• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제34권12호
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• pp.3817-3824
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• 2013

Various separation modes in HPLC, such as anion exchange (AE), reversed-phase (RP), and affinity (AF) chromatography were examined for the separation of selenium species in human blood serum and urine. While RP- and AE-HPLC were mainly used for the separation of small molecular selenium species, double column AF-HPLC achieved the separation of selenoproteins in blood serum efficiently. Further, the effluent of AF-HPLC was enzymatically hydrolyzed and then analyzed with RP HPLC for selenoamino acid study. The versatility of the hybrid technique makes the in-depth study of selenium species possible. For quantification, post column isotope dilution (ID) with $^{78}Se$ spike was performed. ORC ICP/MS (octapole reaction cell inductively coupled plasma/mass spectrometry) was used with 4 mL $min^{-1}$ Hydrogen as reaction gas. In urine sample, inorganic selenium and SeCys were identified. In blood serum, selenoproteins GPx, SelP and SeAlb were detected and quantified. The concentration for GPx, SelP and SeAlb was $22.8{\pm}3.4\;ng\;g^{-1}$, $45.2{\pm}1.7\;ng\;g^{-1}$, and $16.1{\pm}2.2\;ng\;g^{-1}$, respectively when $^{80}Se/^{78}Se$ was used. The sum of these selenoproteins ($84.1{\pm}4.4\;ng\;g^{-1}$) agrees well with the total selenium concentration measured with the ID method of $87.0{\pm}3.0\;ng\;g^{-1}$. Enzymatic hydrolysis of each selenium proteins revealed that SeCys is the major amino acid for all three proteins and SeMet is contained in SeAlb only.

• 분석과학
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• 제28권6호
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• pp.417-424
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• 2015

본 연구에서는 한국인을 대상으로 하여 혈중 셀레노단백질의 함량과 위암과의 상관관계를 연구하였다. 혈청 속에서의 셀레노단백질의 함량을 종별로 분석하여, 각 단백질의 함량과 위암과의 상관관계를 알아보고 셀레늄의 위암에 대한 생체지표로서의 가능성을 알아보고자 하였다. SPE를 사용하여 방해 이온들을 제거한 뒤 후컬럼 동위원소법으로 정량한 기존의 복잡한 방법과 달리 SPE를 사용하지 않고 m/z 78을 모니터링하고 검정곡선법으로 정량하였다. 표준인증물질인 CRM BCR-637을 사용하여 정확도를 검증한 결과 72.20±3.35 ng·g⁻¹로서 기준값인 81±7 ng·g⁻¹에 만족할 만한 결과를 얻었다. 먼저 통제군인 순환기 질환 환자 혈청 속의 셀레노단백질의 총농도를 조사해본 결과 105.70±21.20 ng·g⁻¹으로서 정상인의 값과 차이가 없었다. 각 종별 농도를 보면 GPx와 SelP, 그리고 SeAlb이 각 각 26.12±7.84, 65.15±14.50, 14.43±6.99 ng·g⁻¹이며 분포는 24.7%, 61.6%, 및 13.7% 이었다. 한국인의 위암 환자의 혈청을 분석한 결과, GPx와 SelP, 그리고 SeAlb의 농도는 각각 15.41±9.01, 50.83±17.9, 그리고 9.87±5.21 ng·g⁻¹이며 총 농도는 76.11±28.12 ng·g⁻¹으로 대조군에 비하여 총량과 각 종들도 모두 큰 감소를 보였다. 감소폭은 GPx는 41.0%, SelP 22.0%, SeAlb 31.6% 이었다. 하지만 종별 분포는 유의미한 차이를 보이지 않았고 따라서 위암 환자의 경우 셀레노단백의 총량을 분석하거나 또는 그 중 하나의 단백질을 사용하여도 암을 진단하는 보조적인 지표가 될 수 있을 것으로 생각되었다. 또한 나이별에 따른 분석을 보면 노년인 50대 부터 70대에서는 실험군과 대조군이 확실한 차이를 보이나 30대와 40대에서는 별 차이를 보이지 않고 있으므로 성별, 나이별에 따른 조사가 더 필요할 것으로 보인다.

• 분석과학
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• 제27권2호
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• pp.92-99
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• 2014

본 연구에서는 음이온 고체상 추출법 (AE SPE; anion exchange solid phase extraction)을 사용하여 간섭요인을 제거한 후, 친화 크로마토그래피 AF HPLC; affinity high performance liquid chromatography)와 유도결합 플라스마 질량분석법 (ICP/MS; inductively coupled plasma/mass spectrometry)을 사용하여 한국인의 혈청에서의 셀레노 단백질을 분리하고 정량하였다. 먼저 동위원소 희석법으로 셀레늄 총량을 분석한 결과, 건강한 한국 사람의 혈청내 평균농도는 $94.3{\pm}2.3ngg^{-1}$ 이었다. AE SPE와 AF 컬럼을 online으로 연결하여 셀레노단백질인 glutathione peroxidase (GPx), selenoprotein P (SelP), selenoalbumin (SeAlb)을 분리하고, 후 컬럼 동위원소 희석법 (PC ID; post column isotope dilution)으로 정량하였다. 혈청 인증표준물인 BCR-637을 분석한 결과 전체 셀레노 단백질의 합은 $85.4{\pm}3.4ngg^{-1}$으로 문헌값인 $81{\pm}7ngg^{-1}$과 일치하는 결과를 얻을 수 있었다. 20 명의 건강한 한국인의 혈청에서 얻은 셀레노 단백질 GPx, SelP 및 SeAlb 의 농도는 각각 $12.1{\pm}1.4ngg^{-1}$, $57.2{\pm}2.0ngg^{-1}$, 그리고 $20.0{\pm}1.9ngg^{-1}$ 이었으며 이들의 합인 $89.3ngg^{-1}$은 셀레늄의 총량값인 $94.3ngg^{-1}$과 거의 같은 값으로 혈청에서의 셀레늄은 주로 셀레노 단백질로 구성되어 있음을 알았다. 이 중 GPx의 농도는 간섭을 제거하기 전인 $25.0ngg^{-1}$에 비해 50% 이상 크게 감소하였는데 이로서 간섭은 주로 GPx에 포함되어 있음을 확인할 수 있었다. AE SPE는 간섭요인인 Cl과 Br을 제거 하는데 매우 효과적임을 보여주었다.

• 분석과학
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• 제28권3호
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• pp.196-203
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• 2015

셀레늄 강화 사료를 먹인 모돈에 대하여 혈청에서의 셀레늄 화학종들 즉, 무기셀레늄, 셀레노아미노산 및 셀레노단백질들을 음이온 교환과 친화 크로마토 그라피를 ICP/MS에 연결사용하여 분석하였다. 무기 셀레늄(Se⁴⁺와 Se⁶⁺)과 셀레노 아미노산들은 PRP X-100 음이온 교환 컬럼을 사용하였고 셀레노 단백질들의 경우에는 HEP 컬럼을 사용하여 SelP을 GPx+SeAlb로 부터 분리하였다. 정량분석은 후 컬럼 동위원소 희석법을 사용하여 이 들의 농도를 결정하였다. 모돈 실험군을 3 그룹으로 나누고 셀레늄이 강화된 사료(유기셀레늄 0.3 mg/kg, 0.6 mg/kg 및 무기셀레늄 0.6 mg/kg)를 4주 동안 먹였을 때 셀레늄 화학종들의 변화 및 사료와의 상관관계를 알아보았다. 셀레노 아미노산의 경우, 실험군들은 무기셀레늄 강화사료를 제외하고 대조군에 비하여 높은 농도를 보여주었다. 유기셀레늄 강화사료에서는 큰 차이를 보이지 않았다. 셀레노 단백질의 경우는 실험군 모두가 대조군에 비하여 증가를 보여주었는데 특히 SelP가 다른 단백질에 비하여 1.5 배 정도 더 크게 증가한 것으로 나타났다.

• 대한화학회지
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• 제63권6호
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• pp.420-426
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• 2019

본 연구에서는 중수소를 충돌기체로 사용한 ICP-MS와 ammonium formate를 용리액으로 사용한 친화 크로마토그래피를 이용하여 한국인의 혈청에서의 셀레노단백질 GPx, SelP 및 SeAlb을 분리하고 후 칼럼 동위원소 희석법으로 정확히 정량하였다. 인증기준물질인 BCR 639 (133±12 ng g^-1)에 대하여 측정한 셀레늄 총량값은 130±6 ng g^-1으로 정확한 결과를 보여주었다. 이 방법을 적용하여 한국인의 직장암 그룹 25명과 통제군 30명의 혈청 속 셀레노단백질을 분석한 결과 셀레늄 총량에 대하여 직장암 그룹이 84±27 ng g^-1, 통제군이 119±28 ng g^-1으로 직장암 그룹이 통제군 보다 95% 신뢰수준에서 통계적으로 더 작은 결과를 보여 주었다. 즉 t 계산값은 4.93으로 95% 신뢰수준의 2.04보다 높았다. 이러한 경향은 남성보다 여성에서, 60대 이상의 고 연령층일 수록 더욱 뚜렷하였다. 각 셀레노단백질의 분포를 조사한 결과, 두 그룹은 서로 비슷하였고 각 셀레노단백질과 직장암에 따른 특별한 경향성은 보이지 않았다. 또한 직장암 병기가 진행됨에 따라 셀레노단백질 중 GPx의 농도가 약간 감소하는 경향이 있었고, 셀레늄 총량의 경우 2기에서 약간 증가하는 특징을 보였다.

• Journal of Pharmaceutical Investigation
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• 제6권2호
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• pp.101-110
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• 1976

1. In the rabbit and the dog, the blood pressure response to water extract and methanol extract obtained from Atractylodes rhizoma alb'a was investigated. 2. Water extract and methanol extract, when administered into the rabbit and the dog by the route of vein, produced fall of the blood pressure. 3. The depressor response of the rabbit to water extract and methanol extract was not affected by $Avicel{\circledR}$, propranolol and atropine. 4. The depressor response by water extract and methanol extract in the rabbit was not affected by guanethidine, but water extract and methanol extract produced elevation of blood pressure in this rabbit. 5. Pretreatment of rabbit with chlorisendamine or phenoxybenzamine weakened the depressor response to water extract and methanol extract, and the both extracts produced secondary elevation of blood pressure in this rabbit. 6. The pressor response of the chlorisondamine-treated rabbit to water extract and methanol extract was not affected by atropine. 7. Water extract decreased the pressor action of tyramine and depressor action of pilocarpine and isoproterenol, but did not affect the blood pressure response of nor einephrine, angiotensin and dimethylpehnyl piperazinium iodide(DMPP).