• 농촌의학ㆍ지역보건
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• 제16권1호
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• pp.79-89
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• 1991

A systematic study was conducted to identify and isolate a serologically pertinent antigen with high specific activity and low cross reactivity from Cysticercus parenchymal antigen. Differential centrifugation of the homogenate yield three particulate and one soluble fractions ; the $480{\times}G$ pellets($CyL_2$), the $7650{\times}G$ pellet($CyL_3$), the $100000{\times}G$ pellet($CyL_4$), and $100000{\times}G$ supernatant($CyL_6$). We compared antigenicity of these antigens to that or cystic fluid antigens($CyF_1$), saline extract of cystic wall($CyL_1$), and n-butanol treated $GyL_4$ antigen ($CyL_6$) based on SDS-PAGE and immunoblot techniques. The data obtained were as follows : 1) The ratio of O.D. value of ELISA against cysticercosis positive pool sera to that of negative pool sera was highest when using $CyF_1$ as antigen. However the ratio was relatively low in case of $CyL_{3.4}$ and $CyL_5$. 2) We have noted in previous paper that most strong antigenic activities are present in 63Kd band with low cross reactivities. An effective serologic reagent must contain components that are recognized by most infected sera. 63Kd band met this criteria and could be considered as a reliable band for the diagnosis of cysticercosis. As far as 63Kd band concern, $CyL_5$ showed most strong activities without disturbance of cross reaction by EITB in spite of low applicability to microplate ELISA. 3) $CyL_5$ could detect the serum antibody of cysticercosis even in very low titers, around cut-off values of microplate ELISA, by immunoblot. It also could detect the cross reactivities of Echinococcus species, which showed high absorbance value in micro plate ELISA and some sparganosis cases. Further purification of this antigen will be able to represents a antigen that can be used in the diagnosis of cysticercosis.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제25권2호
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• pp.129-136
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• 1997

Helicobacter pylori is a spiral-shaped, microaerophilic human gastric pathogen causing chronic-active gastritis in association with duodenal ulcer and gastric cancer. To investigate the possibility of H. pylori outer membrane proteins (OMPS) as the oral vaccine antigens, sarcosine-insoluble outer membrane fraction has been prepared from H. pylori NCTC 11637. The major OMPs having apparent molecular masses of 62 kDa, 54 kDa and 33 kDa were detected by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), which were identified as urease B subunit (UreB), heat shock protein (Hsp54 kDa) and urease A subunit (UreA), respectively. Minor protein bands of 57 kDa, 52 kDa, 40 kDa, 36 kDa and 31 kDa were also observed. The antigenicity of H. pylori OMPs and antigenic cross-reactivity among the strains were determined by immunoblot analysis using anti-H. pylori OMPs antisera or intestinal lavage solutions. The results showed that UreB, Hsp54 kDa, UreA and 40 kDa proteins vigorously stimulated mucosal immune response rather than systemic immunity. From this results, these proteins seemed to be useful as the antigen candidates for the oral vaccine. The immunoblotting results with surface proteins from eight isolated H. pylori strains were similar to that of H. pylori NCTC 11637. The IgA which had been arised from oral administration of H. pylori OMPs, was able to bind H. pylori whole-cells.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제31권1호
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• pp.43-48
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• 1993

요꼬가와흡충증은 주로 은어회를 먹어 감염되는 흡충증으로서 소장염(소장염)을 일으켜 피로 감, 복통, 설사 등 중상이 나타나며 말초혈액 호산구증가를 동반한다. 이 흡충중은 대변에서 충란을 검출하여 진단하나 급성 장염으로 발현하는 환자의 일부에서는 대변검사로 충란을 발견 할 수 없어 보조적인 진단으로 특이항체검사가 필요한 경우가 있다. 이 실험은 요꼬가와흡충증 의 특이항체검사의 가치를 검토하고 검사에서 항원으로 사용하는 피낭유충 생리식염수 추출액 내 특이항원 단백질을 찾기 위하여 실시하였다. 항원으로는 요꼬가와흡충 피낭유충의 추출액을 사용하였고 감염 및 대조혈청은 인상적으로 급성 요로가와흡충증으로 진단한 환자 11명, 간질 (간질) 환자 5명, 간흡충 환자 5명, 폐흡충 환자 5명과 대조군 11명의 것을 사용하였다. 항체 검사로 효소면역측정 법으로 특이 IgG항체를 검사한 결과 임상적으로 진단한 요꼬가와흡충증 환자 11명중 10명이 양성반응을 나타내었다. 요꼬가와흡충 항원에 대하여 다른 흡충 감염자 혈청도 교차반응을 보였으나 동종항원에 대하여 가장 높은 흡광도를 나타내었다. 따라서 특이항체검사에서는 여러가지 흡충항원에 대한 항체검사를 동시에 검사할 필요가 있다고 판단하였다. 항원 구성 단백질을 관찰하기 위하여 7.5-15% gel에서 SDS-PAGE한 결과 항원에서 주(주)단백질대 14개 이상을 구별할 수 있었다. SDS-PAGE/immunoblot을 실시하여 요꼬가와흡충증에서만 반응하는 특이항원대를 검색한 바, 항원 단백질대 대부분이 다른 흡충증 환자 혈청과 교차반응을 나타내었으나 66 및 22 kDa 단백질대는 교차반응이 제일 적어 특이항원 단백질이라고 판단하였다.

• 미생물학회지
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• 제35권1호
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• pp.7-12
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• 1999

Pseudomons sp. PY002의 exotoxin A 의 발현 양상을 관찰하기 위하여 P.aeruginosa PAO1의 anti-exotoxin A와 immunoblot hybridization을 실시한 결과 배지내에 유용 가능한 철이 고갈됨에 따라 exotoxin A의 발현양은 점차적으로 증가하는 양상을 보였으며, CAS 배지에 점적한 배양 상층액에서 siderophore의 발현양도 증가함을 보였다. P.sp.PY002 의 genomix library를 제조하여, exotoxin A를 분비하는 2개의 클론을 선별하려 pETA23과 pETA42 로 명명한 후, 반응성이 강한 Peta42를 선발하였다. pETA 42는 약 1.7kb 크기의 insert를 가지며, 양쪽 말단에 cloning site 인 pstI site 가 존재하며 2개의 NcoI, 1개의 PvuII, 1개의 SstI , 3개의 SmaI, 1개의 KpnI, 3개의 HaeII, 1개의 EcoRI site가 존재하였다.

• 생명과학회지
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• 제22권4호
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• pp.524-531
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• 2012

콩은 우리나라에서 과민성 알레르기를 일으키는 대표적인 식품 중의 하나로, 식품으로 섭취 시에 가열 및 발효가공을 통한 형태로 섭취한다. 이에 본 연구에서는 콩에 알레르기 반응을 일으키는 7명의 환아 혈청과 1명의 정상인 혈청을 이용하여 열처리 방법에 따른 품종별 콩(대풍, 대원, 태광)의 알레르기성에 미치는 영향을 조사하였다. 단백질을 추출하여 SDS-PAGE, immunoblotting 및 ELISA 방법을 통하여 반응성을 조사한 결과, SDS-PAGE 상에서 열처리하지 않은 세가지 품종의 경우 9-76 kDa 위치에서 다양한 단백질 밴드를 보였는데 특히 9, 21, 34, 52, 72 그리고 76 kDa의 단백질들은 각각 LTP, Kunits trypsin inhibitor, $Gly$ m Bd 30K, ${\beta}$-conglycinin의 ${\beta}$-subunit, ${\alpha}$-subunit와 ${\alpha}$'-subunit로 주요한 콩 알레르겐으로 알려져 있다. 반면에 볶은 콩, 발효한 콩에서는 35 kDa 이하로 완전히 분해되어 열처리 방법을 통해 단백의 항원성이 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. IgE immunoblotting 을 통한 세 가지 품종의 볶은 콩과 콩 알레르기 환아 혈청과의 반응에서는 공통적으로 38-40 kDa과 10-15 kDa에서 단백질 밴드를 보였으나 발효한 콩에서는 대부분 반응성이 약하거나 나타나지 않았다. ELISA 결과, immunoblotting 분석과 동일하게 대부분의 환아 혈청과 반응시에 볶은 콩과 발효한 콩에서 비교적 낮은 수치를 보였다. 결론적으로 콩에 존재하는 알레르겐 단백질은 열처리와 발효 미생물이 분비하는 단백질 분해효소에 의해 대부분의 환아에서 콩 단백질과의 반응성이 약화되는 것으로 사료된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제36권4호
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• pp.255-260
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• 1998

질편모충의 배양배지인 Diamond의 TPS-1 배지에서 3년간 배양한 질편모충 KT9 국내 분리주를 TYM 배지로 옮겨 1년간 배양하고 양쪽 배지에서 자란 질편모충의 증식, 병원성, 영양형의 크기, 단백질 성상 등을 비교하였다. 각 배지 원충의 generation time은 TYM 배지의 원충은 4.5시간이었고 TPS-1 배지의 원충은 7.1시간으로 TYM 배지에서 더 빨리 자랐다. TYM 배지에서 자란 원충의 크기가 TPS-1 배지에서의 영양형에 비해 유의하게 작았다. TYM 배지에서 배양한 원충은 10마리 마우스 중 9마리에서 피하 농양을 형성한 반면 TPS-1 배지에서 배양한 원충은 2마리에서 피하 농양을 형성하였고, 농양의 크기도 작았다. SDS-PAGE에서 10개의 단백분획이 공통적으로 관찰되었으며 TYM 배지의 원충에서는 136 kDa, 116 Da 및 40 kDa의 분획이, TPS-1 배지의 원충에서는 100 kDa 분획이 특징적으로 관찰되었다. Gelatin SDS-PAGE에서는 200 kDa과 70 kDa 사이에 10개의 gelatin 분획이 공통적으로 관찰되었으며, TYM 배지에서 배양한 원충이 TPS-1 배지에서 배양한 원충에 비해 gelatin을 많이 분해하였다. Bz-Pro-Phe-Arg-Nan를 기질로 사용하여 단백질분해효소활성을 측정하였는데 TYM 배지에서 배양한 원충의 단백질분해효소활성은 TPS-1 배지에서 배양한 원충에 비해 유의하게 높았다. 이 연구결과 질편모충의 배양에서 TPS-1 배지를 TYM 배지로 전환하였을 때 원충의 크기가 커졌고 단백질분해효소 활성이 증가하며 독력 (병원성)이 증가됨이 관찰되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제36권1호
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• pp.152-157
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• 2004

효소에 의한 단백질 분해로 우리 밀의 저 알레르겐화를 시도하기 위한 기초 연구로서 금강밀에서 gluten fraction을 추출하여 동물 실험을 통하여 경구 섭취된 gluten에 대한 항체 생성을 유도하였다. Gluten fraction은 UTH buffer로 추출하여 10-50kDa 사이의 분자량에서 여러 밴드가 확인된 분획을 얻었으며 약 25 kDa, 34 kDa 그리고 45 kDa 부근의 밴드가 주요하게 나타났다. 그리고, 경구 투여로 유도된 gluten에 대한 항체는 ELISA와 western blot의 항원-항체 반응을 실시하여 anti-gluten lgG, IgE를 확인하였다. 또한 경구 투여의 투여 시간 경과에 따라 항체가는 상승하였다. 추출된 gluten fraction은 bromelain, papain, ficin 그리고 b.p. protease 각 효소의 최적 pH와 온도에서 가수 분해하여 gluten fraction의 알레르겐 저감화를 시도하였다. 효소 분해 후 gluten fraction의 저분자화 정도는 anti-gluten 하체에 대한 ELISA를 실시하여 검토하였다. 그 결과 bromelain, papain, ficin의 경우보다 b.p. protease을 처리한 경우가 ELISA value를 크게 저하시켰다. 이것은 gluten fraction이 b.p protease 효소 가수분해에 의해 생성된 항체가 인식하는 amino acid 서열 (epitope)이 분해되었음을 나타낸 것이다. 마지막으로 b.p. protease의 분해능력을 1mg, 2mg, 3mg/10mL로 첨가량을 달리하여 검토한 결과 첨가량에 따른 변화는 거의 나타나지 않았다. 따라서 금강밀의 gluten fraction 10mL에 b.p protease 1mg으로 4시간 처리하여 단백질을 분해하여 우리밀의 항원성 저하 가능성이 탐색되었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제35권2호
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• pp.87-94
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• 1997

우리 나라에서 가장 감염자가 많은 기생충인 간흡충의 현 감염에 특이한 항원 분획을 찾고자 면역이적법을 이용하여 감염자의 혈청을 검색하였다. 실험적으로 토끼에서 얻은 간흡충 성충의 조항원에 시스테인계 단백질분해효소 억제제인 I-64를 첨가하였을 때 큰 분자량의 분획을 가장 잘 보존하여 200-14 kDa의 범위에 20개 이상의 분획을 관찰하였다. 이 조항원을 이용하여 경북 상주군 주민의 혈청을 면역이적법으로 검사하였다 대변검사, 피내반응검사, 효소면역법검사(ELISA)를 이 용하여 검사한 73명 중 충란양성자 49명의 혈청 내에 특이 IgG와 IgE 항체가 생성되었고, IgM과 IgA 항체는 특이하게 반응하지 않았다. 여러 항원 분획 중에서 43, 34, 28-25 kDa 항원이 현 감 염에 특이한 분획이고. 항체와 반응한 94, 80, 72, 68, 64, 62, 52, 47, and 40 kDa 분획은 특이하지 않은 분획임을 확인하였다. 추후에 각 항원과 이에 대한 혈청반응에 대하여 특성을 더 연구 할 필요가 있으며, 특히 치료후 추적검사를 통하여 혈청내 항체의 소실을 구명하여야 할 것이다.

• 대한한방내과학회지
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• 제24권1호
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• pp.113-122
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• 2003

Objective : The aim of this study was to evaluate the efficacy of Gagamchunggan-tang on anti-inflammation reaction with lipopolysaccharide (LPS)-induced HepG2 cell. Method : We examined the effects of the Gagamchunggan-tang, a traditional drug for liver inflammation, on the process of lipopolysaccharide(LPS)-induced nuclear factor-${\kappa}Bp65(NF-{\kappa}Bp65)$ activation in HepG2 cell. SDS-PAGE, Western blotting, Immunofluorescence staining were studied. Results : Immunoblot analysis showed that the level of nucleic $NF-{\kappa}Bp65$ was rapidly up-regulated and cytosolic inhibitory $I-{\kappa}B{\alpha}$ was down-regulated by LPS challenge. While Gagamchunggan-tang inhibited an increase of $NF-{\kappa}Bp65$ and degradation of $I-{\kappa}B{\alpha}$ in HepG2 cell. Besides LPS-induced expression of a group of genes, such as tumor necrosis factor-${\alpha}(TNF-{\alpha})$, inducible nitric oxide synthase(iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2), are repressed by Gagamchunggan-tang. It may be concluded that Gagamchunggan-tang attenuates the progress of LPS-induced inflammation by reduction of $NF-{\kappa}Bp65$ activation. Conclusion : The Gagamchunggan-tang would be useful as a therapeutic agent for endotoxin-induced liver disease.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제8권2호
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• pp.153-159
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• 2000

A novel serine/threonine protein phosphatase with EF-hand motif, which belongs to PPEF family was partially cloned from rat brain cDNA by employing RT-PCR method. The size of the amplified clone was 1.6kbp. The amplified DNA was subcloned into pGEM-T-Easy vector and the resulting plasmid was maned as pGEM-rPPEF2. The nucleuotide sequence is shared by 88% with that of mouse PPEF-2 cDNA, and the deduced amino acid sequence reveal 92% homology with that of mouse PPEF-2 cDNA. The N-terminal region of the cloned rat brain PPEF contains a putative phosphatase catalytic domain (PP domain) and the C-terminal region contains multiple $Ca^{2+}$ binding sites (EF region). The putative catalytic domin (PP) and the EF-hand motif (EF) regions were subcloned into pGEX4T-1 and were overexpressed in E. coli DH5 as glutathione-S-transferase (GST) fusion proteins. Expression of the desired fusion protein was identified by SDS-PAGE and also by immunoblot analysis using monoclonal antibody against GST. The recombinant proteins were purified by glutathione-agarose chromatography. This report is first to demonstrate the cloning of PPEF family from rat brain tissues. The clone reported here would be invaluable for the investigation of the role of this new type-phosphatase in rat brain.