Characterization of extracellular proteases of Aeromonas hydrophila isolated from the intestine of carp(Cyprinus carpio)

잉어(Cyprinus carpio)로부터 분리된 Aeromonas hydrophila의 extracelluar proteases 연구

Aeromonas hydrophila isolated from the intestine of carp produced several kinds of proteases into the medium. Inhibitor assay with the culture supernatant of A. hydrophila showed that there were major metalloproteases and minor serine proteases. Gelatin SDS-PAGE showed two proteolytic bands. One broad protease band was inhibited by metalloprotease specific inhibitor, EDTA, indicating a metalloprotease. The other was inhibited by serine protease specific inhibitor, PMSF, suggesting a serine protease. The proteolytic activities of both extracellular proteases remained on Gelatin SDS-PAGE after heating at $70^{\circ}C$ for 30 min. However, the major metalloprotease was separated into two proteolytic bands on Gelatin PAGE by gel filtration chromatography on Sephadex G-75.

잉어로부터 분리한 Aeromonas hydrophila는 세포 밖으로 여러 종류의 proteases를 생산한다. A. hydrophila의 배양 상층액을 이용한 inhibitor assay를 통하여, 주된 활성을 나타내는 metallopretease와 약한 활성을 나타내는 serine protease가 있음을 알게 되었다. Gelatin SDS-PAGE를 통하여 두 개의 활성 band가 관찰되었으며, 이 들 중 넓게 퍼진 band는 metalloprotease에 특이하게 작용하는 inhibitor인 EDTA에 의해 활성이 상실되었고 따라서 metalloprotease임을 알 수 있었다. 다른 하나는 serine protease에 특이하게 반응하는 inhibitor인 PMSF에 의해 저해되어 serine protease임을 알 수 있었다. 이러한 두 extracellular protease의 활성은 $75^{\circ}C$에서 30 분간 열을 가한 후에도 Gelatin SDS-PAGE상에 남아있었다. 그런데, 주된 metalloprotease는 Sephadex G-75를 이용한 column chromatography를 거친 후 Gelatin Gel상에서 두 개의 band로 분리되었다.