• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권2호
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• pp.103-110
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• 2003

그람 양성세균에서 PyrR단백질에 의하여 피리미딘의 생합성이 조절된다는 발견을 바탕으로 하여, Synechocystis sp.PCC6803과 Haemophilus influenzae의 PyrR orthologue 유전자를 Bacillus subtilis에서 형질전환 시켜 피리미딘 생합성의 조절 유무를 조사하였다. Synechocystis sp.PCC6803과 H. influenzae의 PyrR orthologue유전자를 pUC19과 T-vector에 클로닝 한후 pKH1, pKH2, pHPSK1, pHPSK2으로 각각 명명하였다. 이것을 다시 Escherichia. coli와 B. subtiius용 shuttle vector인 pHPS9에 클로닝 하여 pKH3, pKH4, pHPSK3, pHPSK4로 각각 명명하였다. B. subtilis DB104Δ PyrR에 pKH3, pKH4, pHPSK3, pHPSK4을 형질전환후 ATCase 활성을 측정결과 pHPSK3을 가진 균주만 피리미딘에 의한 조절작용이 일어난다는 사실을 통하여, H. influenzae의 PyrR orthologue 유전자의 선도 부분에 조절에 관여하는 미지의 부분이 있음을 예측할 수 있었다. 서로 다른 유래의 PyrR orthologue단백질을 정제하기 위하여 pET14b에 클로닝후 pKH5, pHPSK5으로 각각 명명하였다. SDS-PAGE로 분석한 결과 각각 약 18 kDa과 21 kDa의 분자량을 나타내었다. 정제된 PyrR orthologue 단백질의 UPRTase 활성을 측정한 결과 H. infuenzae의 PyrR orthologue 단백질은 UPRTase 활성을 나타내었으며 다양한 pH에서 측정한 결과 pH 5에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 반면에, Synechocystis sp. PCC6803의 PyrR orhologue 단백질은 UPRTase 활성을 나타내지 않았다. 여러 가지 균주의 PyrR 아미노산 서열을 비교한 계통수 분석은 PyrR 단백질의 조절기작과 어느 정도 연관됨을 시사해 주었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제23권6호
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• pp.837-842
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• 2013

A cryptic plasmid, pMBLR00, from Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides KCTC 3733 was isolated, characterized, and used for the construction of a cloning vector to engineer Leuconostoc species. pMBLR00 is a rolling circle replication plasmid, containing 3,370 base pairs. Sequence analysis revealed that pMBLR00 has 3 open reading frames: Cop (copy number control protein), Rep (replication protein), and Mob (mobilization protein). pMBLR00 replicates by rolling circle replication, which was confirmed by the presence of a conserved double-stranded origin and single-stranded DNA intermediates. An Escherichia coli-Leuconostoc shuttle vector, pMBLR02, was constructed and was able to replicate in Leuconostoc citreum 95. pMBLR02 could be a useful genetic tool for metabolic engineering and the genetic study of Leuconostoc species.

• 한국생물물리학회:학술대회논문집
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• 한국생물물리학회 2001년도 학술 발표회 진행표 및 논문초록
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• pp.51-51
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• 2001

Two open reading frame designated as ylaC and ylaD in the Bacillus subtilis genomic sequencing project, were cloned using pRB374 vector which is shuttle vector in E. coli and B. subtilis. YlaC and YlaD have the sequence homology to SigX and SigW to YbbM, respectively, which are known to be ECF sigmaand anti-sigma factor, respectively.(omitted)

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제32권1호
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• pp.60-66
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• 2004

Paenibacillus polymyxa 유래의 cycloinulooligosaccharide fructanotransferase(CFTase) 유전자(cft)를 Saccharomyces cerevisiae SEY2102 에 발현시키기 위해 대장균과 효모의 shuttle vector인 pYES 2.0(GALI) promoter)에 subcloning하였다. 구축된 pYGCFT(9.9kb) plasmid를 S. cerevisiae SEY2102에 형질전환하였고, uracil이 결핍된 SD 배지에서 선별하였다. 선별된 형질전혼체(S. cerevisiae SEY2102/pYGCFT)는 galactose 첨가에 의해 성공적으로 발현되어 cyclofructan(CF)을 생셩함을 TLC로 확인하였다. 그러나 균체외로의 효소 분비는 이루어지지 않았고 cytoplasm 보다 periplasmic space에 많이 존재하였다. 효소반응 3시간부터 CF가 생성됨을 확인하였고, 최적온도와 pH는 각각 45$^{\circ}C$와 pH 8.0로 나타났으며, pH 10.0에서도 효소활성이 안정적으로 유지되었다. Inulin 기질에 따른 반응산물 분석결과, Jerusalem artichoke와 dahlia tuber로부터 CF가 가장 효과적으로 생성되었다.

• 미생물학회지
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• 제23권1호
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• pp.56-63
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• 1985

Zymomonas Mobilis로 부터 플라스미드를 분리하여 그 특성을 조사하고 E. col i와 Zymomas양쪽에서 모두 복제하는 셔틀벡터를 제조하였다. Zymomonas mobilis의 4 균주로부터 native plasmid를 분리해 본 결과 모든 Zymomonas균주들은 적어도 하나 이상의 플라스미드를 가지고 있었으며 그 크기는 1.7kb에서 46kb사이였다. 숙주균 주를 선정하고자 Zymomonas의 각종 항생물질에 대한 약재내성을 조사한 결과 특히 tetracycline과 chloramphenic col에 아주 민감한 것으로 나타났다. Zymomonas의 플라스미드들간의 염기배열의 유사성을 조사한 결과 ATCC 1 10988과 ZM 1의 플라스미드들간에는 염기배열의 유사성이 있었고 ZM 4와 Agll은 유사성이 없었다. 클로닝벡터로 개발하고자 하는 ATCC 10988의 1.7kb플라스미드를 pZM886이라 명명하고 이 pZM886을 pBR322와 재조합시켜서 pBZ41이라 명명하였다. pBZ41의 제한효소지도를 작성하였다. pBZ41을 이용하여 조사한 결과 Zymomonas의 replicon은 E.coli에서 작동되지 않았으며 pBR322는 또한 Zymomonas내에서 복제되지 않는 것으로 추정되었다. pBZ41을 conjugal mobilization방법으로 E.coli에서 Zymomonas로 옮겼을 때 Conjugation 된 Zymomonas 들은 모두 tetracycline에 저항성을 나타내었으며 안정하게 플라스미드를 유지시켰다.

• BMB Reports
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• 제41권8호
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• pp.604-608
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• 2008

1-Nitropyrene 4,5-oxide and 1-nitropyrene 9,10-oxide are oxidative metabolites that are responsible for the mutagenicity of 1-nitropyrene. In this study, the mutation spectra induced by oxidative metabolites in human cells were determined using a shuttle vector assay. The mutation frequencies induced by 1-nitropyrene 9,10-oxide were 2-3 times higher than those induced by 1-nitropyrene 4,5-oxide. The base substitutions induced by 1-nitropyrene 4,5-oxide were $G{\rightarrow}A$ transitions, $G{\rightarrow}C$ transversions, and $G{\rightarrow}T$ transversions. In the case of 1-nitropyrene 9,10-oxide, $G{\rightarrow}A$ transitions, $G{\rightarrow}T$ transversions, $A{\rightarrow}G$ transitions and $G{\rightarrow}C$ transversions were observed. Most base substitution mutations induced by oxidative metabolites occurred at the guanine sites in the supF gene. These sequence-specific hot spots were commonly identified as 5'-GA sequences for both metabolites. On the other hand, the sequence-specific hot spots at the adenine sites were identified as 5'-CAC sequences for 1-nitropyrene 9,10-oxide. These results suggest that the oxidative metabolites of 1-nitropyrene induce sequence-specific DNA mutations at the guanine and adenine sites at high frequency.

• 농약과학회지
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• 제2권1호
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• pp.91-96
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• 1998

모기에 독성을 보이는 cry11Aa 유전자를 발현시키기 위해 cyanobacteria와 E. coli에서 발현 될 수 있는 두 가지 상이한 벡터 (pCYASK5-1, pCYASK5-2)를 제작하였다. 구축한 두 벡터를 E. coli에 형질전환하여 cry11Aa 유전자의 발현을 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE)와 Western blot analysis을 통해 조사한 결과, pCYASK5-1와 pCYASK5-2으로 형질전환된 E. coli는 각각 72kDa과 64kDa 크기의 cry11Aa 유전자를 발현하였다. 형질전환체의 모기살충성을 조사한 결과, pCYASK5-1과 pCYASK5-2을 가지는 형질전환체는 빨간집 모기유충(Culex pipiens)에 대해 각각 93%, 89%의 치사율을 보였다.

• 한국항공우주학회지
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• 제40권10호
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• pp.853-861
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• 2012

본 논문에서는 주어진 3단형 발사체의 상단부 폐루프 유도 방식 선정을 위해 널리 알려져 있는 Space Shuttle의 PEG 알고리듬보다 유도명령의 형태가 최적화 해에 가까운 Jaggers가 제안한 직접식 유도 방식에 대해서 다루었다. 이 알고리듬을 주어진 발사체의 상단부인 2단 및 3단 비행 구간에 적용할 경우에 대해서 유도 성능을 분석했다. 또한 보다 정밀한 유도를 위해 알고리듬 유도를 위해 사용된 근사식들을 가능한 사용하지 않도록 했으며 원래의 알고리듬에 비해 성능이 개선됨을 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제28권1호
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• pp.14-20
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• 2000

The transformation of Bacillus subtilis K-54 and J-10 was carried out with constructed vectors containing structure and enhancer genes of aprN and prtR, to increase their fibrinolytic enzyme activity. Bands for the aprN and prtR genes were identified from B. subtilis J-10 by PCR that was carried out with the constructed primers for the genes. In addition, the gene fragments contained promoter site based on the results of analysing their nucleotide sequence. The two gene fragments, aprN and prtR, obtained by the PCR, were, then, inserted to vector such as T-vector and E.coli/Bacillus shuttle vector. The constructed vector were designated as pAPR2 (aprN), pENC2 (prtR) and pFLA1 (aprN and prtR), respectively. The constructed vector was used for transformation of the strains of B.subtilis J-10 and B. subtilis K-54 and the fribrinolytic activity of the transformed strains was investigated. The introduction of the vector, pAPR2 and the fibrinolytic activity of the transformed strains was investigated. The introduction of the vector, pAPR2 and pFLA1, resulted in the increase of fibrinolyitic enzyme activity in B. subtilis J-10 by 27.3% and 16%, respectively. However, the introduction of pENC2 to B. subtilis J-10 did not seem to induce increase of the enzyme activity. The strain of B.subtilis K-54 transformed with pENC2 showed an increased fibrinolytic activity by 5 folds compared with that of the original strain of B. subtilis K-54.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제24권11호
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• pp.1503-1509
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• 2014

With the purpose of facilitating the process of stable strain generation, a shuttle vector for integration of genes via a double recombination event into two ectopic sites on the Sulfolobus acidocaldarius chromosome was constructed. The novel chromosomal integration and expression vector pINEX contains a pyrE gene from S. solfataricus P2 ($pyrE_{sso}$) as an auxotrophic selection marker, a multiple cloning site with histidine tag, the internal sequences of malE and malG for homologous recombination, and the entire region of pGEM-T vector, except for the multiple cloning region, for propagation in E. coli. For stable expression of the target gene, an ${\alpha}$-glucosidase-producing strain of S. acidocaldarius was generated employing this vector. The malA gene (saci_1160) encoding an ${\alpha}$-glucosidase from S. acidocaldarius fused with the glutamate dehydrogenase ($gdhA_{saci}$) promoter and leader sequence was ligated to pINEX to generate pINEX_malA. Using the "pop-in" and "pop-out" method, the malA gene was inserted into the genome of MR31 and correct insertion was verified by colony PCR and sequencing. This strain was grown in YT medium without uracil and purified by His-tag affinity chromatography. The ${\alpha}$-glucosidase activity was confirmed by the hydrolysis of $pNP{\alpha}G$. The pINEX vector should be applicable in delineating gene functions in this organism.