High titer rabbit polyclonal antibodies (pAbs) which show a specificity for saikosaponin a (SSA), have been generated. The immunogen used was a conjugate of SSA linked through its glucose moiety to bovine serum albumin by periodate oxidation method. The antibody titers obtained from two rabbits, innoculated with the immunogen, reached a plateau after the fourth and third booster injection, respectively. The specificity of the pAbs was determined by hapten inhibition assays using several SSA-like structures. SSA competitively inhibited the binding of the rabbit anti-SSA pAbs to SSA-ovalbumin on solid phase, a coated antigen on the well. The antibodies showed high specificity to SSA, exhibiting no significant cross-reactivity with any of SSA analogues tested.
식물중에서 배당체 일종인 saponins을 다량 함유한 시호(Bupleurum falcatum)로부터 생체 조절 기능을 갖는 유효성분을 분리하여 혈소판 활성화 작용을 통하여 뇌심혈관계 질환 연구에 이용하고자 시호 용매 분획물에서 분리 및 동정한 Saikosapini을 thronbin, collagen, arachidonic acid 등의 효능제(agonist)와 세포의 $Ca^{2+}$ 의존성을 비교연구하였다. 시호 용매추출물 중에 acetone 추출물이 혈소판 응집작용이 강하며, 그 유효성분을 분리 및 동정한 saikosaponin a와 d는 C16 위치에 각각 ${\alpha}와\;{\beta}$형의 OH기를 갖는 이성체로, saikosapnin d가 a보다 강한 응집작용을 갖는 구조활성관계를 나타내고 있다. 각 효능제에 따라서 혈소판 활성화에 대한 세포의 $Ca^{2+}$ 의존성은 thrombin > colagen $\geq$ PAF>PMA> arachidonic acid $\geq$ Ionophore A23187순으로 나타났다. 시호 추출물 및 saikosaponin의 혈소판 활성화 작용은 기존 효능제와 다른 세포의 $Ca^{2+}$의존성을 나타내는 것으로 사료된다.
시호 모상근 태양에선 MS와 RCM 배지를 기본배지로 하는 몇 가지 배지를 사용하여 생장과 사이코사포닌 함량을 비교하였으며, 그 중 MS와 3RCM 두 배지에서 보이는 생장과 성분 함량의 차이가 뿌리의 조직학적 차이와 연관이 있는지를 조사하였다. 모상근의 생장은 생중량은 MS배지가 건중량은 3RCM 배지가 각각 양호하였으며, MS와 3RCM의 건중량에 대한 생중량의 비가 각각 7.6%와 14%로 MS 배지가 함수량이 높았다. 사이코사포닌 함량은 MS배지에서는 극히 낮은 함량을 나타내었으나, 3RCM 배지에서는 총함량에서 국내 1년산 재배근의 약 $2.2{\sim}5.5$배의 함량을 나타내었다. 한편, 두 배지에서 배양한 시료의 근단부와 뿌리끝 1 cm 부근에서는 조직학적인 큰 차이를 관찰할 수 없었으나, 성숙대에서 는 MS 배지 보다 3RCM 배지에서 목부 사부 세포들의 발달이 보다 뚜렷하고, 3RCM 에서는 많은 세포에서 탄닌을 함유하는 것으로 추정되는 진한 염색의 액포 또는 세포 소기관이 관찰되었다. 따라서 이러한 세포 소기관의 발달은 사이코사포닌을 포함한 2차대사물질의 생합성과 연관이 았는 것으로 사료된다.
남부지방에 서식하는 식물체 중에서 꽃기린, 민들레, 박주가리, 후박나무, 팔손이 나무, 달맞이꽃, 동백나무 그리고 유동나무를 대상으로 약용성분의 일부분을 차지하고 있는 saponins 및 alkaloids의 검색을 실시한 결과를 요약하면, 1. Crude saponins 함량 중, crude 인삼 saponins 함량은 달맞이꽃이 가장 높았으며, crude saikosaponins 함량은 박주가리에서 가장 높게 나타났다. 2. Crude alkaloids 함량은 박주가리에서 가장 높게 나타났다. 3. Saponins 획분에 대해 HPLC분석을 실시한 결과, 꽃기린, 민들레 그리고 박주가리에는 인삼 saponin태 물질, 후박나무, 팔손이나무 그리고 달맞이꽃에는 인삼 saponin태 물질과 saikosaponin c태 물질, 동백나무와 유동나무에는 saikosaponin c태 물질의 존재가 추측되었다. 4. Alkaloids 획분에 대해 GC분석을 실시한 결과, 팔손이나무에서만 nicotine태 물질의 존재가 추측되었다.
토성 및 토양수분에 따른 시호근의 생육특성과 saikosaponin함량 및 항산화효소 활성 변화를 조사해 본 결과, 수분과다 토양에서 는 삼도시 호는 장수시호보다 생육 억제정도가 매우 높았고, 건물중은 과습, 적습, 과건 재배 순으로 높았고, 수분조건에 따른 토성별로는 과건은 식양토, 사양토, 사토 순으로, 적습과 과습시는 사토, 사양토, 식양토 순으로 높았다. 토양수분조건별 saikosapon a, d, c함량은 과건, 적습, 과습 순으로 높았고, 토성간에는 사토, 사양토, 식양토 순으로 높았다. POD 활성은 지상부는 장수시호가 삼도에 비하여 매우 높았고, 토양 수분함량간에는 장수는 과건, 과습, 적습 조건 순으로 높았으나, 삼도시 호는 과건, 적습, 과습 순으로 높았다. SOD활성은 지상부와 지하부 공히 장수시호가 높은 경향이나, 수분조건별로는 과건, 과습, 적습순으로 높았으며, 건조상태의 경우 두 품종 모두 사토에서 높았다. 시호에서 뿌리의 Saikosaponin함량과 POD 및 SOD 함량과는 정의상관을 나타내는 경향이었고 줄기 및 뿌리길이와 POD함량과는 부의 상관을 나타내었다.
1. 천연 항염증 물질의 분리 천연 항염증 약물 개발을 목표로 하여 한방과 민간에서 소염, 진통의 목적으로 이용되는 식물들을 대상으로 Carrageenin에 의해 유도된 백서 후족 부종의 억제를 지표로 Screening을 행한 결과, 2종의 식물의 부탄을 엑스가 항염증 활성을 나타내었다. 즉, 호랑가시나무(flex cornuta L. ) 잎 및 쑥부쟁이 (Aster yomena Makinc)의 부탄을 엑스가 Aspirin(300mg/kg)에 필적하는 항염증작용을 나타내었다. 이 식물들의 부탄을 엑스로 부터 각각 2종의 화합물을 분리하였다. 호랑가시나무로 부터는 01eanane type의 monodesmoside와 Pomolic acid bisdesmoside가, 쑥부쟁이로 부터는 Hederagenin bisdesmoside및 구조 미확정의 물질이 각각 분리되었다. 2.천연 항염증 물질의 구조 변환 항염증 약물로 많이 이용되고 있는 시호(Bupleurum falcatum L.)의 유효성분인 Saikosaponin-a의 용해도 개선을 위하여 그 유도체를 합성하였다. 합성된 Saikosaponin-a hemisuccinate의 K염은, 용해도 시험 결과 현저한 용해도 증가를 보였다.
In order to survey possibility to produce saikosaponin from in vitro hairy root culture, culture of callus, adventitous root, and hairy root of Bupleurum falcatum L. were estabilished, and quantitative and qualitative aspects in saikosaponin extracted from these were compared with those of cultivated root. Callus grew well in MS medium containing 0.9 $\mu$M 2, 4-D. In contrast, both of adventitous root and hairy root grew well in hormone-free MS medium. However, hairy root showed more rapid growth with extensive lateral root branches, characteristics of lower content of water and softer than in adventitous root. Among the selected lines of adventitous root and hairy root were observed difference in the growth rate. Mannopine, one of opine synthesized in the transformed tissue with Agrobacterium rhizogenes. A4 were detected in the extract of hairy root lines. Pattern and content of crude saponin from adventitous and hairy root showed no difference, but somewhat difference from those of cultivated root. However, in callus, distinct production-aspect of saponin was not observed.
Kim, Choon-Shik;Seong, Jae-Duck;Park, Chung-Heon;Park, Chun-Gun;Cho, Yang-Hee;Kwak, Jun-Soo
한국약용작물학회지
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제13권5호
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pp.298-302
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2005
In order to decide the optimum planting time for Bupleurum falcatum L. which is grown widely in Korea, some experiments were carried out in different regions such as mid-north area (Gangwon-do, Gyeonggi-do and Chungcheongnamdo), mid-south area (Jeollanam-do, Jeollabuk-do, Gyeongsangnam-do and Gyeongsangbuk-do). The mid-south area had the highest total saikosaponin contents of 1.001, which is the medicinal ingredients of Bupleurum falcatum L., in accordance with the different Bupleurum falcatum L. regions. Also this area has the highest extract contents of 24.3%. Average dry root yields in mid-north area (Gangwon-do) were $450{\sim}460$ kg/ha at planting time of March 20th to March 30th, 500 kg/ha at the time of March 30th to April 10th, and $470{\sim}480$ kg/ha at the time of March 10th to March 20th in Chungcheongnam-do. The optimum planting time in the mid-south area (Jeollabuk-do) was March 10th to March 30th with the average dry root yield of $490{\sim}550$ kg/ha. Average dry root yield in Euiseong, Gyeongsangbuk-do area was 470 kg/ha, and the optimum planting time was April 10th, which suggested that the yield increased as the planting time was delayed. At Jeju-do, the volcanic soil of farsouthern area, average dry root yield was 510 kg/ha at the time of March 10th, but the yield from non-volcanic soil was lower than from volcanic soil, which had a dry root yield of 470 kg/ha.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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