내 활성산소종(ROS) 수준은 감소시켰다. $H_2O_2$와 MD에 의하여 크게 영향 받지 않는 일산화질소(NO) 수준에는 유의성 없는 효과를 보였다. S. pombe TrxR은 sodium nitroprusside(SNP)에 의하여 생성되는 NO를 소거할 수 있었으나, SNP에 노출된 세포들의 성장, ROS 수준이나 총 글루타치온 수준에는 영향을 보이지 않았다. S. pombe TrxR은 질소 결핍(nitrogen starvation)에 의하여 감소되는 세포 성장 및 총 글루타치온 수준을 증가시키며, 질소 결핍에 의하여 생성되는 ROS와 NO를 소거하였다. 요약하건대, S. pombe TrxR은 산화적, 일산화질소 및 영양 스트레스로부터 효모 세포를 보호하지만, 공통적인 기전에 의하지는 않는다.

• 생명과학회지
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• 제13권6호
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• pp.903-910
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• 2003

Phosphipase D(PLD)는 호중구의 활성에서 중요한 신호전달 인자로 작용한다. 본 연구에서는 호중구에서 PLD의 활성화에 대한 nitric oxide(NO)와 cGMP의 영향을 조사하였다. 세포 내 NO의 생성을 증가시키는 물질인 sodium nitroprusside (SNP)를 단독으로 처리하였을 때 SNP를 처리하지 않은 세포에 비교하여 PLD 활성은 0.5 mM 농도에서 2배 이상 증가하였다. 세포 내 cAMP의 농도를 증가시키는 물질인 dibutyryl-cAMP를 처리하였을 때 formyl-Met-Leu-Phe(fMLP)에 의한 PLD활성은 억제되었으나 cGMP를 증가시키는 물질인 8-bromo-cGMP(300 $\mu$M)를 단독으로나 fMLP와 같이 처리하였을 때 PLD의 활성은 큰 영향이 없었다. NO에 의한 PLD의 활성은 cGMP-의존형 인산화 효소인 protein kinase G(PKG)의 억제제인 KT 5823에 의하여 억제되지 않았는데 이러한 결과는 PKG 이외의 경로를 통하여 일어남을 제시한다. NO를 처리한 호중구에서 p38 mitogen activated protein kinase(MAPK)가 활성화되어 인산화된 p38 MAPK가 Western blot에서 증가되었다. NO에 의한 p38 MAPK의 인산화는 KT 5823에 의하여 억제되지 않았고 PLD 억제제인 n-butanol에 의하여도 영향을 받지 않았다. PLD 활성의 인자인 RhoA는 fMLP나 phorbol myristate acetate(PMA)의 자극에 의하여 세포질로부터 세포막으로 전이가 되었으나 cGMP의 전처리에 의하여 fMLP에 의한 RhoA의 전이는 억제되었으나 PMA에 의한 전이는 영향을 받지 않았다. 이들 결과들은 호중구 내 증가된 cGMP가 RhoA를 억제하였으나 세포 내 증가된 NO는 cGMP 이외의 인자를 통하여 PLD의 활성화를 일으킨다는 것을 제시하고 있다.

• 미생물학회지
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• 제52권2호
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• pp.236-241
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• 2016

탈유비퀴틴 효소 중 PPPDE 상과에 속하는 Schizosaccharomyces pombe의 $sdu1^+$ 유전자가 유비퀴틴 C-말단 가수분해 효소 활성을 갖는 단백질을 인코딩하고, 산화적 및 일산화질소 스트레스 방어에 관여함이 이전에 밝혀진 바 있다. 예비적인 본 연구는 정상적인 및 과잉발현의 조건에서 S. pombe 유비퀴틴 C-말단 가수분해 효소 활성의 활성산소종 의존성 조절에 초점을 맞추었다. 과산화수소, 수퍼옥사이드 라디칼 생성하는 메나디온 및 일산화질소 생성하는 sodium nitroprusside (SNP)에 노출시킨 S. pombe 세포에서 유비퀴틴 C-말단 가수분해 효소 활성이 감소되었다. 환원형 글루타치온과 그 전구체인 N-acetylcysteine은 과산화수소의 존재 유무에 상관없이 유비퀴틴 C-말단 가수분해 효소 활성을 현저하게 증강시켰다. 그러나, 과산화수소의 부재 시 혹은 존재 시 활성산소종에 미치는 글루타치온과 N-acetylcysteine의 영향은 같은 조건 하에서의 유비퀴틴 C-말단 가수분해 효소 활성 패턴과 상반되었다. 과잉발현의 유비퀴틴 C-말단 가수분해 효소 활성을 보이는 재조합 플라즈미드 pYSTP를 보유하는 S. pombe 세포에서 유비퀴틴 C-말단 가수분해 효소 활성도 과산화수소, 메나디온 및 SNP에의 노출되는 조건에서 감소되었지만, 벡터 대조 세포에서 보다는 높게 유지되었다. 요약하면, S. pombe 유비퀴틴 C-말단 가수분해 효소 활성은 활성산소종에 의하여 하향조절 되지만, 그 의의는 현재로썬 알려지고 있지 않은 상태이다.

• 대한수의학회지
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• 제35권3호
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• pp.459-469
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• 1995

As S-nitrosothiols were proposed as nitrergic carriers in vascular and nonvascular smooth muscle, we have investigated the relaxant properties of several S-nitrosothiols in the porcine retractor penis(PRP) muscle and compared them with the effects of exogenously added NO, electrical field stimulation(EFS) of NANC nerves and sodium nitroprusside(SNP). Also the influences of oxyhemoglobin and hydroquinone on the relaxant responses were investigated. In addition, effects of NO on membrane potentials and its involvement in the generation of inhibitory junction potential(IJP) were investigated with conventional intracellular microelectrode technique. The results were summerized as follows. 1. Frequency-dependent relaxations of PRP muscle were induced by EFS to NANC nerve. Tetrodotoxin($1{\times}10^{-6}M$) abolished the relaxations of PRP muscle induced by EFS, and L-NAME(($2{\times}10^{-5}M$) and methylene blue($4{\times}10^{-5}M$) inhibited the relaxations. L-NAME-induced inhibition of the relaxations was reversed by L-arginine($1{\times}10^{-3}M$), but not by D-arginine. 2. Exogenous NO($1{\times}10^{-5}-1{\times}10^{-4}M$), sodium nitroprusside(($1{\times}10^{-7}-1{\times}10^{-4}M$) induced dose-dependent relaxations of PRP muscle. All S-nitrosothiols($1{\times}10^{-7}-1{\times}10^{-4}M$) tested relaxed the PRP muscle in dose-dependent manner and the potency order was SNAP>GSNO>CysNO>SNAC. 3. Oxyhemoglobin($5{\times}10^{-5}M$) blocked the relaxation induced by exogenous NO and inhibited EFS-, S-nitrosothiols-, and SNP-induced relaxation. 4. Hydroquinone($1{\times}10^{-4}M$) also abolished the relaxations induced by exogenous NO, and reduced the relaxations induced by S-nitrosothiols, but did not affect EFS- and SNP-induced relaxations. 5. SNP($2{\times}10^{-6}-5{\times}10^{-6}M$) relaxed muscle strips but the membrane potentials were not affected. 6. EFS with several pulses(1ms, 2Hz, 80V) produced an inhibitory junction potential(IJP) with muscle relaxation. They were abolished by TTX($2{\times}10^{-6}M$). $N^G$-nitro-$_{\small{L}}$-arginine(L-NNA, $2{\times}10^{-5}M$) abolished the muscle relaxation, but had no effect on IJP.