Efficient extraction of total proteins from soil microorganisms is tedious because of small quantity. In this regard, an improved method for extraction of whole cell proteins is developed from soil microorganisms, Saccharomyces cerevisiae and Pichia pastoris. of which the cell wall are very strong. Pretreatment with NH4OH prior to the final extraction using NaOH/SDS was tried under the basis that ammonium ion was possible to enhance the permeability and/or to weaken the yeast cell walls. The pre-treatment of yeast cells with NH4OH drastically enhanced the protein extraction when it was compared with control (without NH4OH pre-treatment). At the pre-treatment of 0.04 N NH4OH at pH 9.0, about 3 fold of proteins was obtained from p. pastoris. Ammonium hydroxide appears to penetrate into the yeast cell walls more readily at basic pH. The effect of NH4OH pretreatment was pH dependent. The methods developed in this experiment might be applicable for an effective extraction of yeast proteins for the purpose of biochemical studies, especially proteomic analysis.
Aspergillus nidulans는 빛이 없는 조건에서는 유성분화가 주로 일어나고 빛이 있는 조건에서는 유성분화가 억제되고 대신 무성분화가 유도된다. 빛에 의해서 유성분화가 억제되는 것은 빛에 반응하여 유성 또는 무성분화를 조절하는 유전자가 있다는 것을 시사한다. 따라서 빛에 의해서 조절되는 유전자를 연구하기 위하여 광 조건하에서 유성분화를 하는 silA98 돌연변이를 분리하였으며, 이를 보완하는 유전자를 분리 및 분석하고자 A. nidulans의 AMA-NotI genomic library로부터 silA98 돌연변이를 상보하는 유전자 silA를 분리하였다. silA 유전자의 예상 ORF는 2,388 bp의 염기로 구성되어지고 795개의 아미노산을 암호화하고 있었다. 이 유전자는 Saccharomyces cerevisiae의 ARO80 유전자와 상동성을 보이며 SilA 단백질의 N 말단에는 약 51.9%의 상동성을 가지는 ${Zn_2}{Cys_6}$ motif를 지니고 있었다. silA 유전자 결손돌연변이주는 광 존재 하에서뿐만 아니라 고농도의 sorbitol에서도 유성분화가 유도되었다. 이는 silA 유전자가 빛과 고삼투 조건에서 유성분화를 억제하는 조절과정에 관여하고 있음을 의미한다. silA 유전자를 niiA promoter로 과다 발현시켰을 때의 형질은 야생형과 큰 차이를 보이지 않았다.
Information on the effects of different yeast species on ruminal fermentation is limited. This experiment was conducted in a $3{\times}4$ factorial arrangement to explore and compare the effects of addition of three different live yeast species (Candida utilis 1314, Saccharomyces cerevisiae 1355, and Candida tropicalis 1254) at four doses (0, $0.25{\times}10^7$, $0.50{\times}10^7$, and $0.75{\times}10^7$ colony-forming unit [cfu]) on in vitro gas production kinetics, fiber degradation, methane production and ruminal fermentation characteristics of maize stover, and rice straw by mixed rumen microorganisms in dairy cows. The maximum gas production (Vf), dry matter disappearance (IVDMD), neutral detergent fiber disappearance (IVNDFD), and methane production in C. utilis group were less (p<0.01) than other two live yeast supplemented groups. The inclusion of S. cerevisiae reduced (p<0.01) the concentrations of ammonia nitrogen ($NH_3$-N), isobutyrate, and isovalerate compared to the other two yeast groups. C. tropicalis addition generally enhanced (p<0.05) IVDMD and IVNDFD. The $NH_3$-N concentration and $CH_4$ production were increased (p<0.05) by the addition of S. cerevisiae and C. tropicalis compared with the control. Supplementation of three yeast species decreased (p<0.05) or numerically decreased the ratio of acetate to propionate. The current results indicate that C. tropicalis is more preferred as yeast culture supplements, and its optimal dose should be $0.25{\times}10^7$ cfu/500 mg substrates in vitro.
본 연구에서는 전통 누룩으로부터 분리한 효모를 이용한 증류주의 제조특성을 검토하였다. 발효 마지막 날의 술덧 분석결과 알코올은 최종 발효 시에는 17.2%를 나타내었다. 유기산은 succinic acid가 최종 발효 시 가장 높은 $7,164.7{\pm}85.2ppm$을 나타내었고 다음으로 입국에서 유래된 citric acid가 $1,995{\pm}124.3ppm$로 높게 검출되었다. 증류 조건에 따른 알코올 분석 결과 초류를 7% 버리고 본류를 50%까지 받아 증류 수율이 낮은 증류 조건 6이 알코올이 가장 낮은 $29.6{\pm}0.0%$였으며 본류만 30% 받은 증류 조건 4가 가장 높은 $59.9{\pm}0.1%$였다. n-propanol 분석 결과는 1, 4번 조건 증류주에서 가장 높은 $163.4{\pm}18.3$, $174.0{\pm}0.1ppm$이 측정되었고 isobutanol의 경우에도 n-propanol과 유사한 경향을 보였으며 1, 4번 조건 증류주에서 가장 높은 $234.5{\pm}28.2$, $231.7{\pm}1.0ppm$이 측정되었다. Acetaldehyde는 1, 4번 조건 증류주에서 가장 높은 $303.4{\pm}4.5$, $325.4{\pm}13.1ppm$이 측정되었다. 증류 직후 공통적으로 14개의 휘발성분이 확인되었고 증류주 전체적으로 높은 분석 결과를 나타낸 것은 isoamyl alcohol이었다. 초류 커트와 상관없이 본류를 50% 받은 3, 5, 6, 7 번 증류 조건에서 달콤한 향을 나타나는 isobutyl alcohol, pleasant fruit과 floral 향을 내는 ethyl octanoate 높게 검출되었다. 증류 후 관능결과로는 1번 조건이 전체적인 기호도와 종합적 평가($5.8{\pm}0.9$)에서 가장 좋은 관능평가를 받았다.
In an effort to understand the role of the conserved domain and of the heterologous one-third part of the carboxy terminal domain of transglutaminase C (TGase II), attempts were made to express TGase II cDNA of human origin in yeast Saccharomyces cerevisiae as in a full-length form as well as in a form of C-terminal truncation. The 2$\mu$-based expression plasmids which contained the TGase II cDNA under the gal inducible promoter were introduced into yeast and the maintenance of the full-length and truncated form of the TGase II gene plasmids were confirmed by Southern blot. The expression of the TGase II gene was analysed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), and western blot analyses. As assayed by [1,4$^{14}$C]-putrescine incorporation into succinylated casein, the full-lenth as well as the truncated forms of recombinant TGase II showed some catalytic activity. These results indicate that the N-terminal homologous domain of human TGase II retains a catalytically active domain. The level of TGase II expressed in yeast, however, was far lower than satisfactory and other expression system should be sought further chracterization of the enzyme. The negative effect of TGase II on the growth of yeast is interesting with respect to the physiological effect of TGase II in cornification of epidermal keratinocytes.
Saccharomyces cerevisiae strain M was cultured in a molasses-containing media with repeated transplantations of the yeasts from one culture to another to adapt to molasses. After that only different amounts of phosphorous and nitrogen sources were added to the media. And then some variations during the culture time and the effects of consituents of cell mass on the functional activity and sensitivity of the cell were investigated. The results obtained were summarized as follows : 1. In the same culture condition of yeasts, the carbohydrates and trehaloses contents were more remarkably increased when small amounts of phosphate and nitrogen sources were added, then when alrge amounts were added, but yield percentage on assimilated sugars was lower. 2. The content of trehalose in yeast cells was reduced remarkably at the early stage in the culture, but this increased remarkably at later stage. When small amounts of nitrogen and phosphate were added to the culture medium, the amount of thehalose in the cells increased greasly. 3. The more protein content was present in the yeast cells, the smaller the carbohydrate and trehalose content, but more amino-N, RNA and moisture content were present in the cells. And in this case fermentability of the cells was stronger, but sugar tolerance was lower. 4. During the preservation period of compressed yeast cells at different temperature, the higher the temperature was, the more rapidly the amount of trehalose in the cells decreased. And in the cell where the amount of trehalose in the cells decreased. And in the cell where the amount of trehalose(carbohydrate) was large and the amount of protein was small, the amount of trehalose decreased at a slower rate during the preservation period.
목적: 국내 소아에서 발생한 유산균 제제 내 포함 균주(Lactobacillus spp. 및 Saccharomyces spp.)에 의한 침습적 감염증의 임상 경과를 기술하고 중증 감염증 발생과 관련된 인자들을 분석하였다. 방법: 1998년 1월부터 2016년 6월까지 서울아산병원 어린이병원에서 18세 이하의 소아청소년 환아에게서 발생한 Lactobacillus spp. 및 Saccharomyces spp.에 의한 침습적 감염증의 의무기록과 2001년 1월부터 2016년 6월까지 원내에서 처방된 유산균 제제 처방량 자료를 후향적으로 분석하였다. 결과: 연구 기간 동안 총 24명의 침습적 감염이 발생하였다(Lactobacillus spp. 16예 및 Saccharomyces spp. 8예). 유산균 제제의 처방량은 2001년부터 2016년까지 통계적으로 유의미하게 증가하는 양상을 보였으며, 이에 따라 침습적 감염증의 발생률도 증가하였다($R^2=0.70$). 환아들의 중간 연령은 1.8세(범위, 2개월-17세)이었고, 1명을 제외한 환아에서 기저질환을 동반하였다. 30일 사망률은 20.8% (5/24)였으며, 중증 감염증은 11예(45.8%)에서 발생하였다. 어린 연령의 환아이거나(P=0.02), 선천 심질환이 있는 경우(P=0.01) 또는 침습적 감염증 발생 전 중환자실 재실 중이었거나(odds ratio [OR], 3.0; 95% confidence interval [CI], 1.5-6.1), 중심정맥관을 가지고 있던 경우(OR, 2.2; 95% CI, 1.2-4.3)에 통계적으로 유의미하게 중증 감염으로의 발현이 증가하였다. 결론: 소아에서의 유산균 제제 내 균주에 의한 감염증은 흔하게 발생하지는 않지만, 유산균 제제의 사용량 증가와 함께 증가하는 양상을 보였다. 어린 환아 및 기저질환을 가지고 있거나 중환자실 치료 또는 중심정맥관을 보유하고 있는 환아에 대해서는 안전성을 고려하여 유산균 제제의 사용에 주의를 기울여야 한다.
본 연구에서는 전통누룩에서 분리한 S. cerevisiae 88-4를 이용하여 제조한 술의 증류방법에 따른 숙성 기간 중 품질 변화를 검토하고자 하였다. 8가지 조건에 따른 숙성 기간 180일까지의 알코올은 조금씩 감소하여 조건 8 (압력 -50 cmHg, 증류 온도 $60^{\circ}C$, 초류 7%, 본류 30%)의 경우 2.2%, 조건 1 (압력 -50 cmHg, 증류 온도 $50^{\circ}C$, 초류 0%, 본류 50%)의 경우는 0.4%의 알코올이 감소하였다. 2-싸이오바비트루산(TBA) 분석결과 숙성이 진행되면서 대부분의 증류주에서 TBA 값은 큰 변화가 없었으나 초기 알코올 농도가 낮았던 5 (압력 -60 cmHg, 증류 온도 $60^{\circ}C$, 초류 7%, 본류 50%), 6 (압력 -50 cmHg, 증류 온도 $50^{\circ}C$, 초류 7%, 본류 50%)번은 증가하였다. 노말프로판올(P), 아이소뷰탄올(B), 아이소아밀알코올(A) 분석결과 이후 숙성 기간이 증가함에 따른 노말프로판올 변화는 크지 않았으며 숙성 기간이 증가함에 따라 아이소뷰탄올은 감소하였으며 아이소아밀알코올은 변화가 없었다. 증류주의 숙성 기간별 향기성분은 각 증류주의 숙성에 따라 다양한 결과를 나타냈으며 조건 3 (압력 -60 cmHg, 증류 온도 $60^{\circ}C$, 초류 0%, 본류 30%) 증류주의 경우 위스키 향이 나는 아이소아밀알코올은 증류 0일차 이후에 조금 증가하였으며 달콤하면서 견과류의 향 특성을 나타내는 데칸산은 조금 감소하였다. 감각 검사 결과 숙성 기간에 따라 감각 결과에는 큰 차이 없었으며 종합적 평가($5.8{\pm}0.9$)가 가장 좋았던 3번 증류주의 감각 결과가 숙성 180일까지 이어졌다.
The effects of Saccharomyces cerevisiae supplementation ($6.6{\times}10^8cfu$) and anhydrous ammonia treatment (3%) of wheat straw (WS) were investigated on in-situ dry matter (DM) degradability, and on rumen fermentation and growth performance of lambs. Rumen-fistulated Menemen sheep fed a diet with and without live yeast were used to assess the DM degradability characteristics of WS and ammonia-treated wheat straw ($WS_{NH3}$). Twenty-six yearling Menemen male lambs were fed in four groups. Lambs of control group (WS) received untreated WS without supplemental yeast, whereas other three groups were fed WS treated with anhydrous ammonia ($WS_{NH3}$ group), untreated WS and yeast (WS+YEAST group) or WS treated with anhydrous ammonia and yeast ($WS_{NH3}$+YEAST group). Supplemented live yeast (4 g/d) was added in the diet. Lambs were offered untreated or ammonia treated WS ad-libitum and concentrate was fed at 1% of live body weight. The degradability of the water-insoluble (fraction B) was significantly increased by all of the treatment groups. Potential degradability (A+B), effective DM degradability's (pe2, pe5, and pe8) and average daily weight gain increased only in $WS_{NH3}$+YEAST group (p<0.05). Voluntary DM intake was not increased by the treatments (p>0.05), but voluntary metabolizable energy and crude protein intake were increased by $WS_{NH3}$ and by $WS_{NH3}$+YEAST (p<0.05). Average daily rumen pH was not affected by any of the treatments, but average daily $NH_3$-N was significantly higher in the $WS_{NH3}$ and $WS_{NH3}$+YEAST groups, and total volatile fatty acids were significantly higher in the WS+YEAST and $WS_{NH3}$+YEAST groups. In conclusion, the improvement of feed value of WS was better by the combination of ammonia-treatment and yeast supplementation compared to either treatment alone.
곶감중 당은 주로 glucose, fructose, mannose였다. 당도 조절을 위하여 가한 sucrose는 즉시 단당류로 분해되었다. Glucose는 $25^{\circ}C$ 발효의 경우 발효 8일째 거의 발효가 완료되었으나 $15^{\circ}C$ 경우 75% 정도 발효되었다. 발효속도는 발효온도에 관계없이 glucose>fructose>mannose 순이었다. 곶감에서 검출된 유기산은 acetic acid, levulinic acid, 4-methylvaleric acid, oxalic acid, N-butyric acid, succinic acid 등이었고 발효온도에 관계없이 발효초기에 감소하다 4일, 6일째 증가후 다시 감소하는 경향이었다. Levulinic acid는 발효가 진행됨에 따라 가장 급격히 감소하였다. Acetic acid와 4-methylvaleric acid는 발효가 진행됨에 따라 증가하였다. 유리 아미노산은 Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Met, Ser, Pro, Phe, Asp, Hyp, Glu, Asn, Lys, Gln, Arg, His, Trp, Tyr 등 19가지가 검출되었다. 총 유리아미노산의 함량은 발효온도에 관계없이 발효 2일까지는 감소하다가 다시 증가하여 2주에서 원료용액과 같은 수준이었다. Ethanol함량은 발효 8일째까지는 $25^{\circ}C$우 9.4%(v/v), $15^{\circ}C$ 발효의 경우는 5.3%(v/v)였으나 12주째에는 $25^{\circ}C$ 경우 9.4%(v/v), $15^{\circ}C$ 경우 14.5%(v/v)로 $15^{\circ}C$ 경우가 알코올함량이 높았다. 고급 알코올은 2-methyl-1-propanol, 3-methyl-1-butanol, 2-methyl-1-butanol, 2-methyl-2-propanol 등이 0.001%(v/v)에서 0.06%(v/v) 범위에서 검출되었고 발효기간의 경과에 따라 증가하는 경향이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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