• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권1호
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• pp.69-73
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• 1989

자가분해 효소는 Cl. butyricum의 포자형성 배지에서 배양할 때 체외로 배출되어 배양액에도 존재하였다. 배양액으로부터 약 50배로 부분정제된 자가분해 효소를 사용하여 효소의 성질을 조사하였다. 자가분해 효소의 최적 pH와 온도는 각각 5.0과 37$^{\circ}C$였으며 중성 pH에서는 안정하나, 열에는 비교적 불안정하여 5$0^{\circ}C$에서 5분간 열처리한 후 효소활성의 70%가 소실되었다. 또한 Cu ion$^{++}$에 의해서 효소활성이 저하되었으나 그 밖의 금속이온에 의하여서는 큰 영향을 받지 않았다. 또한 자가분해 효소는 기질로서 영양세포에는 직접 활성을 나타내지 못하나, 세포벽 fraction에는 활성을 가지고 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권6호
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• pp.957-963
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• 2001

Bacillus subtilis YL-1004 was isolated from soil for the development of agents to control dental caries. This strain produced an extracellular lytic enzyme that hydrolyzed the Streptococcus mutans cell wall. The lytic enzyme was purified to homogeneity by affinity chromatography and gel permeation chromatography to give a single band on SDS-PAGE and non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of the enzyme was deduced from SDS-PAGE and gel chromatography to be 38 kDa and the PI to be 4.3 from isoelectric focusing. Sirty $\%$ of its lytic activity remained after incubation at $50^{\circ}C$ for 30 min, and its optimal temperature was $37^{\circ}C$ . The enzyme showed its highest activity at pH 8.0 and was stable at pHs ranging from 4.0 to 9.0. Treatment with several modifiers showed that a cysteine residue was involved in the active site of the enzyme. This lytic enzyme from Bacillus subtilis YL-1004 exhibited specificity towards Streptococci and also showed autolytic activity on Bacillus subtilis YL-1004.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제27권4호
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• pp.298-303
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• 1999

An $\alpha$-D-galactosidase ($\alpha$-D-galactoside galactohydrolase, EC 3. 2. 1. 22) from earthworm was purified by affinity chromatography using N-$\varepsilon$-aminocaproyl-$\alpha$-D-galactopyranosylamine coupled to sepharose and its properties were examined. The specific activity of the purified enzyme, tested with p-nitrophenyl-$\alpha$-D-galactopyranoside as substrate, was 314 units/mg protein, representing an 122-fold purification of the original crude extract. The final preparation obtained from by Sephadex G-25 chromatography showed a single band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight was determined to be 48,000 by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The purified galactosidase was showed maximum activity at pH 4.5 and 4$0^{\circ}C$, and was stable in the pH and temperature ranges from 4.0 to 5.5 and 30 to 5$0^{\circ}C$, respectively. The enzyme activity was inhibited by Zn2+, Hg2+ and Co2+. When the purified $\alpha$-galactosidase treated to guar gum for 6 hour, gel-promoting property was increased. It was clear that enzymatic elimination of galactose from guar gum by purified $\alpha$-galactosidase would lead to a significant increase in gelation ability.

• 생명과학회지
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• 제8권5호
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• pp.598-603
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• 1998

1. 어류에서 분리한 V. anguillarum KS410의 용혈소를 분리하여 배양 상등액, 황산암모늄 침전, DEAE-cellulose column chromatography, Sephadex G-200 gel 여과 등의 과정을 통하여 36배 정제하였고 최종 회수율은 2.3%였다. 2. 정제된 용혈소의 SDS-PAGE상의 전기영동 결과는 38 Kda의 분자량을 보유하였다. 3. 온도에 대한 정제 용혈소는 45$^{\circ}C$까지는 안정하였으나 그 이상의 온도에서는 급격히 실활되어 이열성인 것으로 나타났다. 4. NaCl 농도에 따른 V. anguillarum 용혈소의 안정성은 1%가 가장 안정하였고 4%이상에서는 안정성이 감소하였다. 5. 정제된 용혈소의 pH 안정성은 6-9 사이었다. 6. 금속이온에 대한 정제 용혈소는 $Ca^{2+}, Cu^{2+}, Zn^{2+}, Fe^{2+}$ 첨가시에는 실활되었으나 $Mg^{2+}$첨가에는 영향을 받지 않았다. 7. 정제용혈소는 EDTA에 대하여 전혀 활성에 저해를 받지 않았으나 $FeCl_3$에서는 저해를 받았다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권1호
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• pp.44-48
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• 1990

토양에서 분리한 호알카리성 Bacillus sp. YC-335가 생산하는 CGTase를 ethanol 침전법, DEAE-Toyopearl column chromatography, Sephadex G-100 column chromatography 방법 등에 의해 대량 정제 하였다. 이때 수율은 17.8 이었고 52.9배의 정제도를 가진 효소단백질을 얻을 수 있었다. 정제효소는 SDS-polyacrylamide gel 전지영동에 의해 분자량이 75,000 정도인 단일 peptide의 단백질임을 확인하였고 효소의 최적활성 pH는 6.0 있었으며 pH 안정성은 pH 6-10까지 안정하였다. 최적활성온도는 5$0^{\circ}C$이었으며 열안정성은 5$0^{\circ}C$까지 안정하였고 이는 15mM CaCl$_2$에 의해 열안정성이 보호되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제27권2호
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• pp.129-135
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• 1999

EH-1 was highest at 9 days of incubation. This regrowth and enzymatic activity of Haloarcular sp. EH-1 was highest at 9 days of incubation. This amylase was purified by acetone fractionation, DEAG-Cellulose column chromatography, 1st Sephadex G-75 gel filtration, CM-Cellulose column chromatography and 2nd Sephadex G-75 gel filtration. The amylase was purified about 98.64 fold with a yield of 11.75%. The molecular weight of amylase was estimated to be about 43,000and 40,000 by gel filtration and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, respectively, suggesting that the enzyme was a monomer. Amylase had an optimal temperature of 4$0^{\circ}C$, and an optimum pH of 7.0, and the thermal stability was observed the above 50% at 10$0^{\circ}C$ after 1 hour, and the stable range of pH was 6.0 to 8.0. The enzymatic activity was increased in the presence of 10 mM 2-mercaptoethanol, slightly by 10 mM SnCl2.2H2O.FeCl2.4H2O.CuCl2.2H2O.HgCl2.6H2O and SDS. End products from soluble starch were glucose, maltose and maltotriose, and Km value for soluble starch was 2.5mg/ml.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권3호
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• pp.209-214
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• 1991

Lactococcus sp. 1112-1 균주가 생산하는 bacteriocin을 정제하고 특성을 조사하였다. CM-sephadex ion exchange column chromatography, Sephadex G-50 gel filtration, SDS-PAGE를 행함으로서 수율 16.2 정제도 123배의 단일물질을 얻었다. 이 물질은 열에 비교적 안정하여 $60^{\circ}C$에서 60분간 열처리 할 때 38의 잔존활성을 유지하였으며 알카리쪽에서는 비교적 불안정하여 pH 8.0에서 48시간 처리시 77의 활성을 소실하였다. 이 물질은 26개의 아미노산 잔기를 이루고 있었다.

• 미생물학회지
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• 제30권3호
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• pp.160-163
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• 1992

원형질체 융합을 통하여 육성한 killer 효모 융합주 FWKS 260 의 killer toxin 을 ammonium sulfate fractionation, Amicon PM 10 concentration, Sephadex G-200 및 Sephadex G-75 column chromatography 를 행하여 정제한 결과 단일 단백질 band 를 보여 순수하게 정제되었음을 알 수 있었고, 단백질 분해효소를 처리한 결과 killer 활성이 소실되어 killer toxin 의 단백질 부분이 killer 활성을 나타냄을 알 수 있었다. 그리고 이 toxin 은 20.deg.C 에서는 거의 안정하였으나, 온도가 증가함에 따라 점차 활성이 소실되었고, pH 2.0-5.0 에서 비교적 안정하였다. 한편, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 결과 분자량은 약 13.000 임을 알 수 있었고, SDS polyacrylamide gel electrophoresis 를 행한 후 Schiffs reagent 로 염색한 결과 붉은 단일 band 를 보여 정제된 killer toxin 은 glycoprotein 임을 확인 할 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제9권4호
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• pp.213-218
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• 1981

순수분리정제된 $\beta$-galactosidase의 분자량은 Sephadex G-200 gel filtration법에서 130,000이며 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis에서 130,000외에 70,000이 확인되어 이 효소는 70,000인 2개의 subunit로 구성되어 있다고 판단되었다. 효소의 안정pH는 4.5~7.0이며 효소활성의 최적 pH는 4.7 최적온도는 5$0^{\circ}C$였다. 효소활성 및 안정제로 1가, 2가 금속ion을 필요로 하지않았으며 C $u^{++}$ 1mM에서 59%, galactose 100mM에서 48% 저해되었다. 5% lactose용액, 시유 및 10% skim milk 용액에 이 정제된 $\beta$-galactosidase 10units/$m\ell$를 사용하여 5$0^{\circ}C$에서 4시간 동안 반응시켰을 때 lactose가 각각 69.5%. 88.7% 및 72.6%가 glucose와galactose로 전환된 결과를 얻었다.

• 미생물학회지
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• 제35권3호
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• pp.231-236
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• 1999

Penicillium oxalicum 으로부터 세포외로 분비되는 Anabaena cylindrica 분해효소의 분자량은 renaturation SDS-PAGE에서 약 22kDa 으로 확인되었으며, 분해 효소의 농축은 ultrafiltration cut off fraction 중 30-10 kDa 구간에서 수획하였다. 최적 활성조건의 측정 결과 적정 pH는 3.5-4.0, 적정반응 온도는 $20^{\circ}C$, 그리고 온도 안정성은 $4^{\circ}C$ 이하에서 100% 이상, 20-$90^{\circ}C$ 범위에서는 50% 이상의 활성을 나타내었다. 금속이온 및 효소안정제의 영향에서는 $Na^+$,$K^+$, $Ba^(2+)$, $Mg^(2+)$, $Mn^(2+)$의 양이온과 BSA는 효소의 활성을 촉진시키는 반면, $Ca^(2+)$, $Cu^(2+)$의 양이온과 EDTA, PMSF 는 효소의 활성을 억제하는 작용을 하였다. 이러한 금속이온과 안정제의 영향에서 1가, 2가 양이온에 의해 활성이 증가하고, $Fe^(3+)$, $Ca^(2+)$, $Cu^(2+)$의 양이온에 의해서는 활성이 감소하는 결과는 대부분의 세포벽 분해효소가 갖는 특성과 유사한 결과였다. 분해효소는 A. cylindrica 과 Micrococcus. luteus 의 세포벽을 기질로 사용한 효소의 활성 반응에서 반응 시작 후 1시간에서 5시간 사이에 반응 산물로 환원당의 양이 급격히 증가하였다.