• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제23권3호
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• pp.341-349
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• 1996

초기배의 성판정은 대상가축의 성을 선발하는 수단으로써 뿐만아니라 인간의 유전적 질병의 조기진단법으로서 매우 가치가 크다. 체외수정 소 초기배의 성을 결정하기 위해 PCR과 PRINS를 이용하였으며 성판정에 이용된 8 세포${\sim)$배반포기 초기배는 체외수정후 난관상피세포와의 공배양에 의해 생산되었다. 초기배 의 DNA는 $200{\mu}g/ml$ proteinase K가 함유된 PCR lysis buffer에 하나의 초기배를 부유한 후 $50^{\circ}C$에서 1시간동안 처리하여 준비하였다. 중기 염색체 spreads는 초기배를 nocodazole로 처리한 후 air-drying 방법을 이용하여 준비하였다. 가능한 false positive signals을 배제하기 위해 소특이 및 Y 염색체 특이 primers를 이용하여 PCR을 수행한 결과, 웅성 초기배에서는 두 개의 증폭산물 (소특이 및 Y 염색체 특이)이 합성된 반면 자성 초기배에서는 하나의 증폭산물만 합성되었다. 한편 중기염색체상의 Y 염색체를 동정하기 위해 FISH와 PRINS를 수행한 결과, FISH에서보다 PRINS에서 더 강한 Y 염색체 특이 형광 signals이 탐지되었다. 이러한 결과는 PCR에 의한 체외생산 소 초기배의 신속정확하고 효율적인 성판정이 가능함을 보여주었다. 또한 PRINS를 통해 PCR 에 이용된 Y 특이 probe의 신뢰성이 염색체 수준에서 확인되었다.

• 농업생명과학연구
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• 제44권6호
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• pp.91-99
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• 2010

한우 이력추적제에 적용되는 11개의 MS marker (TGLA227, BM2113, TGLA53, ETH10, SPS115, TGLA126, TGLA122, ETH3, ETH225, BM1824 and INRA23)와 성감별을 위한 2개의 sexing primer로 조합된 하나의 Multiplex PCR set를 이용하여 모근에서 추출한 genomic DNA를 이용해 3510두의 대량 시료를 분석한 결과 3.93%의 genotyping 실패율로 성공적인 분석결과를 얻었다. 무작위교배집단으로 가정 시 동일개체출현확률 (PI)은 $1.31{\times}10^{-23}$, 반형매교배집단으로 가정 시 동일개체출현확률 ($PI_{half-sibs}$)은 $2.52{\times}10^{-16}$ 그리고 전형매교배집단으로 가정 시 동일개체출현확률 ($PI_{sibs}$)은 $1.09{\times}10^{-6}$으로 나타나 현재 사용 중인 11종의 MS marker는 범용적으로 사용하여도 무방할 것으로 재확인 되었다. 또한 생산 및 사육단계의 생우의 경우 모근을 이용하여 DNA를 추출하는 것은 시료 채취 시 소에게 주어지는 스트레스를 최소화 시킬 수 있을 뿐만 아니라 대립유전자형 분석에 있어서 시간적, 경제적인 효율성을 높일 수 있었다. 또한 모근 채취 부위 중 등, 배, 꼬리상부와 꼬리하부를 이용하여 검정한 결과 꼬리하부의 모근을 이용하여 5~13가닥을 사용했을 때 최적의 분석결과를 보였다. 최종적으로 한우의 사육단계 대량 유전자형 분석에 적용 가능한 96 well 단위를 기본으로 하는 모근 DNA분리 체계를 확립하였다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제26권3호
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• pp.181-186
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• 2011

Spermatozoa sorted by flow cytometry have been successfully used to produce offspring in domestic animals and are commercially available for cattle. Also sheath fluid is the important environment for viability of sex-sorted sperm in flow cytometry. The aim of this study was to investigate whether or not HEPES (N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-Ethanesulfonic acid) has any effect on the viability in sex-sorted Hanwoo (Korean native cattle) sperm. In this study, the semen was collected from Hanwoo of Hoengseong Livestock Cooperation by artificial vagina method then pooled and subjected to cryopreservation in straws. Sperm were cultured for 0, 30, 60 and 120 min with 0, 2.5, 5, 7.5 and 10 mM of HEPES added to the sheath fluid and incubated at 4, 20 and 38$^{\circ}C$, respectively. For the cytometric analysis the frozen-thawed semen was extended with 5 mM HEPES extender to final concentration ($2{\times}10^7$ spermatozoa) at 4, 20 and 37$^{\circ}C$. Sperm viability was assessed with SYBR-14 and propidium iodide (PI) staining. This study shows that the viability of sperm was decreased with prolongation of incubation time in all of test. But the viability of sperm which were treated with 38$^{\circ}C$ was gently decreased than that of treated with other temperature. The viability of the control was sharply decreased (p<0.05) than all of the HEPES treatment group at 60 to 120 min in 38$^{\circ}C$. X-sexed sperm was more sensitive than Y-sexed sperm to temperature during f10w cytometry (p<0.05). In conclusion, the results of this study suggest that the sheath fluid with 5 mM HEPES has effect on maintenance of viability after sperm sexing at 37$^{\circ}C$ in Hanwoo.

• 한국가금학회지
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• 제19권3호
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• pp.113-123
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• 1992

본 연구는 반성은색유전자(S：silver gene)를 도입하여 성 감별용 산란종계 계통으로 육성하여 이를 모계통으로 이용함으로서 깃털에 의한 자웅감별이 가능할 뿐만 아니라 잡종강세를 이용한 우수실용계를 작출하고자 수행되었다. 암수 감별용 계통 조성을 위하여서는 현재 시판되고 있는 백색 실용계 수컷(Z$^{s}$ Z$^{s}$ ) 및 갈색 실용계 암컷(Z$^{s}$ W)을 이용하여 이들 중 우수개체를 선발하여 교잡시킴으로서 생산된 개체중 유전적 조성이 은색유전자를 동형(homo)으로 가진 개체들을 모계통으로 육성하고, 부계통 조성을 위하여서는 갈색유전자를 동형으로 가진 개체를 선발 육성하므로서 감별의 원종계를 작출하였다. 이들 조성된 계통을 이용하여 생산능력이 우수한 계통으로 육종하기 위하여 폐쇄군 육종방법(clossed flock breeding)을 사용하였다. 합성종 계계의 산란능력 검정 결과 60주령까지의 산란기록에 근거한 주요 경제능력은 초산 일령 161일, 60주령시 산난수 219개, 산난율 84% 평균난중 61g으로 외국에서 수입되는 우수종계에 버금가는 성적을 나타내었다. 또한 깃털에 의한 자웅감별이 가능할 뿐만 아니라 산난능력도 우수한 실용성 있는 암수 감별용 합성종을 육성 할 것으로 판단된다. 합성종 계통의 유전분석 결과 이들의 유전모수가 정상집단의 유전모수와 유사한 추정치를 보임으로서 특정계통 조성을 위한 선발에 기인된 유전변이의 변화는 거의 없음을 시사한다.

• 한국환경과학회지
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• 제23권8호
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• pp.1447-1453
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• 2014

The differentiation of sex is important for species preservation. However, Fairy Pitta is sexually monomorphic and sex of an individual is indistinguishable with its external characteristics. We determined the sex of Fairy Pitta through DNA analysis and investigated the causes and time of injury and mortality and the size based on sex. We collected 21 samples at Jeju Island, Korean Peninsula from 2004 to 2013 and extracted DNA from them and amplified chromo helicase DNA-binding gene from Z and W chromosomes through Polymerase Chain Reaction (PCR). We confirmed their sex with the banding pattern through Agarose gel electrophoresis, i.e. male (ZZ): one banded and female (ZW) two banded. We distinguished the sex of 17 of 21 samples resulting in 9 males and 8 females. Most casualties were recorded in adult of both sexes. Causes of injury and mortality proved that female casualties occurred from window strikes, dehydration, car accident, predation by natural enemies, and male occurred from window strikes, car accident and dehydration. The time of injury and mortality in adults differ by sex. There was no difference between sexes in any of the six size parameters. As the time of injury and mortality differ by sex, the survey on the role and ecological nature by sex in breeding season must be carried out in the future. External measurements may not be reliable for sexing of Fairy Pitta and other traits such as vocal or characteristics are required to identify the sex of individuals in the field.

• 한국축산식품학회지
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• 제27권3호
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• pp.351-356
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• 2007

본 연구는 포유류의 Y-염색체상에 존재하는 SRY 및 ZFY의 웅성 특이적 성 결정 유전자를 이용하는 PCR 기법으로 쇠고기 성판별 기술을 개발하고자 수행하였다. 성 결정 유전자 영역의 특정 염기서열을 포함하는 primer를 각각 설계 합성하고 이들 primer를 이용하여 PCR증폭을 실시한 다음, 각각의 증폭산물을 1.5% agarose gel에 전기영동하여 웅성 특이적 DNA band의 증폭여부를 확인하였다. SRY 유전자에서 웅성개체 쇠고기는 1,348 bp 크기의 단편을 가진 DNA band가 검출되었으나, 자성개체의 경우 DNA band가 전혀 검출되지 않은 것을 확인 할 수 있었다. 또한, ZFY 유전자에서 웅성개체의 쇠고기는 979 bp 크기의 단편을 가진 DNA band가 모두 검출되었으나, 자성개체의 쇠고기에서는 역시 DNA band가 전혀 검출되지 않았다. 즉, SRY 및 ZFY 유전자는 모두 숫소에서 유래한 쇠고기에서 웅성 특이적인 DNA band가 정확히 검출된 반면 암소에서 유래한 쇠고기에서는 웅성 특이적 DNA band가 전혀 검출되지 않았다. 또한 쇠고기 성 감별법을 도축 후 가공 유통판매단계에 실제 활용 가능성을 검증하고자 시중에 유통되고 있는 등심 및 갈비 포장육 350시료를 무작위 추출하여 성 판별을 실시한 결과 숫소가 252시료(72%) 그리고 암소가 98두(28%)로 조사되었다. 따라서 본 연구에서 개발한 SRY 또는 ZFY의 웅성 특이적 성 결정 유전자를 이용하는 쇠고기 성 감별기술은 생산단계는 물론 도축 후 가공 유통 판매되고 있는 모든 쇠고기의 암수 성감별을 위한 유용한 DNA 표지인자로 활용할 수 있을 것으로 기대된다.

• 대한수의학회지
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• 제39권1호
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• pp.189-203
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• 1999

To determine sex of bovine embryos using hamster histocompatibility Y(H-Y) antibodies, bovine compact morulae were incubated for 6 hours in TCM199 supplemented with 10% hamster H-Y antiserum and the embryos with developmental arrest were diagnosed as male embryos, while the embryos showing development during the incubation as female embryos. This presumptive embryo sexing was confirmed by polymerase chain reaction(PCR)method. 1. In the result of hamster sperm cytotoxicity test to measure H-Y antibody titer, the rate of dead sperm was considerably lower in H-Y antiserum absorbed with hamster male splenocytes than in H-Y antiserum absorbed with hamster female splenocytes or H-Y antiserum unabsorbed with splenocytes(p<0.01). 2. The rate of oocytes fertilized in vitro and the rate of blastocysts of the fertilized oocytes were 58.5% and 32.4%, respectively. The rate of blastocysts on day 8 was 15.9%, denoting the highest rate during whole culture period posterior to in vitro fertilization (IVF). 3. The bovine 16 cell and compact morulae embryos incubated in the medium supplemented with hamster H-Y antibodies showed 37.1% and 48.9% of developmental arrest which were diagnosed as male, respectively, and rates of redeveloped embryos from the arrested were 24.1% in 16 cell and 44.3% in compact morulae embryos, respectively, denoting higher rate of sex determination and rate of redevelopment in compact morulae than 16 cell embryos. 4. Bovine compact morulae of Korean cattle and Holstein were treated with hamster H-Y antibodies for sex determination and the rates of developmental arrest(diagnosed as male) were 48.4% for Korean cattle and 47.9% for Holstein, respectively. The rates of redeveloped embryos to blastocyst after treatment were 42.6% for Korean cattle and 41.8% for Holstein, respectively, showing no significant differences of sex determination and redevelopment between both breed. 5. The sex determination of bovine embryos(Korean cattle and Holstein) using hamster H-Y antibodies was diagnosed by PCR for confirmation, denoting the rates of 86.1% for Korean cattle and 85.9% for Holstein male embryos, respectively, and the rates of 91.9% for Korean cattle and 90.1% for Holstein female embryos, respectively, with no significant differences of sex determination between both breed. These results indicated that hamster H-Y antibodies can be usable for sex determination of bovine embryos of Korean cattle and Holstein, the viability of bovine embryos was sustained while being cultured in the medium supplemented with hamster H-Y antibodies of appropriate titer and sex determination of bovine embryos by PCR can be feasible for confirmation.

• 한국수정란이식학회지
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• 제20권2호
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• pp.163-168
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• 2005

혈통이 등록된 우수한 한우 공란우로부터 회수한 수정란을 간편한 방법으로 성 판별하여 우수한 암송아지를 생산하고자 실시한 결과는 다음과 같다. 회수한 수정란을 punching 또는 bisection 방법으로 biopsy하여 Loop-mediated isothermal amplification법으로 성 판별하였으며, 암컷으로 예측되는 성 판별 수정란을 6두의 수란우에 이식하여 2두가 임신되었고, 수정란 이식 후 278일과 285일에 정상적인 암컷 송아지를 각각 분만하였다. 분만된 송아지 바란이와 보란이의 생시체중은 각각 18kg 및 25kg이었으며, 90일령 보정체중은 각각 61.1kg 및 88.8kg으로 일당증체량은 0.48kg 및 0.71kg이었다.

• 한국가축번식학회지
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• 제20권3호
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• pp.271-278
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• 1996

The present study was carried out to sex effectively mouse and rabbit embryos using rat H-Y antiserum and to improve the rate of rat producing H-Y antiserum with H-Y antibody. The H-Y antiserum was prepared from inbred SD strain female rat immunized by intrasplenic injection and subsequent intraperitioneal booster of testis cell of syngenic male newborn rat. the titer of antiserum was identified by in vitro cytotoxicity test of mouse embryos. The rabbit embryos exposed to the H-Y antiserum was classified to the developed (H-Y negative) or delayed (H-Y positive) group. The H-Y negative rabbit embryos were transferred to recipients and sex of offspring was examined. 1. When mouse embryos were exposed to the rat H-Y antisera, the ratio of embryos developed vs delayed was various. The H-Y antisera where the ratio of embryos developed vs delayed showed the range of 40~60% were recognized as having titer of H-Y antibody. 2. When the subsequent intraperitioneal boosters were followed after priming of intrasplenic injection of H-Y antigen, the rate of rat producting the H-Y antiserum with H-U antibody was 13, 27, 70 and 73% in control, 1st B, 2nd B and 3rd B, respectively. The rate in 2nd B and 3rd B was significantly(P<0.05) higher than that in control and 1st B. 3. When the rabbit morulae were exposed to the rat H-Y antiserum with H-Y antibody, the ratio of morulae developed versus delayed was 42:58% and it was close to the natural sex ratio 50:50%. It was confirmed that the rat H-Y antiserum was cross reactive to the rabbit morulae. 4. When the H-Y negative rabbit embryos were transferred to the recipients, the pregnancy rate was 50% and 83% of the newborns were females. In conclusion, the rat H-Y antiserum with high titer of H-Y antibody was able to be obtained from the female rat immunized by the intrasplenic injection followed by the second intrapent oneal booster of testis cells at a week interval. When the rabbit embryos negative to the rat H-Y antiserum were transferred, 83% of the newborns were females.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제51권3호
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• pp.201-206
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• 2009

돼지 원산지 추적 및 브랜드육 식별을 위한 MS marker set를 확립하기 위해 EU의 EID+DNA DNA Tracing 연구 project, 국제동물유전학회 및 Roslin 연구소 등에서 제안한 돼지의 다형성 분석에 사용되는 MS marker 중 17종을 선발하여 다형성지수, F-통계량, 동일개체 출현확률 및 친자감별확률 등을 MSA, CERVUS, FSTAT, GENEPOP 및 API-CALC 프로그램 등을 연계적으로 활용하여 추정하였다. 다형성지수 추정치를 1차 선발요인으로 하고, 각 MS marker의 PCR 결과물의 크기 및 분석 비용의 경제성을 추가로 감안하여 최종 13종의 MS marker (SW936, SW951, SW787, S00090, S0026, SW122, SW857, S0005, SW72, S0155, S0225, SW24 and SW632)와 성감별을 위한 2개의 성감별 primer로 조합된 하나의 Multiplexing PCR 시스템을 확립하였다. 이를 이용해 돼지 사육환경을 무작위 교배집단(PI), 반형매 교배집단 그리고 전형매 교배집단으로 가정하여 동일개체 출현확률을 분석한 결과 $2.47\times10^{-18}$, $6.39\times10^{-13}$ 그리고 $1.08\times10^{-8}$로 나타나 브랜드 식별 및 원산지 추적에 적합할 것으로 사료된다.