Antigenic ompC genes of S. gallinarum, S. pullorum and S. dublin were characterized among Salmonella spp. isolated from chickens and other animals to identify genetic variation. Salmonella ompC gene fragment (1,027 bp) was amplified by PCR and the amplicons were cloned for comparison of nucleotide sequences. The identity of the sequences between S. gallinarum and S. pullorum, S. gallinarum and S. dublin, S. pullorum and S. dublin was 99.8%, 97.6% and 97.8%, respectively. Also, we found that ompC has some diversity between S. gallinarum and S. pullorum, and other Salmonella spp. which may be useful to type the organisms. Similar to diagnosis in other organisms, the TaqMan PCR method can be applied to rapid and accurate diagnosis of salmonellosis in chickens and other animals. We designed PCR primers and TaqMan probe for flagellin gene (fliC) for detection of Salmonella spp. by TaqMan PCR. The TaqMan PCR method was 10,000 times more sensitive than conventional PCR.
The incidence of zoonoses in Korea has recently increased. But the study for high risk group such as pig farmers to zoonoses has not been conducted in Korea. Thus we reviewed the articles in order to obtain basic data for zoonoses among pig farmers, especially in rural communities. Pigs are one of the most important domestic livestock in Korea not only from economic standpoint but also from standpoint of food. Pigs also represent a potential reservoir for many novel pathogens, therefore may transmit these to humans via direct contact, vectors such as mosquitos, or contaminated meat. The zoonoses associated with pigs can be classified into bacterial pathogen, viruses and so on. Bacterial zoonoses include brucellosis, leptospirosis, listeriosis, enterohemorrhagic Escherichia coli infection, pasteurellosis, salmonellosis, yersiniosis, tuberculosis, anthrax, necrobacillosis, swine erysipelas, erysipeloid, melioidosis, Streptococcus suis infection, Clostrium difficile infection, and campylobactor infection. Viral zoonoses consist of Japanese encephalitis, swine influenza, Nipah virus, Reston ebolavirus, and hepatitis E virus infection. Other type of zoonoses include actinomycosis, toxoplasmosis and Taenia solium infection. These zoonoses were important in Korean health policy but lately they have been overlooked. For effective health policy, we need to study zoonoses associated with pigs, and clinicians and veterinarians must care deeply about these zoonoses.
This experiment was conducted to investigate the effects of Bamboo Vinegar Liquid(BVL) on performance and meat quality of Korean native chicken(KNC) for 8 weeks. One hundreds KNC were divided into 4 groups with 5 replicates per treatment and placed in pens. Dietary levels of food waste 0%, 1%, 2% and 4% were included in experimental diets. The growth performance and carcass weight of KNC fed BVL supplement diet were significantly different(P<0.05) from the control group. The lipid content, cholesterol content and TBA in breast meat were significantly(P<0.05) decreased by addition of BVL. However, the addition of BVL did not affect the meat color. The saturated fatty acid composition of breast meat was decreased(P<0.05), whereas unsaturated fatty acid was increased(P<0.05) by addition of BVL 1% and 2%. Taste of sensory evaluation was improved by addition BVL. The results of this study indicate that dietary supplemental BVL 1% and 2% may improve the performance and meat quality of KNC. The prevention effect of KNC which challenged with Salmonella gallinarum (1${\times}$10$\^$9/ CFU/ml) was evaluated. A reisolation of S.gallinarum in liver, pathological index of villus and colon were evaluated. There was no reisolation of S.gallinarum in liver and a few pathological index of colon in 4% BVL supplement fed KNC than 1 and 2%. These results indicate that dietary supplemental BVL 4% may improve the prevention effect to salmonellosis in chickens.
The purposes of this investigations were survey of the occurred bacterial diseases, development of new animal health drug, guidance to formers on the treatment and control methods of diseases. Some series of investigations have been carried out by microbiological, pathological and serological examinations. The results could be summarized as follows. 1. A total of 953 cases of outbreaked swine diseases have been diagnosed in Clinical pathology laboratories, Bayer Vet Res Institute during 8 years (from 1986 to 1993). The high incidence diseases were colibacillosis, pleuropneumonia, streptococcal infection and pasteurellosis in decreasing order. 2. Pleuropneumonia caused by Actinobacillus pleuropneumoniae was the most important respiratory diseases and pasteurellosis by Pasteurella multocide could be confirmed in several cases. 3. Actinobacillus pleuropneumoniae 50 strains were isolated and identified by biochemical and serological tests. In serotyping test, 22 isolated strains were serotype 5, 21 strains as serotype 2, each 2 strains as serotype 3 and 7 by the coagglutination test. 4. Colibacillosis and edema discase caused by Escherichia coli has been the most predominant outbreaked disease in this investigations. The 100 isolates of E coli strains were sensitive to amikacin, colistin, enrofloxacin, gentamycin and trimethoprim -sulfamethoxazole. 5. Swine erysipelas caused by Erysipelothrix rhusiopathiae was confirmed 25 cases as acute septicemic forms. Isolates of E rhusiopathiae were highly sensitive to ampicillin, cephalothin, enrofloxcin, penicillin and tetracycline. 6. The 49 cases of hemorrhagic and necrotic enteritis in piglets were observed and 13 strains of Clostridium perfringens could be isolated and confirmed by biological and serological test. Isolates of Clostridium perfringens type C were highly sensitive to ampicillin, cephalothin, enrofloxacin, penicillin and trimethoprim- sulfamethoxazole. 7. The 14 strains of Streptococcus suis type II could be isolated from meningitis of piplets. 8. Polyserositis caused by Haemophilus parasuis and salmonellosis were observed and confirmed. Also Corynebacterial infections and several parasitosis have been also observed in this investigations.
Commercial bivalent killed Salmonella vaccine Salenvac-T has been used in several countries in order to prevent salmonellosis with Salmonella enterica serovars Enteritidis (SE) and Typhimurium (ST) in poultry. However, this vaccine has not been used in poultry farms in South Korea. In this study, we evaluated the efficacy of Salenvac-T vaccine to protect against the challenge of virulent SE and ST, and the effect of the vaccine on egg production and mortality in layer hens. The colonization of liver, spleen and cecum with challenged SE and ST was reduced in vaccinated chickens compared with that of unvaccinated control group. The twice vaccination with Salenvac-T induced elevated antibody responses against both SE and ST detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The higher average hen-day production was observed in the vaccinated layer hens than in the unvaccinated layer hens without significance. The average mortality was lower in the vaccinated layer hens during the experiment period. The antibody responses to both SE and ST were persistently detected in the vaccinated layers. In summary, vaccination with Salenvac-T reduces colonization of internal organs and induces good antibody responses, thereby results in higher performance and lower egg contamination with SE and ST in layer hens.
Salmonella Gallinarum (SG) is known as an important pathogen that causes fowl typhoid in chickens. To investigate SG outer-membrane proteins (OMPs) as a vaccine candidate, we used proteomic mapping and database analysis techniques with extracted OMPs. Also, extracted OMPs were evaluated in several aspects to their safety, immune response in their host and protective effects. Our research has established a proteomic map and database of immunogenic SG-OMPs used as inactive vaccine against salmonellosis in chickens. A total of 22 spots were detected by 2-dimensional gel electrophoresis and immunogenic protein analysis. Eight spots were identified by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-Time of Flight-Mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) and peptide mass fingerprinting (PMF) and categorized into four different types of proteins. Among these proteins, OmpA is considered to be an immunogenic protein and involved in the hosts' immune system. To estimate the minimum safety dose in chickens, 35 brown layers were immunized with various concentrations of OMPs, respectively. Consequently, all chickens immunized with more than a $50{\mu}g$ dose were protected against challenges. Moreover, intramuscular administration of OMPs to chickens was more effective compared to subcutaneous administration. These results suggest that the adjuvanted SG-OMP vaccine not only induces both the humoral and cellular immune response in the host but also highly protects the hosts' exposed to virulent SG with $50{\mu}g$ OMPs extracted by our method.
Salmonella species are the most prevalent etiologic agents of food-borne acute gastroenteritis. Direct isolation of bacteria from the contaminated food, stool and animal tissues has been used for the diagnosis of salmonellosis routinely. However, isolation of bacteria is time consuming work and not so highly sensitive. In recent years, improved methods of polymerization chain reaction(PCR) and probe hybridization technique have led to the developement of diagnostic assays which employ to detect various human and animal pathogenic bacteria. In this study, we have performed the polymerization chain reaction to detect Salmonella pullorum from tissues and stool samples of chickens with two specific primers, ST5 and ST8C. The target DNA fragment of PhoE gene was successfully amplified from liver, spleen, pancreas, heart, lung, ovary, oviduct and feces samples. The amplified DNA fragments were hybridized with Salmonella typhymurium TA3000 PhoE probe by Southern hybridization. The PCR to amplify the PhoE gene was highly rapid and sensitive method to detect Salmonella pullorum from tissues and stool samples.
The objective of this research was to evaluate the immune response to Salmonella Gallinarum experimentally infected layers fed with Guanosine 5'-monophosphate-chelated calcium and iron feed additives. Hy-Line brown, 34 week-olds layers were assigned to 3 groups; Group 1: basal diet feed, Group 2 (CaFe-GMP): basal diet feed mixed with chelated calcium and iron, and Group 3 (Fe-OCHT): basal diet feed mixed with chitosan for 4 weeks. There were challenged with 1.0×108 CFU/mL of the cultured Salmonella Gallinarum (SG) by oral administration on 28th feeding days. After SG challenge, Flow cytometric profiles showed that the CD4+/CD8+ T lymphocyte activation of Group 2 was much higher than Group 1 and Group 3 (P<0.05). In addition, the levels of interleukin-2 (13.37 mg/dl) and interferon-γ (2.35 mg/dl) in Group 2 were higher than Group 1 and Group 2. Populations of Lactic acid bacteria (3.5×1010 CFU/g) from cecum was highest observed in group 2. Re-isolation of SG from cecum in group 2 (8×105 CFU/g) was lower than group 1 (1.83×1010 CFU/g). The result of this study demonstrated that CaFe-GMP feed additive may be one of the potential candidates to control salmonellosis and functional feeds in layers.
Distribution of Salmonella enterica serovars and their associated virulence determinants is wide-spread among food animals, which are continuously implicated in periodic salmonellosis outbreaks globally. The aim of this study was to determine and evaluate the diversity of five Salmonella serovar virulence genes (invA, pefA, cdtB, spvC and iroN) isolated from food animals and humans. Using standard microbiological techniques, Salmonella spp. were isolated from the feces of humans and three major food animals. Virulence determinants of the isolates were assayed using PCR. Clonal relatedness of the dominant serovar was determined via pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) using the restriction enzyme, Xbal. Seventy one Salmonella spp. were isolated and serotyped into 44 serovars. Non-typhoidal Salmonella (NTS; 68) accounted for majority (95.8%) of the Salmonella serovars. Isolates from chicken (34) accounted for 47.9% of all isolates, out of which S. Budapest (14) was predominant (34.8%). However, the dominant S. Budapest serovars showed no genetic relatedness. The invA gene located on SPI-1 was detected in all isolates. Furthermore, 94% of the isolates from sheep harbored the spvC genes. The iroN gene was present in 50%, 100%, 88%, and 91% of isolates from human, chicken, sheep, and cattle, respectively. The pefA gene was detected in 18 isolates from chicken and a single isolate from sheep. Notably, having diverse Salmonella serovars containing plasmid encoded virulence genes circulating the food chain is of public health significance; hence, surveillance is required.
Salmonellosis is a highly contagious bacterial disease that threatens both human and poultry health. Tests that can detect Salmonella in the field are urgently required to facilitate disease control and for epidemiological investigations. Here, we combined loop-mediated isothermal amplification (LAMP) with a chromatographic lateral flow dipstick (LFD) to rapidly and accurately detect Salmonella. LAMP primers were designed to target the Salmonella invA gene. LAMP conditions were optimized by adjusting the ratio of inner to outer primers, $MgSO_4$ concentration, dNTP mix concentration, amplification temperature, and amplification time. We evaluated the specificity of our novel LAMP-LFD method using six Salmonella species and six related non-Salmonella strains. All six of the Salmonella strains, but none of the non-Salmonella strains, were amplified. LAMP-LFD was sensitive enough to detect concentrations of Salmonella enterica subsp. enterica serovar Pullorum genomic DNA as low as $89fg/{\mu}l$, which is 1,000 times more sensitive than conventional PCR. When artificially contaminated feed samples were analyzed, LAMP-LFD was also more sensitive than PCR. Finally, LAMP-LFD gave no false positives across 350 chicken anal swabs. Therefore, our novel LAMP-LFD assay was highly sensitive, specific, convenient, and fast, making it a valuable tool for the early diagnosis and monitoring of Salmonella infection in chickens.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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