곰보버섯(Morchella esculenta)은 맛과 영양이 풍부한 버섯으로 전 세계적으로 분포하는 버섯이다. 현재까지 우리나라에서 곰보버섯에 관한 체계적인 연구가 이루어지지 않은 상태에서 본 연구는 곰보버섯(자실체) 인공대량 생산방법 개발 및 심부배양을 통한 균사체 및 다당체 대량생산 공정개발을 위한 기초자료를 얻고자 shaking flask culture를 이용한 곰보버섯 균사체 배양특성에 관하여 조사하였다. 곰보버섯 균사체의 최적 배양온도는 $25^{\circ}C$이며, 최적 초기 pH는 6.5, 최적배지는 BG 이었다. BG 배지를 기본배지로 하여 영양 요구성 실험을 한 결과 최적탄소원은 fructose이고 최적농도는 5.0% (w/v)이며 질소원 선발 및 최적농도에서는 peptone과 NH$_4$Cl를 혼합하여 사용하였을 때 최대 균사체생육을 보였고, 상기의 두 질소원을 1:1의 무게비로 혼합하여 4.0% (w/v) 농도로 첨가하였을 때 최대 균사생육을 보였다.
Eight strains producing bacterial cellulose (BC) were isolated from rotten fruits and traditionally fermented vinegars. One of the isolated strains from the rotten grape in Gwangju, Korea, maintained a relatively stable BC production in shaking cultures. This isolated strain proved to be Acetobacter xylinum, based on several biochemical and morphological tests. It was shown that the slant-baffled flask was more efficient than the conventional flask for the BC production in shaking cultures. To determine the most suitable carbon and nitrogen sources for the production of BC, various compounds were examined. Fructose was found to be the most effective carbon source with an optimal concentration of 2%. Mixed carbon source (glucose:fructose=1:3) was also better than glucose or fructose alone. Optimal nitrogen source, when basal medium was used, was 10% (v/v) com steep liquor (CSL). When com steep liquor was used with a mixed carbon source (glucose:fructose=1 :3),4% CSL exhibited the best BC production. Based on these results, a defined medium was developed for the BC production by Acetobacter xylinum KJ-1. When this medium was used under optimal culture conditions, the BC production was 7.2 g/1, which was approximately 3 times higher than that with the traditional HS medium.
The production of fibrinolytic enzyme from Bacillus subtilis BK-17 was studied in the shake flask cultures. The important medium components studied include nitrogen source, carbon source and inorganic salts. The environmental conditions include initial pH, temperature, shaking speed and working volume. Among various N-sources, C-sources and inorganic salts tested, soybean flour, D-glucose and Na2HPO4 gave the best results, and their optimal concentrations were 1.5%, 0.5% and 0.05%, respectively. The optimal pH and temperature were 9.0 and 37$^{\circ}C$. With decreasing working volume in the range of 25∼100ml in the 250ml flask or increasing shaking speed in the range of 100∼300rpm, the enzyme production was greatly enhanced. The enzyme activity under the optimal conditions was about 1400I.U./ml with urokinase as a standard.
The conversion of a cellulose-producing cell ($Cel^+$) from Gluconacetobacter hansenii PJK (KCTC 10505 BP) to a non-cellulose-producing cell ($Cel^-$) was investigated by measuring the colony forming unit (CFU). This was achieved in a shaking flask with three slanted baffles, which exerted a strong shear stress. The addition of organic acid, such as glutamic acid and acetic acid, induced the conversion of microbial cells from a wild type to $Cel^-$ mutants in a flask culture. The supplementation of $1\%$ ethanol to the medium containing an organic acid depressed the con-version of the microbial cells to $Cel^-$ mutants in a conventional flask without slanted baffles. The addition of ethanol to the medium containing an organic acid; however, accelerated the conversion of microbial cells in the flask with slanted baffles. The $Cel^+$ cells from the agitated culture were not easily converted into $Cel^-$ mutants on the additions of organic acid and ethanol to a flask without Slanted baffles, but some portion of the $Cel^+$ cells were converted to $Cel^-$ mutants in a flask with slanted baffles. The conversion ratio of $Cel^+$ cells to $Cel^-$ mutants was strongly re-lated to the production of bacterial cellulose independently from the cell growth.
Several culture conditions affecting cellulose production by a newly isolated Acetobacter sp. A9 were examined by cultivating cells under shaking cultures. The inoculum size in the range of 1-10% (v/v) did not influence cellulose production. Maximum cellulose production was obtained with 200 rpm of agitation speed. The cells grown in the 75 ml of medium in a 250-ml conical flask produced the highest level of cellulose. The strain was able to produce cellulose at 25-3$0^{\circ}C$ with a maximum at 3$0^{\circ}C$. Cellulose production occurred at pH 4.5-7.5 with a maximum at pH6.5.
비교적 연구가 미비한 Fe-SOD의 효소화학적 특성 및 그 생리적 기능을 검토하기 위해 여러 종의 세균을 대상으로하여 Fe-SOD의 고생산균주를 screening하였다. 그 결과 Fe-SOD를 대량 세포내에 생성하는 Pseudomonas polycolor를 선발하여, 이 균주의 효소생산 최적 배양조건을 설정하였다. 본 균주가 생산하는 효소는 특이적인 저해제의 작용양식에 의해 Fe을 cofactor로 요구하는 Fe-SOD임이 밝혀졌다. SOD 생성을 위한 최적배지조성은 glycerin 3%, polypeptone 1%, meat extract 0.5%, KCI 0.2%이었고, 최적 초발 pH는 9.0이었으며, 이 조건에서 500ml용 shaking flask에 배지 100ml를 넣어 15시간 전 후 배양했을 경우가 효소생산량은 최대가 되었다.
목질진흙버섯의 균사생육에 적합한 배지로는 MYA(malt yeast agar)와 SMS(soybean flour malt extract sugar)이며, MYA를 기본배지로 사용하였다. 균사생육은 $30^{\circ}C$의 온도와 pH는 5.0에서 생장이 양호하였다. 영양원으로는 malt extract 2%, yeast extract 0.2%와 $KH_{2}PO_{4}$ 0.1% 상태에서 균사생장 및 밀도가 양호하였다. C/N비는 10 : 1의 비율이 가장 적합하였다. 삼각플라스크배양을 위해서는 용기부피 300 ml Shake flask에 100 ml의 배양액을 넣고 $5{\sim}6$개 균사체 절편을 접종하여 20일간 배양하면 높은 고립상의 균체를 양호하게 증식시킬 수 있었다. 대량 액체종균 배양을 위해 접종원을 균질기로 분쇄하여 통기량 2.0 vvm의 조건에서 12일 배양하면 높은 균사의 생장을 보였고 접종에도 수월하였다.
본 연구는 글라디올러스 Topaz'를 재료로 액체진탕배양에 의한 캘러스의 증식효율을 향상시키기 위하여 수행되었다. 캘러스는 2,4-D 10mg/L가 첨가된 MS고체배지에 목자 외식체를 배양하여 유도하였다. 액체진탕배양에 의한 캘러스의 증식은 2,4-D 0.05 mg/L가 첨가된 MS배지를 사용하여 2$0^{\circ}C$, 16시간 일장하에서 배지를 100 mL 삼각플라스크에 20 mL 분주하고, 수평회전식 진탕배양기의 회전속도를 75 rpm으로 하였을 때 증식속도가 가장 빨랐다. 또한 동일 배지에서 캘러스의 계대배양 역시 가능하였다.
To investigate the characteristics of immobilized peppermint (Mentha piperita) cells, dry cell weight (DCW), change of cell viability, and oil productivity of the immobilized cells were determined. Peppermint cells were immobilized in polyurethane (PU) foams of $5{\times}5{\times}5$ mm and cultured in a shaking flask. The maximum DCW was 2.1 mg per foam piece after 20 days of cultivation and the cell density was approximately 420 mg per flask containing 200 foams in 200 ml medium. For the first five days of cultivation, the cell viability was about 80$%$ and decreased to 70$%$ during 5 to 20 days of cultivation. The maximum oil productivity, 148 mg/l was achieved after 40 days of cultivation. The immobilized cells were also cultivated in a bioreactor, equipped with a round spiral type impeller, containing 2, 400 PU foams. The cell viability after 30 days of cultivation with chitosan as an elicitor in the bioreactor was 67$%$ and DCW was 2.0 mg per foam piece. Though the cell viability was relatively high in the bioreactor system, the oil productivity was relatively lower than that of the flask system.
The effects of biotic elicitors, organic acids, and environmental changes on the growth of Panex. ginseng hairy roots were investigated in the shaking flask culture. Among the organic acid tested, gluconic acid was found to be the most efficient in the hairy roots growth. And citric and succinic acid were facilitated the growth of hairy roots.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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