• 한국어병학회지
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• 제10권1호
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• pp.31-38
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• 1997

잉어로부터 분리한 Aeromonas hydrophila는 세포 밖으로 여러 종류의 proteases를 생산한다. A. hydrophila의 배양 상층액을 이용한 inhibitor assay를 통하여, 주된 활성을 나타내는 metallopretease와 약한 활성을 나타내는 serine protease가 있음을 알게 되었다. Gelatin SDS-PAGE를 통하여 두 개의 활성 band가 관찰되었으며, 이 들 중 넓게 퍼진 band는 metalloprotease에 특이하게 작용하는 inhibitor인 EDTA에 의해 활성이 상실되었고 따라서 metalloprotease임을 알 수 있었다. 다른 하나는 serine protease에 특이하게 반응하는 inhibitor인 PMSF에 의해 저해되어 serine protease임을 알 수 있었다. 이러한 두 extracellular protease의 활성은 $75^{\circ}C$에서 30 분간 열을 가한 후에도 Gelatin SDS-PAGE상에 남아있었다. 그런데, 주된 metalloprotease는 Sephadex G-75를 이용한 column chromatography를 거친 후 Gelatin Gel상에서 두 개의 band로 분리되었다.

• 미생물학회지
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• 제39권4호
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• pp.230-234
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• 2003

Bacillus amyloliquefaciens psychrotrophic strain이 분비하는 세포 외 단백질 가수분해효소를 정제하여, endopeptidase 활성에 관한 특성을 분석하였다. Protease SE910로 명명된 효소는 단백질 내부의 leucine에 연결된 peptide 결합만을 가수분해하는 endopeptidase로 작용한다. 효소를 특이한 아미노산 잔기에 작용하는 화학수식제와 반응하였을 때 효소의 활성부위에 관여하는 아미노산 잔기가 수식되었을 때는 효소활성이 저해를 받는다. 본 효소는 serine을 수식하는 PMSF에의해 endopeptidase 활성이 완전히 저해되었으며, 카르복실 기능기를 수식하는 화학수식제에 의해 저해되었고, lysine을 화학수식하는 PLP에 의해서는 큰 영향을 받지 않았다. 이것은 본 효소의 endopeptidase 활성에 serine과 aspartic acid 잔기가 관여하는 것을 의미한다. 구조적으로 leucine을 포함하는 유도체인 bestatin은 효소의 endopeptidase 활성을 경쟁적으로 저해하였다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제20권1호
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• pp.19-29
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• 1993

Plasminogen activator (PA)-plasmin system in follicular fluid is involved in the process leading to follicular rupture at ovulation. It is well known that PA is closely associated with cellular differentiation and tissue remodeling on evidences from the study of normal and malignant tissues. This study was designed to ascertain a potential role of PA in the ovarian folliculogenesis. Immature Sprague-Dawley rats were injected with pregnant mare serum gonadotropin, followed by injection of serine protease inhibitor (SPI; mixture of 1 mol/L benzamidine and 1 mol/L amino-caproic acid) into the unilateral ovarian bursa. In the control study, mechanical effect of bursal injection and contralateral ovarian effect SPI were ruled out. Total antral follicular areas relative to total ovarian cross-sectional areas was siginificantly lower in SPI-injected ovary than in saline-injected ovary. SPI injection decreased the relative antral follicular area by 33 % respectively. Electron microscopic finding of granulosa cell in the atretic follicle showed the presence of pyknotic nucleus, blurring of neucleolemma, degeneration of mitochondria and dilation of endoplasmic reticulum. After induction of ovulation with hCG, the number of oocytes released was significantly decreased in SPI-injected oviduct than in saline-injected oviduct. From above results, author discussed that PA may play a role not only in ovulation but also in some processes of folliculogenesis.

• 한국동물학회지
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• 제33권1호
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• pp.119-125
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• 1990

Trypsin을 비롯한 여러 serine protease를 저해하는 단백질을 계골격근으로부터 여러 chromatography 방법을 이용하여 순수하게 분리하였다. 이 저해제의 분자량은 젤 여과법을 이용하여 측정한 결과 66,000 달톤이었으며 sodium dodecyl sulfate 존지하에서 전기영동하였을 때 66,000과 64,000 달톤의 두 단백질로서 나타났다. 이 중 64,000 달톤의 단백질은 순수분리과정 혹은 생체 내에서 일어난 부분 절제현상에 기인한 66,000 달톤 단백질의 부산물인 것으로 사료된다. 이 저해제는 약 7.4의 등전점을 가진 당 단백질임을 알 수 있었으며, 다량의 cysteine잔기를 포함하고 있다.

• BMB Reports
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• 제33권2호
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• pp.112-119
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• 2000

Three kinds of serine protease inhibitors, members of the Bowman-Birk trypsin inhibitor, were purified from Dolichos lablab seeds and named Dolichos protease inhibitor 1, 2 and 3 (DI-1, DI-2 and DI-3), respectively. Each inhibitor showed a single band with gel mobility at around 15.9, 12.1 and 14.6 kDa on 20% SDS-PAGE under reducing conditions. To characterize inhibitory specificity, the inhibition constant (Ki) for these inhibitors was measured against several known serine proteases. All three Dolichos protease inhibitors (DI-1, DI-2 and DI-3) inhibited the activity of trypsin and plasmin, but had no effect on thrombin and kallikrein (either for human plasma kallikrein or for porcine pancreas kallikrein). DI-1 inhibited chymotrypsin most effectively (Ki = $3.6{\times}10^{-9}\;M$), while DI-2 displayed inhibitory activity for porcine pancreatic elastase (Ki = $6.2{\times}10^{-8}\;M$). Pre-treatment of the 33 mg/kg of DI-mixture (active fractions from $C_{18}$ open column chromatography that included DI-1, DI-2 and DI-3) inhibited the induction of pseudomonal elastase-induced septic hypotension and prevented an increase in bradykinin generation in pseudomonal elastase-treated guinea pig plasma. Also, the increase of kallikrein activity, by injection of pseudomonal elastase, was inhibited by the pretreatment of the DI-mixture in a guinea pig. Since the DI-mixture had no inhibitory effect on kallikrein activity when Z-Phe-Arg-MCA was used as a substrate in vitro, its inhibitory activity in the pseudomonal elastase-induced septic hypotension model might not be due to a direct inhibition of plasma kallikrein in the activation cascade of the Hageman factor and prekallikrein system. These results suggest that the Dolichos DI-mixture might be used as an inhibitor in pathogenic bacterial protease-induced septic shock.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제19권5호
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• pp.25.1-25.8
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• 2016

The fractionation of serine protease inhibitor (SPI) from fish roe extracts was carried out using polyethylene glycol-4000 (PEG4000) precipitation. The protease inhibitory activity of extracts and PEG fractions from Alaska pollock (AP), bastard halibut (BH), skipjack tuna (ST), and yellowfin tuna (YT) roes were determined against target proteases. All of the roe extracts showed inhibitory activity toward bromelain (BR), chymotrypsin (CH), trypsin (TR), papain-EDTA (PED), and alcalase (AL) as target proteases. PEG fractions, which have positive inhibitory activity and high recovery (%), were the PEG1 fraction (0-5 %, w/v) against cysteine proteases (BR and PA) and the PEG4 fraction (20-40 %, w/v) against serine proteases (CH and TR). The strongest specific inhibitory activity toward CH and TR of PEG4 fractions was AP (9278 and 1170 U/mg) followed by ST (6687 and 2064 U/mg), YT (3951 and 1536 U/mg), and BH (538 and 98 U/mg). The inhibitory activity of serine protease in extracts and PEG fractions from fish roe was stronger than that of cysteine protease toward common casein substrate. Therefore, SPI is mainly distributed in fish roe and PEG fractionation effectively isolated the SPI from fish roes.

• 생명과학회지
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• 제17권7호통권87호
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• pp.948-955
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• 2007

생체 면역반응에 중요한 역할을 하는 호중구의 세포사멸은 자연적으로 일어나거나 여러 외부자극에 의한 신호의 전달에 의해 증가하거나 지연된다. 또한 사이토카인과 같은 분화제에 의해 세포사멸이 지연되고 항원 제시 기능을 가진 수지상 세포로 분화되기도 한다. 본 연구에서는 세포사멸 억제제와 사이토카인을 이용한 시스템에서 호중구가 수지상 세포로 분화되는가를 조사하였다. Pancaspase와 serine protease의 억제제인 zVAD-fmk와 AEBSF를 처리하였을 때 호중구의 세포사멸은 현저히 감소되며 AEBSF는 caspase-3와 serine protease활성을 모두 억제하였다. 호중구의 세포사멸을 효과적으로 억제하는 AEBSF와 함께 분화제로 널리 쓰이는 CM-CSF를 같이 처리하여 3일 동안 배양하면 수지상 세포에서 높이 발현되는 CD8O, CD83 및 MHC class ll의 세포표면 마커의 발현이 증가하였다. AEBSF와 CM-CSF를 처리한 호중구를 T-세포와 함께 배양하였을 때 SEB가 존재할 경우 T-세포가 증식되었으며 SEB가 없이도 $IFN{\gamma}$는 생성되었다. 이들 결과들로 부터 serine protease 억제제인 AEBSF를 호중구에 처리하여 세포사멸을 효과적으로 억제하는 것과 수지상 세포로의 분화를 촉진하는 사이토카인인 CM-CSF의작용을 나타내게 하는 조건과는 서로 상호적으로 연관되어 작용할 수 있다는 것을 제시하고 있다.

• 한국수산과학회지
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• 제48권2호
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• pp.178-186
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• 2015

Protease inhibitors (PI) of trypsin and papain as target proteases from the roe of bastard halibut Paralichthys olivaceus were fractionated out using ammonium sulfate precipitation (A), DEAE 650M anion exchange chromatography (D), and Sephacryl S-300 gel filtration (S). The recovery percentages of the fractions with the strongest inhibitory activity for each fractionation method were 13% for the A4 fraction, 21.2% for the D3 fraction, and 21.3% for the S2 fraction, with specific inhibitory activities of the fractions toward trypsin and casein of 168, 139, and 218 U/mg, respectively, while no inhibition of papain was observed. The $IC_{50}$ for the trypsin-specific substrate $N{\alpha}$-benzoyl-$\small{L}$-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) was 0.65, 1.55, 2.26, and 2.85 mg/mL for the A4, S2, A3, and D3 fractions, respectively. These results suggest that chromatographic fractionation methods (D and S) based on the molecular mass and charge of the protein were more effective at fractionating PI than was ammonium sulfate precipitation based on protein solubility, and that the bastard halibut roe extract acts as a serine protease inhibitor. Therefore, the PI fraction from fish roe might be useful for inhibiting proteases in foodstuffs, and could constitute an alternative food-grade inhibitor for the surimi industry.

• Applied Biological Chemistry
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• 제31권4호
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• pp.356-360
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• 1988

토양에서 분리된 Alkaline Protease생산균주는 Bacills subtilis로 동정되었다. 본 균주의 최적배양온도는 최적 배지조건에서 $35^{\circ}C$이며, 초기 배지 pH는 10.5였다. 효소역가는 Casein-Folin법으로 약 2,300 Unit/ml로 나타났다. 배양액에 일련의 정제과정을 실시한 결과 정제배수 9.2, 회수율 14%의 정제효소를 얻었으며, 분자량은 19,000이었다. 정제효소의 반응최적온도는 $70^{\circ}C$, 최적 PH는 12였다. $Fe^{++}$에 의해 활성이 저하되었으며, 또한 serine protease inhibitor인 PMSF에 의해 활성이 저해되었다. 이것으로 부터 본 효소는 활성부위에 serine을 갖는 serine protease의 일종임을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology
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• 제40권1호
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• pp.26-32
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• 2002

From the culture supernatant of the psychrotrophic strain of Bacillus amyloliquefaciens an extracellular serine protease was purified to apparent homogeneity by successive purification steps using QAE-Sephadex, SP-Sephadex and Sephacryl S-100 column chromatography. The pretense is monomeric, with a relative molecular mass of 23,000. It is inhibited by the serine protease inhibitor phenylmethylsulfonyl fluoride, but not by EDTA. The enzyme is most active at pH 9-10 and at $45^{\circ}C$, although it is unstable at $60^{\circ}C$.