담자균류인 좀우단버섯 Paxillus atrotomentosus의 항암성분을 구명하기 위하여 그 균사체를 열수 추출하여 단백 다당체를 분리하였고, 이를 DEAE-cellulose ion 교환수지와 Sepharose CL-4B gel filtration chromatography로 정제하였다. 분획들을 각각 20 또는 50 mg/kg/day의 용량으로 마우스의 복강내에 투여하였을 때, sarcoma 180 고형암에 대하여 Fr. A가 68.51%의 가장 높은 억제율을 나타내었다. 항암기전을 밝히기 위하여 마우스에 대한 면역학적 실험을 한 결과, Fr. A는 대조군에 비해 활성화된 macrophage에서 분비되는 superoxide anion 양을 1.1배, hemolytic plaque assay에서의 용혈반 형성 세포수를 2.3배 증가시켰고 감소된 DTH 반응을 정상수준으로 회복시켰다. 암세포에 대한 직접적인 영향을 조사하기 위하여 MTT assay를 한 결과 대조군에 비해 세포의 viability가 약 32% 감소됨을 나타내었다. 화학분석에 의해, 이 성분은 fucose, galactose, glucose, mannose 및 xylose로 구성된 86.36%의 다당체와 14종의 아미노산으로 구성된 1.52%의 단백질 및 1.64% hexosamine으로 구성된 protein-bound polysaccharide이었다. 이 성분을 paxillan으로 명명한다.
해양심층수 간장 및 일반간장을 제조하여 항돌연변이원성과 세포독성을 측정하였으며 sarcoma-180 cell을 이용하여 in vivo에서 항암효과를 살펴보았다. S. typhimurium TA98과TA100 균주를 이용한 실험에서 모든 시료에서 돌연변이원성이 없었으며, 항돌연변이원성 실험에서는 직접변이원인 MNNG($0.4{\mu}g$/plate)의 경우 TA100 균주에서 해양심층수간장의 시료농도 $200{\mu}g$/plate에서 90.9%의 높은 억제효과를 나타내었으며 4NQO($0.15{\mu}g$/plate)에 대해서는 같은 시료농도에서 62.0%의 억제효과를 나타내었다. 그리고 4NQO의 경우 TA98 균주에 대해서 해양심층수 간장은 61.7%의 억제효과를 나타내었으며 모든 시료는 농도 의존적으로 억제하는 것으로 나타났다. 세포독성 효과를 알아보기 위하여 HeLa, Hep3B, AGS, A549와 MCF-7을 사용하였다. 각 시료 추출물의 암세포 성장효과를 조사한 결과, 해양심층수 간장이 1 mg/mL의 농도에서 각각 69.4%, 70.5%, 55.6%, 82.1% 및 73.2%의 억제율을 나타내었다. 그리고 해양심층수 간장은 고형암 성장 억제 실험에서 대조군에 비해서 40.9%의 고형암 성장 억제효과를 나타내었다.
Objective: Low dose radiation may stimulate the growth and development of animals, increase life span, enhance fertility, and downgrade the incidence of tumor occurrence.The aim of this study was to investigate the antitumor effect and hormesis in an erythrocyte system induced by low-dose radiation. Methods: Kunming strain male mice were subcutaneously implanted with S180 sarcoma cells in the right inguen as an experimental in situ animal model. Six hours before implantation, the mice were given 75mGy whole body X-ray radiation. Tumor growth was observed 5 days later, and the tumor volume was calculated every other day. Fifteen days later, all mice were killed to measure the tumor weight, and to observe necrotic areas and tumor-infiltration-lymphoreticular cells (TILs). At the same time, erythrocyte immune function and the level of 2,3-diphosphoglyceric acid (2,3-DPG) were determined. Immunohistochemical staining was used to detect the expression of EPO and VEGFR of tumor tissues. Results: The mice pre-exposed to low dose radiation had a lower tumor formation rate than those without low dose radiation (P < 0.05). The tumor growth slowed down significantly in mice pre-exposed to low dose radiation; the average tumor weight in mice pre-exposed to low dose radiation was lighter too (P < 0.05). The tumor necrosis areas were larger and TILs were more in the radiation group than those of the group without radiation. The erythrocyte immune function, the level of 2,3-DPG in the low dose radiation group were higher than those of the group without radiation (P < 0.05). After irradiation the expression of EPO of tumor tissues in LDR group decreased with time. LDR-24h, LDR-48h and LDR-72h groups were all statistically significantly different from sham-irradiation group. The expression of VEGFR also decreased, and LDR-24h group was the lowest (P < 0.05). Conclusion: Low dose radiation could markedly increase the anti-tumor ability of the organism and improve the erythrocyte immune function and the ability of carrying $O_2$. Low-dose total body irradiation, within a certain period of time, can decrease the expression of hypoxia factor EPO and VEGFR, which may improve the situation of tumor hypoxia and radiosensitivity of tumor itself.
The aim of this experimental study was to evaluate the anti-tumor effects of Chungsimbohyeltang through investigation about viability of tumor cell by MTT assay, survival period of mice transplanted with L-1210 cells, growth inhibition on the tumor cell, body weight variation in mice transplanted with sarcoma-180 cells and its immunomodulatory effects through the investigation on delayed type hyper-sensitivity, the hemagglutinin and hemolysin titers for humoral immune response, the appearance of rosette forming cells for cell-mediated immune response, the natural killer cell activity, the transformation of lymphocyte, the productivity of Interleukin-2 and phagocytic index K was performed in immune-depressed ICR mice induced by methotrexate treatments. The results were as follows ; 1. $IC_{50}$ of Chungsimbohyeltang treated group was 5.85mg/ml in SNU-C4 cell, 1.38mg/ml in SNU-396 cell, 0.21mg/ml in SNU-1 cell, so it had low anti-tumor activity. 2. The both groups of Chungsimbohyeltang extract 10mg/kg and Chungsimbohyeltang extract 20mg/kg had no toxicity and the group of Chungsimbohyeltang 20mg/kg which was shown 120% in ILS had the effect of life prolongation in mice transplanted with L-1210 cells. 3. In the growth inhibition on the tumor cells, only the group of Chungsimbohyeltang extract 20mg/kg was noted and in the weight variation in mice transplanted with sarcoma-180 cells, both groups of Chungsimbohyeltang extract had a significant effect. 4. In the delayed type hypersensitivity and appearance of rosette forming cells, both groups of Chungsimbohyeltang extract didn't have any significant effect. 5. The hemagglutinin titers was slightly increased with no significance, and the hemolysin titers was significantly increased in the only group of Chungsimbohyeltang extract 20mg/kg. 6. The natural killer cell activity of the Chungsimbohyeltang extract groups was significantly increased in the ratio of 100:1 of effector and target cells, but it was not significantly increased in the ratio of 50:1, 10:1. 7. The transformation of lymphocyte and the productivity of Interleukin-2 were increased significantly and in dose-dependent manner in both group of Chungsimbohyeltang extract. 8. The phagocytic effect of macropage was significantly increased in both groups of Chungsimbohyeltang extract. Considering the results above, we could conclude that Chungsimbohyeltang have an indirect anti-tumor effect through the modulation of immunme response, although it had not toxicity on the tumor cell it self.
Bamboo salt has been used for the purpose of precaution and treatment of certain diseases including cancer. Therefore, present study was carried out to ascertain the effects of bamboo salt upon anti-cancer, anti-hypertensive, and anti-diabetic activities as well. To examine the anti-cancer activity of bamboo salt, ICR mice implanted with 1$\times$l0$^{6}$ cells of sarcoma 180 intraperitoneally had been treated daily with bamboo salt A, crude salt, and reagent-grade NaCl (0.2, 1.0, and 2.0 g/kg, p.o.) for 60 days using adriamycin (2 mg/kg) as a positive control. Neither survival rate nor body weight had been significantly influenced by all the treatments indicating that bamboo salt A did not exert the anti-cancer effect on ICR mice. Anti-hypertensive activity was examined in spontaneously hypertensive rats (SHR) which had been administered with bamboo salt A, crude salt, and reagent-grade NaCl (0.1, 0.5, and 1.0% in drinking water) for 28 days using hydralazin (2 mg/kg) as a positive control. Blood pressure and heart rate were measured at 1, 3, and 4 weeks after the starting date. Significant anti-hypertensive activity was not observed in any treated group compared to the positive control group. In order to determine if bamboo salt had anti-diabetic activity, rats in which diabetes had been induced by streptozotocin (45 mg/kg, i.m.) were treated daily with bamboo salt A, crude salt, and reagent-grade NaCl (0.2, 1.0, and 2.0 g/kg, p.o.) for 28 days using insulin (50 U/kg, s.c..) as a positive control. Blood samples were taken and analyzed at 1,2, and 4 weeks after the starting date. Bamboo salt did not cause any decreasing effect on the blood glucose levels. These results clearly demonstrated that bamboo salt A did not exert anti-cancer, anti-hypertensive, or anti-diabetic activities in the present experimental animals.
In this study, we investigated the in vitro anti-obesity, anti-cancer activity and single oral dose toxicity of Inonotus xeranticus extracted by methanol (INXM) or ethyl acetate (INXE). In order to investigate anti-obestity effect of Inonotus xeranticus extracts, the 3T3-L1 cells were treated with these extracts at various concentrations(1, 10, 100 and $300{\mu}g/ml$). It was observed that 3T3-L1 cells treated with $100{\mu}g/ml$ of Inonotus obliquus ethyl acetate extract (INOE), INXM and INXE, in the absence of differentiation cocktail (0.5mM isobutylmethylxanthine (IBMX) $1{\mu}M$ dexamethasone, $1{\mu}M$ insulin), differentiated at a rate of 78.5, 80.9, and 76.4% respectively. Differentiation rates of 86.6% and 83.4% were observed in 3T3-L1 cells which were treated with differentiation cocktail at $100{\mu}g/ml$ of INXM and INXE, respectively. The anti-cancer effect of Inonotus xeranticus extracts was investigated using a method of sulforhodamine B in sarcoma 180 cell line. The cells were treated with these extracts (1, 10, 100 and $300{\mu}g/ml$) for 48 hours. The growth of cells which were treated with $300{\mu}g/ml$ of INXM was inhibited by 80.1%. The growth of sarcoma 180 cells which were treated with 100 and $300{\mu}g/ml$ of INXE was inhibited by 74.7% and 64.5%, respectively. In single oral dose toxicity study, no differences were observed between control and treated groups in clinical signs, body weight gains, and feed and water consumptions. The results indicated that Inonotus xeranticus extracts did not show any toxic effects at 2,000mg/kg in mice, and the $LD_{50}$ of these extracts was found to be higher than 2,000 mg/kg in this experiment. From the above results, Inonotus xeranticus methanol and ethyl acetate extracts might have useful clinical applications in the management of cancer and obesity and may also be useful as a medicinal food.
본 연구에서는 매생이 열수추출물의 항암 및 면역 활성을 알아보기 위하여 적정 추출 및 정제조건, 당 조성, 암세포독성, sarcoma-180 성장저지 효과, 백혈구수 변화, 보체계 활성, 장관 면역 활성, 경구독성 등을 검토하였다. 매생이 보체계 활성물질은 $100^{\circ}C$의 물로 3시간 동안 추출하여 4배량의 주정으로 24시간 침전시킨 다음 투석 및 한외여과하여 분자량 300kDa 이상의 고분자 물질을 분리정제 하였으며 당 조성은 xylose 19.01%, fucose 15.29%, mannose 4.23%, galactose 7.92%로 나타났다. In vitro에서 매생이 보체계 활성물질의 인체 암세포에 대한 독성은 고농도($10-30{\mu}g/ml$)에서만 경미하게 나타났으며, in vivo시험에서는 매생이 추출물의 투여로 마우스 고형암의 성장이 대조군에 비하여 40.13-59.42%가 저해되었다. 그러나 수명 연장율은 실험군간에 통계적 유의차가 없었다. 정제한 매생이 추출물을 마우스의 복강에 투여한 결과, 혈중 백혈구수가 대조군에 비하여 20mg/kg 투여군 39%, 50mg/kg 투여군 70%, 100mg/kg 투여군 83%가 증가하는 것으로 나타났으며, 면역과 관련이 있는 간장, 비장, 흉선의 중량이 증가하였다. 매생이 추출물을 마우스에 경구투여하고 분변으로 배출되는 IgA 항체의 양을 측정한 결과, 대조군이 $2,092{\pm}123.0{\mu}g/mg$인 데에 비하여 매생이 추출물 투여군은 $2,454{\pm}113.8-2,670{\pm}133.1{\mu}g/mg$로 높게 나타났다. 매생이로부터 추출한 면역증강물질은 마우스에 대한 급성독성을 측정한 결과, 체중 1kg당 2,000mg 투여 시 까지도 독성을 나타내지 않아 인체에도 무해할 것으로 사료되었다.
와송으로부터 고온 고압의 열수 추출로 다당체 조추출물(OJP1)을 얻어 디스크 확산법, fluorescein diacetate(PDA)법 및 액체 배지 희석법을 통하여 세균과 진균에 대한 항균 활성을 조사하였다. 또한 Sephadex G-50을 통하여 다당체(FI)와 올리고당류(FII)를 분리하고, 이들의 항암 활성을 조사하였다. FI과 FII의 분자량은 각각 30$\~$50 kDa과 1$\~$3 kDa으로 추정되었다. OJP1의 항균 효과는 디스크 확산법에서 Candida albicans가 $20\pm4.9\;mm$의 억제대로 가장 높았으며, Salmonella typhimurium과 Staphylococcus aureus도 각각 $18\pm2.0\;mm$ 와 $17\pm1.0\;mm$의 억제대로 비교적 높게 나타났다. 또한 Escherichia coli와 Pseudomonas aeruginosa에 대해서도 양성 대조군인 프로폴리스보다 높게 나타났으며, FDA법, 액체배지 희석법에서도 비슷한 양상을 나타냈다. OJP1과 Fl, FII의 인체 암세포주와 Sarcoma 180 세포주에 대한 항암 활성을 측정해 본 결과, 이들은 모두 MTT assay와 형태 변화 관찰에서 강력한 암세포주 증식 억제 효과를 나타내었는데, 특히 폐암 세포주인 A549 세포와 자궁 경부암 세포주인 HeLa 세포, 위암 세포주인 AGS에서 현저한 효과를 보였다. 더 나아가 DNA 분절화를 통해 apoptosis 유발 여부를 확인해 본 결과, 대조군에 비해서 이들 물질을 처리한 실험군에서 apoptosis발생을 뜻하는 DNA 분절화 현상이 뚜fut하게 나타났다. 요컨대, OJP1과 Fl, FII는 광범위한 병원성 균주에 대하여 효과적인 항균 활성을 보였으며, 각종 암세포주에 대하여 현저한 항암 활성을 나타내는 것으로 확인되었다.
들버섯의 배양 균사체로부터 추출한 단백다당체는 마우스에 이식된 sarcoma 180에 대해서 유효한 항암력을 나타내었다. DEAE-Sephadex A-50을 이용하여 정제한 결과 4개의 분획을 얻었다. 이중 가장 항암효과가 큰 분획 C는 56.1 %의 종양저지율을 나타내었다. 분회 C는 45 %의 다당류와 18 %의 단백질로 되어있다. 그 다당류는 mannose(42.0 %), glucose(25.5 %), xylose(16.6 %), fucose(11.1 %)와 galactose(4.8 %)로 되어 있고 단백질은 17종의 아미노산으로 되어 있었다. 들버섯의 항암성분은 마우스 복강내에 있는 macrophage의 수를 현저히 증가시켰으며 비장내의 용혈반형성 세포수도 증가시킴으로써 면역 증강 작용이 있다.
영지버섯 Ganoderma lucidum과 잔나비걸상버섯 Ganoderna applanatum의 원형질체 융합균주 5개에 대하여 항암실험을 실시하여 그 중에서 다른 것에 비해 항암력이 높은 융합균주 F-2를 선발하였다. 그 항암성분을 조사하기 위하여 융합체의 균사를 액내 배양하고 열수추출물로부터 얻은 단백 다당체를 DEAE cellulose ion exchange column chromatography와 Sepharose CL-4B gel filtration을 이용하여 5가지 분획(Fr. I-V)으로 분리, 정제하여 모균주들과의 차이점을 비교, 분석하였다. 모균주와 분리한 각 성분들을 20mg/kg/day 용량으로 마우스의 복강에 투여하였을 때 sarcoma 180 고형암에 대하여 균주보다 융합체 성분(Fr. ll)의 종양억제율이 최고 1.5배로 증가되었다. 그리고 마우스의 면역에 영향을 미치는 항암성분을 연구한 결과, 대조군에 비해 활성화된 대식세포에서 분비되는 superoxide anion의 양을 1.2배, 비장세포중의 용혈반 형성 세포수를 4.3배로 증가시켰다. 화학분석에 의하면 이 성분은 glucose, galactose, mannose, fucose와 xylose로 구성된 다당류가 85.2%이며 15종의 아미노산으로 구성된 단백질이 0.39%이었고, hexosamine이 0.39%로 구성되었으며 분자량은 $5.6{\times}10^4$ dalton이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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